电针足三里穴对兔单肺通气所致氧化应激反应的影响
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摘 要：目的：观察电针足三里对兔单肺通气期间氧化应激途径及肺损伤程度的影响。方法：健康成年新西兰兔39只，随机分为3组（n=13）：电针非穴位组（EN组）、电针穴位组（EP组）、对照组（C组）。麻醉后气管切开，插入气管导管，双肺通气30min后，行右肺单肺通气，3 h后重新恢复双肺通气。EN、EP两组于单肺通气开始时实施电针刺激，EN组取双侧足三里穴旁1cm处， EP组取双侧足三里穴处。实验结束后处死动物，测定肺组织丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）和超氧化物歧化酶（SOD）含量，观察肺组织病理形态学，计算肺组织湿/干重比（W/D）。结果：EP组与其他两组比较，MDA明显降低（P
关键词：单肺通气；氧化应激；电针；足三里
中图分类号：R246文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2738-03
Effect of Electroacupuncture of “Zusanli”(ST 36) on Oxidative
Stress Rseponse by One Lung Ventilation
REN Qiusheng1,CHEN Xueqin1,WANG Junlu2,BAO Fengfeng1,JIANG liuming2
(1.Yinzhou People's Hospital,Ningbo 315040,Zhejiang，China;
2.First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College,Wenzhou 325000,Zhejiang，china)
Abstract:Objective:To observe the effects of electroacupuncture of "Zusanli"(ST 36) on oxidative stress rseponse and lung injury degree during one lung ventilation. Methods:39 healthy New Zealand rabbits were randomized into three groups (n=13):electroacupuncture at no point group (EN)，electroacupuncture at Zusanli points （EP）and control group (C ). Tracheostomy was performed following with anesthesia, and endotracheal tube was inserted. Two lungs were ventilated for 30 min, followed by single right lung ventilation for 3 h, by two lung ventilation. electroacupuncture were administered in group EN and group EP when one lung ventilation began. Electroacupuncture was stimulated at somewhere 1 cm nearby Zusanli in group EN, at Zusanli points in group EP . Animals were executed at end, determined the MDA，GSH-PX，SOD level in the lung tissues , observed the pathomorphology of the lung, calculated the wet/dry of the lung.Results:Compared with other groups, MDA was reduced significantly and GSH-PX and SOD levels were increased in group EP（P
Key words:One lung ventilation；Oxidative stress；Electroacupuncture；Zusanli(ST 36)
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收稿日期：2011-06-30
基金项目：宁波市医学科技计划项目（2008029）
作者简介：任秋生（1971-），男，河南焦作人，副主任医师，硕士，研究方向：中西医结合麻醉学。
通讯作者：王均炉（1965-），男，浙江台州人，教授、主任医师，研究方向：中西医结合麻醉学。单肺通气虽然可以给开胸手术带来良好的手术野，但亦可通过多种途径引起肺损伤，其中氧化应激反应是其重要机制之一\[1\]。Huang等\[2-4\]研究发现，针刺足三里可以通过多种途径对脂多糖或缺血再灌注诱发的急性肺损伤有保护作用。电针足三里对单肺通气所致肺损伤的作用尚有待于进一步研究，本研究拟观察电针足三里穴对兔单肺通气氧化应激反应及肺损伤的影响。
1 材料和方法
1.1 动物选择及分组 健康成年雄性新西兰大白兔39只（由温州医学院动物实验中心提供），体重1.9~2.5 kg。随机分为3组（n=13）：电针非穴位组（EN组）、电针穴位组（EP组）、对照组（C组）。
