小鼠气血双虚模型的复制

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[摘要] 目的：复制小鼠气血双虚动物模型。方法：采用失血法和环磷酰胺并用法复制气血双虚动物模型，通过观察小鼠的一般体征、外周血血象、胸腺及脾脏组织形态改变来观察模型的复制情况，并用当归补血口服液进行反证。结果：与空白对照组小鼠比较，模型组小鼠外周血象显著降低，胸腺脾脏均发生严重萎缩、皮质明显变薄、脾小结明显缩小、淋巴细胞数明显减少，当归补血口服液可明显对抗上述变化。结论：失血法和环磷酰胺并用法可成功复制出气血双虚动物模型。

[关键词] 小鼠；气血双虚；失血；环磷酰胺

[中图分类号] R-332[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）12（b）-009-02

The establishment of mouse model of deficiency of both qi and blood

FANG Xiao-yan1, CHENG Zai-xing2, MIAO Ming-san1

(1.Henan College of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou450008, China; 2.Fujian College of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou350108, China)

[Abstract] Objective: To establish the mouse model of deficiency of both qi and blood. Methods: Mouse model of deficiency of both qi and blood was established by releasing blood and injecting Cyclophosphamide, and the general physical signs, peripheral blood hemogram, and morphologic changes of thymus and spleen were observed to detect the establishment of the mouse model, and then Dangguibuxue Oral Solution was employed as the disproof. Results: Compared with the mice in blank control group, the level of peripheral blood hemogram of mice in model group was markedly decreased, and the thymus and spleen were severely depauperated, the thymus cortex was significantly thin, and the number of splenic corpuscle and thymus lymphocyte were obviously decreased. Dangguibuxue Oral Solution could considerably oppose the above changes. Conclution: The combination of releasing blood and injecting Cyclophosphamide can successfully establish the mouse model of deficiency of both qi and blood.

[Key words] Mouse; Deficiency of both qi and blood; Releasing blood; Cyclophosphamide

现代研究认为，气虚与机体免疫功能下降和能量代谢障碍密切相关，而血虚与现代医学中的“贫血”非常相似，表现为骨髓造血功能减退，血细胞生成减少。制备免疫功能低下动物模型通常选用一种或一种以上的免疫抑制剂(环磷酰胺、氢化可的松、环孢霉素A等)或辐射方法引起动物免疫功能低下[1]；制备血虚动物模型通常是采用失血法、化学试剂致血细胞溶血等方法使动物外周血红细胞或白细胞数量下降，或是采用化学试剂使动物骨髓抑制，减少外周血细胞的生成[2,3]。

用抗肿瘤药环磷酰胺造血虚模型，此方法简单易行，但其对红细胞的作用不如对白细胞的作用明显，且持续时间较短，如受试药物显效较慢，模型动物的血象可自然恢复，甚至出现反跳。放血可造成比较好的血虚模型，但免疫功能变化不大，本实验对原有的血虚模型进行改进，采用失血法和环磷酰胺并用法复制气血双虚动物模型。动物在因失血而造成血虚的基础上同时伴有气虚，即气随血脱；而免疫抑制剂环磷酰胺在造成动物免疫功能低下的同时又抑制了骨髓的生长，减少了外周血(特别是WBC和PLT)的生成，二者相互为用，从而从双重环节上造成动物气血双虚，表现为全血细胞数量的下降和重要免疫器官胸腺、脾脏的萎缩，采用此方法造模，血虚状态的持续时间相对较长，有利于检验药物的作用与作用机制。现将此模型的复制介绍如下：

