频率电针对晚孕老鼠激素的影响
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本文作者：朱玲 杨芳 金春兰 马良宵 陈滢如 苑鸿雯 朱江 单位：北京中医药大学针灸推拿学院 煤炭总医院中医科 辽宁中医药大学 中国中医科学院针灸研究所
难产、过期妊娠是妊娠过程中严重威胁母婴安全的重要问题，在这种情况下需要采取主动的促分娩措施，以保证母婴的安全。无论是古代医家针灸下胎的用穴，还是现代妇产科临床引产催产用穴，合谷、三阴交都是针刺下胎的经典对穴，现代临床中常用电针合谷、三阴交以增强针刺促分娩的作用［1－2］。针刺手法是决定针刺疗效的一个重要因素，在电针治疗中常通过改变电针的各种刺激参数来模拟不同的针刺手法。前期实验研究结果表明［3－5］，不同电针波形及留针时间对晚孕大鼠子宫收缩活动和内分泌的影响不同，说明电针刺激参数对针刺效应有明显影响。本实验旨在观察不同频率电针晚孕大鼠“合谷”“三阴交”穴对大鼠血清雌二醇（E2）及孕酮（P）含量、血栓素A2（TXA2）及前列环素（PGI2）及E2／P、TXA2／PGI2比值的影响，探讨不同频率电针对晚孕大鼠内分泌水平的影响。TXA2和PGI2很不稳定，半衰期分别为15s和3min左右，目前难以直接测定。常以测定它们的代谢产物血栓素B2（TXB2）和6－酮－前列腺素（6－keto－PGF1α）作为判断其浓度的指标。
1材料与方法
1．1动物与分组选用8周龄Wistar大鼠（中国人民军事医学科学院实验动物中心提供，清洁级，动物许可证号：SCXK（军）2007－004），雌性66只，体质量180～220g；雄性7只，体质量250～300g。实验过程中对动物的处置遵照科技部2006年颁布的《有关善待实验动物的指导性意见》。将雌鼠随机分为6组，每组11只。正常组：不受孕，不针刺；模型组：受孕，不针刺，于受孕第19日采血；电针组：受孕第19日，分别予2Hz、20Hz、50Hz、100Hz电针刺激后采血。
1．2主要试剂与仪器WQ1002F型韩氏多用电治疗仪（北京安隆新技术公司）；E2放免试剂盒、P放免试剂盒、TXB2放免试剂盒、6－keto－PGF1α放免试剂盒（北京华英生物技术研究所提供）；ZK380型低温冷冻离心机（德国）；GC－911－γ－放射免疫计数器（中国科技大学科技实业总公司）。
1．3各组处理方法造模方法：除正常组之外的其它大鼠制备妊娠模型。采用托盘法，将雌鼠与雄鼠按照1∶1比例合笼，每笼1对大鼠。每日上午检查托盘内有无阴栓。若发现阴栓，则该笼雌鼠记为受孕，将该笼雌鼠取出，当日记为妊娠第1天，然后笼内放入另一只雌鼠。雌鼠所排阴栓数多为1～4个，呈不规则楔形，直径约3～5mm，色乳白或淡红。各电针组取穴“合谷”“三阴交”穴，参照《实验针灸学》［6］大鼠标准穴位图谱，“合谷”穴位于前肢第一、二掌骨之间，“三阴交”穴位于后肢内踝尖直上10mm处。各电针组分别于妊娠第19日进行针刺。10％水合氯醛（0．35mL／100g）腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位固定，取双侧“合谷”穴及“三阴交”穴，用0．28mm×25mm毫针针刺，进针约2～3mm。使用WQ1002F型韩氏多用电治疗仪，先电针双侧“合谷”穴20min，再电针“三阴交”穴5min，共留针25min，同一对正负极连接同侧“合谷”“三阴交”穴，强度以引起大鼠肢体轻微抖动为度，约为1～2mA，按照分组选择相应频率。
1．4观察指标及检测方法各电针组于电针后60min采血。各组大鼠剖腹暴露腹腔，自腹主动脉采血，4℃静置30min后，使用ZK380型低温冷冻离心机离心（3000r／min）15min，分离血清，低温保存待测。根据试剂盒说明，用GC－911－γ－放射免疫计数器检测血清E2、P、TXB2、6－keto－PGF1α含量，并计算血清E2／P和TXB2／6－keto－PGF1α比值。
1．5统计学处理采用SPSS统计软件进行统计学处理，所有数据均采用均值±标准差（x珚±s）表示。组间比较采用单因素方差分析，继以LSD检验比较两组之间的差异。以P＜0．05作为差异具有统计学意义的标准。
2结果