1.2 单肺通气肺损伤模型建立 新西兰大白兔肌肉注射氯胺酮25mg／kg麻醉下，开放耳背静脉，输注乳酸钠林格氏液。气管切开，插入内径2.5mm的带囊气管导管，接Newport E150型呼吸机（New -port Medical Instrument公司，美国）机械通气，股动脉、股静脉穿刺置管，用于监测动脉压和采集血样。双肺通气30min后，采用气管导管过深插入法插入右主支气管行右肺单肺通气，胸前听诊确认单肺通气成功实施，并定时检查气管导管深度以防移位；单肺通气3h后重新恢复双肺通气。呼吸参数设置：吸入氧浓度1.0，吸呼比1∶ 2；双肺通气时潮气量10mL／kg，呼吸频率35次／min；单肺通气时潮气量7mL／kg，呼吸频率55次／min。麻醉维持：按需间断静脉注射地西泮1mg、芬太尼0.025mg和阿曲库铵10mg。
1.3 电针实施方法 双后肢剪毛备皮，取双侧外膝眼下约1.5~1.8cm、胫骨嵴旁开0.5cm处为足三里穴。EN组取双侧足三里穴旁1cm处， EP组取双侧足三里穴处，垂直进针约1cm，连接Neuro-trace Ⅱ system神经刺激仪（HDC公司，美国）。两组电针刺激均于单肺通气开始时实施，直至单肺通气结束。刺激电流为3 Hz脉冲，以双后肢微颤强度为宜（电流0.85~1.25 mA）。
1.4 观察指标 1）平均动脉压（Mean Arterial Pressure,MAP）及心率（Heart Rate,HR）：分别于双肺通气开始、30min及单肺通气开始、1h、2h、3h记录MAP、HR。2）肺组织丙二醛（Malondialdehyde, MDA）、谷胱甘肽过氧化酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）和超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）含量：单肺通气改双肺通气1h处死动物，取部分左肺下叶，制备10%组织匀浆，采用比色法测定MDA、MPO、SOD水平（南京建成生物工程研究所试剂盒），操作严格按照说明书进行。3）肺组织病理形态学：取部分左肺下叶组织，10%甲醛溶液固定后，制备常规石蜡切片，行HE染色，光镜下观察肺组织病理学。4）肺组织湿/干重比（W/D）：取左肺上叶组织，生理盐水去残血，滤纸吸干水份，称重后烘干72h，计算肺组织W/D。
1.5 统计学分析 应用SPSS 13.0软件包进行统计学分析。计量资料以±s表示，组内各时点比较采用双因素方差分析，组间各时点参数比较采用单因素方差分析。P
2 结 果
2.1 3组兔单肺通气前后MAP、HR比较 3组兔MAP、HR在双肺通气开始即刻及单肺通气即刻、1h、2h、3h时点均无明显变化（P>0.05），且各时点组间比较差异亦无统计学意义（P>0.05），见表1。
2.2 3组兔肺组织MDA、GSH-PX和SOD含量比较 EN组与C组比较，两组MDA、GSH-PX和SOD无明显差异（P>0.05）；EP组与C组比较，MDA明显降低（P
注：与C组比较,P
2.3 3组兔肺组织病理形态学比较 EN组和C组有肺间质及肺泡轻度水肿、岀血，尤其在支气管周围和胸膜下区域，中性粒细胞浸润明显；EP组肺间质及肺泡水肿和岀血少见，仅见少量中性粒细胞浸润，见图1。
图1 3组兔肺组织病理形态学比较2.4 3组兔肺组织湿/干重比（W/D）比较 EN、EP、C组3组W/D分别为4.75±0.35、4.14±0.29、4.67±0.41，EN组和Ｃ组两组比较差异无统计学意义（P>0.05），而EP组W/D明显低于其他两组（P
3 讨 论
单肺通气期间常吸入高浓度氧气来避免低氧血症的发生，但亦促使氧自由基的产生及清除状态失衡，自由基等活性氧物质增加，引起DNA等分子水平直至细胞膜的破坏，引起肺血管痉挛、肺泡上皮变性、坏死，毛细血管通透性增加，进一步导致肺间质和肺泡的水肿、出血、炎性细胞浸润等\[1\]。肺的萎陷与复张也会促进严重的氧化应激反应，加重肺损伤\[5\]。单肺通气所致肺损伤的程度与单肺通气持续时间相关\[6\]。本研究单肺通气肺损伤模型通气期间采用吸入氧浓度1.0，单肺通气3h后再双肺通气1h，兼顾了吸入高浓度氧、萎陷再复张及较长时间单肺通气等危险因素，具有良好的模拟基础。
MDA是氧自由基作用于多聚不饱和脂肪酸的脂质过氧化产物，是反映氧化应激状态的重要指标，可以反映氧自由基量与脂质过氧化反应的强度，间接地反映细胞氧化损伤的程度，且其与单肺通气的应用及持续时间密切相关\[7\]。GSH-PX可以分解H2O2，而且能使脂质过氧化物变成无毒的羟化物；SOD可以清除过氧化物、羟基及过氧化氢等物质，GSH-PX和SOD均为肺组织中重要的抗氧化剂\[8\]。Yu YP等\[9-10\]研究发现，针刺阳陵泉、足三里、太冲等穴位可以减少6-羟基多巴胺缺失及多发性脑梗塞大鼠模型的氧化应激反应。贺必梅等\[11\]在结肠癌根治术中使用头针，治疗组SOD明显高于对照组，患者氧化应激反应状态降低。苏跃等\[3\]对兔缺血再灌注模型实施电针足三里，观察到肺组织中MDA明显减少，推断电针足三里可以通过降低脂质过氧化反应来减轻缺血再灌注肺损伤。本研究EP组MDA明显低于其他两组，GSH-PX和SOD明显高于其他两组，说明电针足三里可以改善过氧化失衡状态，减少脂质过氧化反应。
单肺通气可以使机体肺间质及肺泡出现炎性细胞渗出，继而可能引起灶性肺不张、肺气肿，及肺间质水肿、岀血等。本研究3组兔肺组织病理形态学检查发现，EP组肺间质炎性渗出明显少于其他两组，并且未见明显的岀血、水肿，说明电针足三里可以减轻单肺通气引起的病理形态学改变。肺W／D常用来评价肺组织含水量，可较好地反映肺间质及肺泡血管通透性改变的程度。本研究中EP组W／D明显低于EN、C组，提示电针足三里组肺组织含水量较少，即单肺通气后肺间质、肺泡水肿和岀血程度较轻，与上述3组兔肺组织病理形态学结果相一致。
电针足三里可以调控单肺通气时氧化应激反应的机制可能与其穴位的组织结构有关。足三里又名下陵，为足阳明胃经之合穴，具有益后天而养先天、调脾胃而运中洲、强身体而延年寿之效。其周围微血管分支、神经分支及淋巴分支十分丰富，针刺可以通过神经或体液途径来维持神经-内分泌-免疫网络系统的平衡状态\[12-13\]。
综上所述，电针足三里可以通过抑制氧化应激反应来减少单肺通气引起的肺损伤。
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