1 材料与方法

1.1 实验动物

小鼠，昆明品种，由河南省医学实验动物中心提供。

1.2 药品

当归补血口服液，郑州市协和制药厂生产，批号010301；环磷酰胺，上海华联制药有限公司生产，批号010312。

1.3 造模方法

取小鼠30只，体重20～22 g，随机均分为3组：空白对照组，造气血双虚模型两组，进一步分为气血双虚模型组和治疗气血双虚的代表方当归补血口服液组。造模的两组动物于第1天尾部放血0.5 ml/只，从第5天起，每天腹腔注射环磷酰胺(CY)40 mg/kg，连续4 d，于第10天检测小鼠外周血象，取胸腺和脾脏，观查组织形态。

2 结果

2.1 动物的一般体征

模型组小鼠在放血的第2天就出现行动迟缓现象，于注射CY的第3天出现蜷缩、弓背、毛蓬竖、少光泽、喘促等体征，与正常小鼠有明显区别。解剖观察动物的胸腺、脾脏明显缩小，与正常小鼠有明显差别。给当归补血口服液可明显改善模型小鼠体征和胸腺及脾脏的萎缩。

2.2 模型动物外周血血象

失血与环磷酰胺并用对小鼠血象的影响见表1。

从表1可以看出，与空白对照组比较，模型组小鼠RBC、WBC、Hb、PLT水平均显著降低(P

2.3 模型动物病理组织形态

失血和环磷酰胺并用对小鼠胸腺、脾脏组织形态的影响见表2、3。

从表2可以看出，与空白对照组比较，模型小鼠胸腺皮质厚度和皮质细胞数均显著降低，说明免疫功能显著降低。与模型组比较，当归补血口服液可明显增加胸腺皮质厚度和皮质淋巴细胞数，改善模型动物的胸腺病理组织情况。

从表3可以看出，与空白对照组比较，模型组脾小节和淋巴细胞数均降低，说明免疫功能显著降低。与模型组比较，当归补血口服液组可显著增加脾小节和淋巴细胞数。

病理组织形态结果表明，气血双虚模型组胸腺显著萎缩，皮质明显变薄，皮质细胞数减少，细胞稀疏；脾小节明显缩小，淋巴细胞明显减少，说明造模型小鼠的免疫功能显著下降，可认为造气虚模型成功。当归补血口服液可明显改善模型小鼠胸腺和脾脏的萎缩情况，改善机体免疫功能。

3 讨论

中医药研究动物模型的复制一般有病因模型和病理模型，中医临床病证是多方面的，为了能更好地反映临床，动物模型的复制采用复合式造模方法从多环节使动物模型更接近临床病症[4]。本模型采用失血和环磷酰胺并用的方法复制气血双虚动物模型，动物在因失血而造成血虚的基础上同时伴有气虚，即气随血脱；而免疫抑制剂环磷酰胺在造成动物免疫功能低下的同时又抑制了骨髓的生长，减少了外周血(特别是WBC和PLT)的生成，二者相互为用，从而从双重环节上造成动物气血双虚。

与空白对照组小鼠比较，模型组小鼠外周血象显著降低，且表现为明显的气虚体征，解剖发现，其重要的免疫器官胸腺、脾脏均明显小于空白对照组；脏器组织切片镜检结果表明模型组各小鼠胸腺、脾脏均发生严重萎缩、皮质明显变薄、细胞稀疏、脾小结明显缩小、淋巴细胞数明显减少，说明模型组小鼠的免疫功能显著下降。气血双虚的代表方当归补血口服液可明显改善本模型的气血虚状况，使血象水平明显恢复，明显对抗模型所致的免疫器官的萎缩，从而反证了该模型的成功，因此认为该气血双虚动物模型复制成功。

[参考文献]

[l]苗明三.实验动物与动物实验技术[M].北京:中国中医药出版社,1997.190-192.

[2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1992.1010.

[3]陈小铮.使用中医证候动物模型学[M].北京：北京医科大学,中国协和医科大学联合出版社,1993.304.

[4]金若敏,宁炼,陈长勋.血虚模型动物制备及当归补血汤的作用研究[J].中成药,2001,23(4):268-271.

(收稿日期：2008-11-20)

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