图1所示，与正常组比较，4个电针组血清E2含量均显著升高（P＜0．001，P＜0．01，P＜0．05）；模型组与正常组比较，血清E2含量差异无统计学意义（P＞0．05）；与模型组比较，2Hz、20Hz电针组血清E2含量显著升高（P＜0．05）；各电针组血清E2含量比较差异无统计学意义（P＞0．05）。图2所示，与正常组和模型组比较，4个电针组血清P含量差异无统计学意义（P＞0．05）；模型组与正常组比较血清P含量差异无统计学意义（P＞0．05）；各电针组血清P含量比较，100Hz电针组较20Hz和50Hz组显著增高（P＜0．05）。图3所示，与正常组比较，2Hz和50Hz电针组E2／P比值均显著增高（P＜0．05）；模型组与正常组比较E2／P比值差异无统计学意义（P＞0．05）；4个电针组和模型组E2／P比值差异无统计学意义（P＞0．05）；各电针组E2／P比值比较差异无统计学意义（P＞0．05）。如图4、图5所示，与正常组比较，2Hz、20Hz、50Hz电针组血清TXB2含量均显著升高（P＜0．001，P＜0．01）；与模型组比较，2Hz、50Hz电针组血清TXB2含量显著升高（P＜0．01，P＜0．05）；各电针组血清TXB2含量比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与正常组比较，4个电针组及模型组血清6－keto－PGF1α含量均显著升高（P＜0．01，P＜0．05）；与模型组比较，4个电针组血清6－keto－PGF1α含量差异无统计学意义（P＞0．05）；各电针组血清6－keto－PGF1α含量比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与正常组及模型组比较，4个电针组TXB2／6－keto－PGF1α比值差异无统计学意义（P＞0．05）；各电针组TXB2／6－keto－PGF1α比值比较差异无统计学意义（P＞0．05）。
3讨论
E2和P是与分娩密切相关的两种内分泌激素，二者含量的变化是分娩发动的重要因素之一。E2是由卵巢成熟滤泡分泌的一种天然雌激素。E2能促进子宫肌细胞内钾离子聚集，增强子宫肌细胞的电传导性，增加细胞膜对钙离子的通透性［7］，增加子宫肌细胞缝隙连接［8］，促使催产素受体增加［9］，从而增强了子宫对催产素的敏感性；抵消P对子宫的稳定作用，起到兴奋子宫的作用。P则抑制E2的作用，降低子宫的兴奋性。P抑制子宫收缩的机制可能包括：稳定子宫蜕膜及肌层细胞的溶酶体，并激活腺苷酸环化酶，降低胞质内游离钙水平，使子宫肌细胞处于松弛状态［10］；降低子宫的自发工作电位，使静息电位增加；抑制缝隙连接蛋白的合成，降低子宫肌兴奋的传导等。由于E2与P在分娩发动中起对抗作用，当E2／P值升高达一定程度时，雌孕激素之间的平衡关系被打破就会触发宫缩［11］。秦正玉等［12］研究表明电针三阴交可明显升高血清E2含量。本实验结果显示，2Hz、20Hz电针有升高晚孕大鼠E2含量的作用。4个电针组中100Hz电针可升高血清P含量。血清E2／P比值2Hz和50Hz电针组较正常组显著增高，提示2Hz和50Hz电针均有触发宫缩的趋势。TXA2和PGI2均为花生四烯酸衍生物，是一对相互拮抗又相互调节的血管活性物质。妊娠期间，胎盘作为一个重要的内分泌器官，是TXA2和PGI2的重要来源。Shellhaas等［13］发现在胎盘组织中，TXA2主要由滋养细胞生成，而PGI2则由绒毛毛细血管内皮生成。其对子宫胎盘血流调节作用也有所不同，TXA2主要影响胎盘母体面的血流，而PGI2则主要影响胎儿面的血流。妊娠期间二者的比值影响着妊娠相关组织的血液供应，对妊娠的维持有重要作用。PGI2主要分布于子宫内膜、蜕膜、胎盘、卵巢、羊水及经血中［14］。目前比较一致的观点认为妊娠期间丙二醇生成增加，维持子宫胎盘血管紧张度，以适应孕期血供需要增加的变化，防止血栓的形成［15］。刘喆研究发现［16］针刺具有促羊膜分泌前列腺素的功能，前列腺素含量增加，促使子宫肌层间隙连接数目增多和大小改变，使子宫肌层的收缩波易于传播，启动分娩。Cruz等［17］研究发现，高TXA2可能导致胎儿胎盘血流动力学调控异常，使血管紧张度平衡关系受损，诱发宫缩引起早产。本研究结果发现，2Hz和50Hz组电针可升高晚孕大鼠血清TXB2含量及血清E2／P比值，提示2Hz和50Hz电针均有触发宫缩的趋势。子宫收缩的参数包括强度、频率、基础张力、持续时间和波型等，单纯测量以上各指标均有局限性，而子宫收缩力则能较综合地反映宫缩情况。同期关于不同电针频率对晚孕大鼠子宫收缩力影响的实验［18］结果显示，50Hz电针组的子宫收缩力与血清TXB2含量、E2／P值的变化趋势一致。由此推测50Hz电针组子宫收缩力增强是通过增高血清TXB2含量和E2／P值来实现的。而2Hz电针组的TXB2含量增高、血清E2／P值升高，子宫收缩力较针前却并未见明显增强。2Hz电针组内分泌变化与子宫收缩力变化不一致，考虑原因有：本实验样本有限，后期实验可加大样本量继续观察；分娩发动是子宫平滑肌由非活跃状态进入活跃状态的过程，与多种内分泌因素的综合作用有关，子宫收缩力受神经、激素及其受体、旁分泌和子宫分泌的内部调节因子及代谢因素等多种因素的调节，因此推测2Hz电针组在影响晚孕大鼠血清E2、P、TXA2、PGI2的同时也影响到其它的调节因素，从而出现了E2／P比值升高、TXB2含量增高而子宫收缩力并未增强的现象，有待后期实验继续观察2Hz电针对其它调节晚孕大鼠子宫收缩力因素的影响。