固相萃取―高效液相色谱法测定鸡蛋中苏丹红染料
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摘要 建立了鸡蛋中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ残留测定的高效液相色谱方法。样品经苏丹红专用SPE小柱净化、浓缩，Waters SymmetryShield C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱进行分离测定。本方法的检测限为0.1 mg/kg，4种苏丹红染料在浓度1～1 000 mg/L范围内与峰面积呈线性相关。在空白鸡蛋中添加20～600 mg/kg浓度下，4种苏丹红的平均回收率为88.6%～101.0%，结果表明，该法简单、灵敏、特异性强，缩短了分析时间，提高灵敏度，节约试剂，降低成本，适用于鸡蛋中苏丹红染料残留的测定。
关键词 鸡蛋；苏丹红；固相萃取；高效液相色谱
中图分类号 O652.63；TS207.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）14-0291-01
苏丹红属偶氮系列染料，是一种有毒色素，并非食品添加剂，目前已确认了其有机偶氮染料的毒性。“红心鸭蛋”事件之后，我国已经重点监测包括鲜鸡蛋在内的各类蛋制品，而苏丹红是其中一项重点检测的内容[1-5]。迄今为止，主要通过高效液相色谱法、GC-MS分析法检测食品中苏丹红染料，《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法（GB/T 19681-2005）》主要适用于辣椒及其制品、香肠等肉制品中苏丹红染料的检测。试验结果显示，鸡蛋中4种苏丹红染料的回收率不理想，达不到鸡蛋中苏丹红检测的要求。因此，本研究旨在通过改善提取净化条件，建立一种操作步骤简单，同时提高鸡蛋中4 种苏丹红染料回收率的液相色谱测定方法[1-3]。
1 材料与方法
1.1 材料、仪器与试剂
1.1.1 供试材料。试验材料为鸡蛋。
1.1.2 仪器与试剂。美国Waters 2695型液相色谱仪带Waters2475型荧光检测器，SC-8L-150型固相萃取仪，美国OA-SYS氮吹仪，德国IKA GENIUS 3漩涡混合器，上海科导SK5200H超声波清洗机，美国梅特勒-托利多ML204电子天平，德国赛多利斯超纯水仪，上海安谱公司苏丹红专用SPE小柱（500 mg/6 mL）。德国DR.公司苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 标准品（99.6%）。二氯甲烷、正己烷、乙腈为色谱纯。
1.2 试验方法
1.2.1 标准品配制。具体包括：①标准储备溶液的配制。精密称取按其纯度折算为100%质量的标准品各0.100 g，置100 mL容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，配成1.00 mg/mL溶液[1-5]。4 ℃冰箱保存。②标准工作溶液的配制：根据需要准确移取相应标准储备液，用水稀释成1.0、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/mL的系列标准工作溶液[1-7]。
1.2.2 提取。称取均匀试样2 g（精确至0.001 g），加入3 mL正己烷漩涡混合10 s，待净化。
1.2.3 净化洗脱浓缩。苏丹红专用SPE小柱使用前依次用5 mL二氯甲烷、5 mL正己烷活化。将待净化液上样到小柱上，然后再用2 mL正己烷润洗样品瓶，也上样到柱上，保持1.0 mL/min流速过柱。用10 mL正己烷淋洗小柱，流出液弃去。用5 mL二氯甲烷洗脱小柱，收集洗脱液，40 ℃氮气吹干，1 mL乙腈定容，超声1 min，漩涡混合10 s，过0.22 μm亲水PTTE针式滤器过滤，上机检测[4-6]。
1.3 色谱条件
Waters SymmetryShield C18 色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱温35 ℃，流动相为乙腈，流量1.0 mL/min，检测波长485 nm，进样量10 μL[7-9]。
2 结果与分析
2.1 固相萃取小柱的选择
试验比较了安谱苏丹红专用SPE小柱和人工填装的中性氧化铝柱。采用商业固相萃取柱，与自己填装的氧化铝柱相比，不需要进行复杂的活度调节和活性测试，节省大量时间，稳定性好，整个检测操作时间不超过1 h，溶剂使用量少，回收率较高。标准品、空白样品添加标准品图谱如图1所示。
2.2 流动相的确定
采用甲醇―水、乙腈―水、100%乙腈、100% 甲醇等作为流动相，经过试验比较，最后采用100%乙腈作为流动相。这是因为此条件下流动相配制简单，分离效果较好，且保留时间适中。
利用本方法对市售的10种样品进行检测，由分析结果可知，苏丹红均未检出。
2.4 检出限、线性范围、回收率和精密度
按3倍信噪比计算，方法的检出限约为0.1 mg/kg。根据上述色谱条件对系列标准工作溶液进样分析，以峰面积定量，得到标准溶液浓度与峰面积之间的线性回归方程，如表1所示。取空白鸡蛋样品8份，按3个加标水平加标，按上述条件前处理和色谱条件上机测试，测定苏丹红的加标回收率88.6%～101.0%，相对标准偏差均小于2%，精密度良好，满足分析要求。
3 结论与讨论
本方法采用成品商业固相萃取柱对鸡蛋中苏丹红染料进行净化、提取，用高效液相色谱仪进行测定，快速、准确率高、简便、重现性好，线性关系、精密度和准确度均理想，能更好地满足实验室分析检测，具有较高的实际应用价值。
4 参考文献
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