中条山野生连翘不同采收期连翘苷和连翘酯苷的含量测定研究
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摘要连翘（Forsythia suspense）是中药中最常见的药材之一，也是山西的道地药材。该研究采集了6月1日至12月7日的连翘果实，共44份样品。采用HPLC法测定不同采收期连翘中连翘苷和连翘酯苷的含量，以便确定最佳采收期。通过对44份样品中有效成分的分析，发现在7月中旬之前采集的青翘有效成分明显高于秋季采集的老翘，而且随着采集时间的后延，连翘中有效成分的含量呈明显降低的趋势。
关键词连翘； 含量测定； 采收期；HPLC； 中条山
中图分类号S685.24文献标识码A文章编号 1007-5739（2013）12-0056-02
ContentDeterminationofPhillyrinandForsythiasideofForsythiasuspenseDuringDifferentPickingTimeinZhongtiaoMt.
ZHANG Jian-jun
（Zhongtiao Mt. National Forest Authority，Houma Shanxi 043000）
AbstractForsythia suspense is one of the most common medicine of Chinese material medicine，and it is the geoherb of Shanxi Province.In this study，all of 44 sample fruits of Forsythia suspense were collected from first in June to seventh in December.In order to define the suitable harvesting time，the forsythoside B and phillyrin in these fruits were determined using HPLC methods.Afcer analyzing the 44 samples，the results showed that effective ingredients in the fruits collected before the midmonth July were higher those collected in autumn，moreover contents obviously declined following collecting time postponed.
Key wordsForsythia suspense；content determination；harvesting time；HPLC；Zhongtiao Mt.
连翘（Forsythia suspense）是木犀科连翘属落叶灌木，以果实入药。连翘药材分为青翘和老翘。青翘是指连翘果实初熟尚呈绿色时采集的果实，而老翘是指完全成熟后采集的果实。连翘是中药中最常见的药材之一，具有清热解毒、散结消肿之功效。现代药理研究表明，连翘中含有的连翘酯苷A（forsythoside A）具有很强的抗菌及抗病毒活性，是主要的有效成分之一[1]。
连翘主产于我国山西、陕西、河南、山东等地，以山西产连翘为道地药材[2]。而山西境内中条山一带又是野生连翘资源非常丰富的地区。该研究采集中条山固县林场野生连翘果实，测定不同采集时间内连翘苷和连翘酯苷A的含量，进行对比分析，以为探索最佳药材采收期提供理论依据和数据支持。
1材料与方法
1.1供试仪器与药品
Agilent 1200型高效液相色谱仪；Precisa 290SCS型电子分析天平；KQ-250B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；UPHW型超纯水机（成都超纯科技有限公司）；BDS HYPERSIL C18色谱柱（美国热电公司）；甲醇为色谱纯；水为超纯水；连翘苷对照品（含量≥98%，上海诗丹德生物技术有限公司出品）；连翘酯苷对照品（含量≥95%，上海诗丹德生物技术有限公司出品）；连翘药材由中条山国有林管理局固县林场提供。
1.2试验方法
1.2.1色谱条件。BDS HYPERSIL C18色谱柱（4.6×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-水，梯度洗脱，流速0.8 mL/min，检测波长280 nm，柱温25 ℃。上述色谱条件下，连翘中连翘苷和连翘酯苷与其他成分分离良好（图1）。
1.2.2对照品溶液的制备。精密称取连翘苷和连翘酯苷对照品适量，分别加50%甲醇水溶液制成0.089 g/L和0.369 g/L的对照品溶液。
