散发性视神经病变线粒体DNA11778位点突变检测

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇散发性视神经病变线粒体DNA11778位点突变检测范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

【中图分类号】R77【文献标识码】A

【文章编号】2095-6851（2014）05-0470-02

Leber遗传性视神经病变（LHON）是线粒体DNA（mtDNA）突变所致的母亲遗传病。发病年龄较早，躲在青少年时期发病，一般男性多于女性，表现为视神经坏死后产生的双侧中央视力快速丧失[1]，目前发现3个原发突变位点11778，14484，3460和10多个继发位点9804，13708，13730，15257这4个继发位点的发生率较高。继发位点可以单独，联合或者协同原发位点引起LHON发生[2]。其中11778位点突变率最高[3]。现将一组散发视神经病变患者进行mtdna11778位点突变检查，结果报告如下。

1.对象和方法

1.1对象

散发性原因不明的视神经病变15例，男性10例，女性5例。发病年龄6-19岁8例，20-25岁4例，26-30岁2例，33岁1例。双眼13例，单眼2例。急性球后视神经炎2例，急性视神经炎2例，视神经萎缩11例。

视力0.06-0.1者12例，0.2者2例，0.4者1例。

RAPD阳性12例

眼底呈现不同程度视神经萎缩11例，眼底正常2例，有视神经充血，边界不清2例。

视野检查12例，其中10例有中心暗点，1例有哑铃型暗点，1例周边视野缺损超过30°。

15患者皆行视诱发电位（VEP）检查，呈现不同程度P100潜伏期延长，振幅下降。

所有患者进行头CT或者MRI检查，排除颅内占位性病变，并且病史中无任何药物中毒史。

1.2方法

1.2.1 DNA提取：提取所有受检者外周血2-5ml EDTA-K2抗凝。酚-氯仿法提取基因组DNA（含mtDNA）。

1.2.2PCR扩增

引物序列：上游5’-AGC CCT CGT AGT AAC GCC A（L链第11641-11660）

下游5’-GGG GTA TAG GGC TGT GAC TA （H链第11980-11961）

片段长度340bp

反应体系：反应总体积25μl含基因组DNA0.5-1.0μl

Taq DNA聚合酶0.5IU

上，下游引物各1μmol/l

dNTP，MgCL2浓度分别为0.2mmol/l， 25mmol/l

10*PCR反应缓冲液25μl

反应条件：95℃ 2min后按照95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 40s反复循环30次之后72℃ 5min结束PCR

结果判定：取PCR产物10μl，1.5%琼脂糖凝胶电泳，以同时出现222bp特异性片段以及500bp对照片段为阳性结果（存在11778突变位点），仅出现500bp片段为阴性结果（无11778突变位点）。

2结果

测序存在11778位点GA突变阳性有6例，占40%，且均为纯合性突变。

3.讨论

LHON主要与呼吸链复合物NADH脱氢酶亚单位MT-ND411778位点的病理性原发突变有关[4]。日本为95%，东南亚94.7%，美国为50-80%，欧洲为50%[5]。本组15例散发性原因不明的视神经病变行血液mtDNA11778位点检测结果有6例阳性，占40%，其中视神经萎缩11例，其中6例为阳性，充分提示原因不明的视神经萎缩行血液mtDNA检查的重要性。研究结果表明，日本人原发突变位点11778突变频率远高于欧洲人，已成为日本国诊断LHON不可缺少的依据之一。我国11778突变位点阳性率高于欧洲，因而mtDNA11778位点突变检测可以作为国人散发性原因不明视神经炎以及可以Leber病常规检查手段，如为阳性，虽未发病亦应随访。

参考文献

[1]Howe IT N. Leber hereditary optic neuropathy. How do mitochondrial DNA mutation cause degeneration of the optic nerve. J Bioenerg Biomemb， 1991，29（2）：165.

[2]Fauser S， Lnberchs J， Besch D， et al. Sequence analysis of the complete mitochondrial genome in patients with Leber’s hereditary optic neuropathy lacking the three most common pathogenic DNA mutation. Bio chem. Biophys RES Common. 2002，295；342-347.

[3]Newn N J， Lott MT， Wallace DC. The clinical character istics of pedigrees of Leber’s hereditary optic neuropathy with the 11778 mutation. Am J Ophthalmol 2001，111（6）；750.

[4]Kim JY， Hwang M， Chang BL， et al. Spectrum of mitochondrial DNA mutation of Leber’s hereditary optic neuropathy in Koreans. J Neural. 2003，250：278-281.

[5]Wallace DC， Curparkash S， Maris T， et al. Mitochondrial DNA mutation associated with Leber’s hereditary optic neuropathy. Science.1988，242：1427-1430