1.2.3样品溶液的制备。取连翘样品适量，在60 ℃条件下烘干4 h，粉碎，过60目筛，精密称量0.2 g置于50 mL容量瓶中，加50%甲醇水溶液，超声波提取45 min，放置至室温，用50%甲醇水溶液加至刻度，摇匀，用0.45 mu微孔滤膜过滤，即为样品溶液。
1.2.4标准曲线的绘制。精确吸取连翘苷对照品溶液4、8、12、16、20 μL，按上述色谱条件，测定峰面积。以色谱峰的峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，计算回归方程为：y=722.75x－0.9，r=0.997 9，线性范围为0.356～1.781 μg。精确吸取连翘酯苷对照品溶液4、8、12、16、20 μL，按上述色谱条件，测定峰面积。以色谱峰峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，计算回归方程为：y=1 140.6x－605.1，r=0.997 9，线性范围为1.476～7.380 μg。
1.2.5连翘苷和连翘酯苷含量测定。分别取所要测定的44份样品适量，按1.2.3的方法制得样品溶液。分别精确吸取20 μL，注入液相色谱仪，按1.2.1色谱条件进行测定，计算连翘苷和连翘酯苷的含量。
1.2.6精密度试验。精确吸取样品溶液20 μL，分别连续进样5次。
1.2.7稳定性试验。精确吸取样品溶液20 μL，分别在制备后0、4、8、12、24 h进样，以测定连翘苷和连翘酯苷的色谱峰面积。
1.2.8重复性试验。分别取同一批连翘药材5份，精密称定，按样品制备方法制得样品溶液，测定峰面积，分别计算含量。
1.2.9回收率试验。精确称取已知含量（连翘苷0.56%，连翘酯苷4.43%）的连翘药材3份，每份约140 mg，置于50 mL量瓶中，分别精确加入0.089 g/L连翘苷对照品溶液2.5 mL和0.369 g/L连翘酯苷对照品溶液10 mL，按样品制备方法处理，分别测定峰面积，计算回收率[3-4]。
2结果与分析
2.1连翘苷和连翘酯苷含量测定结果
连翘苷和连翘酯苷含量测定结果见表1。可以看出，连翘苷和连翘酯苷含量随采集时间变化很大，如1、13、14、15、16、17和30号样品连翘苷和连翘酯苷的含量都很高，这7个批次的样品采集时间段为2009年、2010年6月1日至7月20日，7月20日以后样品有效成分明显降低，如7~12号、20~28号样品的采集时间为8—10月；11、12月的样品有效成分含量最低，如28、29、34号。还有一些样品中没有检出连翘苷，如23、32、33、42、43号样品；这是因为这些样品保存不当，有些变质造成的。这说明在中条山一带采集连翘的最适时间为6月上旬至7月中旬，到了7月20日以后样品的有效成分明显下降，但相对稳定，而在11月以后样品有效成分是大幅度下降的。
2.2精密度试验
测得连翘苷峰面积平均值为394.4，RSD为2.08%，连翘酯苷峰面积平均值为5058，RSD为2.22%。
2.3稳定性试验
计算峰面积相对标准偏差RSD分别为3.50%和1.84%。表明样品在24 h稳定性良好。
2.4重复性试验
连翘苷平均含量为0.49%，相对平均偏差RSD为2.70%（n=5）；连翘酯苷平均含量为6.67%，RSD为1.02%（n=5）。
2.5回收率试验
连翘苷的平均回收率为100.7%，平均标准偏差RSD为2.52%；连翘酯苷的平均回收率为100.5%，RSD为1.19%，结果见表2。
3结论与讨论
该试验研究采用高效液相色谱法对固县林场产野生连翘中连翘苷和连翘酯苷的含量进行了测定，并分别考察了精密度、稳定性、重复性和回收率。试验结果表明所建立的方法稳定、准确、可靠。
通过样品检测结果的研究分析可以看出，7月中旬之前采集的青翘有效成分明显高于秋季采集的老翘。这一结果为有效控制野生连翘的内在质量，充分利用当地连翘资源，为连翘这一山西道地药材的开发奠定了坚实的理论基础[5-6]。
4参考文献
[1] 李发荣，段飞，杨建雄.中药连翘及连翘叶中连翘苷含量的比较研究[J].西北植物学报，2004，24（4）：725-727.
[2] 张炜，张汉明，郭美丽，等.连翘的药理学研究[J].中国现代应用药学杂志，2000，17（1）：7-10.
[3] 王雨虹，贺爱玲.某地区不同采收期连翘叶中连翘酯苷、芦丁和连翘苷的含量测定[J].山西职工医学院学报，2012（6）：6-9.
[4] 胡静，马琳，张坚，等.连翘的研究进展[J].中南药学，2012（10）：760-764.
[5] 杨棣华，黄兰，郑显辉.不同产地连翘叶中连翘苷和连翘酯苷A的含量测定[J].临床医学工程，2013（3）：288-289.
[6] 杨雪艳，刘成伦.连翘的研究现状与展望[J].贵州农业科学，2012（9）：33-36.