蒙药材玉簪花指纹图谱研究
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[摘要] 目的 采用高效液相色谱法建立蒙药材玉簪花指纹图谱分析方法，为玉簪花药材的质量评价提供参考依据。 方法 采用高效液相色谱法对蒙药材玉簪花指纹图谱进行研究，色谱柱为Phenomenex Luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-0.5%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 mL/min；柱温为30℃；检测波长256 nm，结果采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统” 以中位数法生成标准指纹图谱。 结果 10个批次的玉簪花药材的色谱指纹图谱有18个共有峰，高效液相色谱指纹图谱的相似度都>0.9，建立共有模式，不同批次玉簪花指纹图谱相似性较好。 结论 高效液相色谱法用于蒙药玉簪花指纹图谱研究可为玉簪花药材质量评价和今后规范药用资源提供科W依据。
[关键词] 蒙药材；玉簪花；高效液相色谱；指纹图谱
[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）05（a）-0034-04
Study on fingerprint of Mongolian medicine Hosta plantaginea Aschers
LI Huifang1 WANG Minjie2 ZHU Henian3
1.Department of Pharmacy， Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University， Inner Mongolia Autonomous Region， Hohhot 010059， China； 2.School of Basic Medicine， Inner Mongolia Medical University， Inner Mongolia Autonomous Region， Hohhot 010110， China； 3.Baotou Traditional Chinese Medicine Co.， Ltd， Inner Mongolia Autonomous Region， Baotou 014040， China
[Abstract] Objective To establish the fingerprint of Mongolian medicine Hosta plantaginea Aschers by high performance liquid chromatography （HPLC） and to provide reference for scientific quality evaluation and effective control of quality. Methods HPLC was applied to study the fingerprints of Mongolian medicine Hosta plantaginea Aschers， chromatographic column was Phenomenex Luna C18 （250 mm×4.6 mm， 5 μm）， phase gradient elution was proceeded with methanol-0.5% phosphate aqueous mobile， with flow rate of 1.0 mL/min and temperature of 30℃ detected on 256 nm， the chromatographic fingerprints were analyzed with the "similarity of chromatographic fingerprints of traditional Chinese medicine evaluation system". Results The HPLC fingerprint of Hosta plantaginea Aschers from 10 different areas had eighteen common peaks， the similar degree of HPLC fingerprint was above 0.9， it was a better similarity of fingerprint of Mongolian medicine Hosta plantaginea Aschers from different areas. Conclusion Application of HPLC in the fingerprint of Mongolian medicine Hosta plantaginea Aschers can provide a scientific basis of quality evaluation and specification for medical resources in the future.
[Key words] Mongolian medicine； Hosta plantaginea Aschers； High performance liquid chromatography； Fingerprint
蒙药玉簪花Hosta plantaginea Aschers为百合科玉簪属植物玉簪Hosta plantaginea（Lam.）Asch.的花蕾，蒙药名哈斯-哈塔胡尔-其其格，又名内消花、白鹤花，始见于《本草纲目》[1-2]，性寒、味涩，具有清热、解毒、止咳、利咽喉之功效，主治咽喉肿痛、音哑、肺热、毒热，具有悠久的蒙医临床用药历史和确切的疗效，是蒙医专用、常用药物，在蒙医临床用药中占有重要地位[3-5]。然而，目前对玉簪花的相关成分和药理作用研究报道仍然较少，尤其对蒙药玉簪花质量控制方法的报道较少，质量标准研究关系到其临床利用和开发研究，因此，明晰其质量控制方法，建立玉簪花的质量标准是非常重要，可为其在临床上使用奠定坚实的理论基础。
近年来关于玉簪花质量标准的研究，有关于总多糖、总黄酮、山奈酚、甾体化合物及总黄酮的含量测定的报道[6-11]，但对玉簪花药材指纹图谱的研究报道仍然较少。因此，基于目前对玉簪花所含主要成分、定性定量分析方法、指纹图谱质量控制方法、质量标准规范要求等仍不完善这一现状，本研究采用高效液相色谱（HPLC）法建立了玉簪花药材的指纹图谱分析方法，并对不同批次玉簪花药材的质量进行系统的比较研究，以便更好地进行玉簪花质量控制，为建立玉簪花法定药材质量标准奠定基础[12]。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津CBM-10A VP plus HPLC仪；奥泰800型蒸发光检测器；LC Solutionlite色谱工作站。子天平（上海越平科学仪器有限公司）；鼓风式干燥箱（上海分析仪器厂）。
1.2 样品及试剂
甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）购买于Merck，Germany，超纯水，山萘酚（100081-200406，中国药品生物制品检定研究所），其他试剂均为分析纯。
玉簪花1、2、3批（购于亳州市飒枫药业）；玉簪花4、5、6批（购于亳州荣华堂中药材采购站）；玉簪花7、8、9、10批（购于安国市荣草药材行），经内蒙古医科大学中药鉴定教研室渠弼教授鉴定为百合科植物玉簪的干燥花。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备
精密称取玉簪花药材粉末0.5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，超声（25 kHz）提取40 min，放冷至室温，并用甲醇补足重量，溶液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，摇匀，取一定量的甲醇提取液续滤液，即得。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取在60℃减压干燥4 h至恒重的山奈酚对照品1.00 mg，至10 mL的容量瓶中，加甲醇制成每毫升含100 μg山奈酚的溶液，即得。
2.3 色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱：Phenomenex Luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；流动相为甲醇（A）-0.5%磷酸溶液（B）（线形梯度）按表1程序进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，检测波长256 nm。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度考察 精密吸取玉簪花药材供试品溶液10 μL，依给定色谱条件重复进样5次，测定其HPLC图谱。考察选出的18个共有指纹峰，以6号峰为参照峰。结果表明：各共有峰的相对保留时间的RSD（RT）值
2.4.2 重复性考察 取同一个批次的玉簪花样品5份，按“2.1”步骤操作，通过HPLC分析5份玉簪花药材供试品溶液，结果表明：各共有峰的相对保留时间的RSD（RT）值
2.4.3 稳定性考察 取新鲜制备的玉簪花供试品溶液，按“2.3”项下的色谱条件，分别在0、6、12、24、48 h进样10 μL，结果显示，通过HPLC分析玉簪花药材供试品溶液，结果表明：上述各色谱峰各共有峰的相对保留时间的RSD（RT）值
2.5 不同批次药材玉簪花指纹图谱测定
本研究分别取10批次玉簪花药材样品，按照“2.1”项下的方法制备供试品溶液，按照“2.3”项下的条件依次对供试品溶液进样测定，10个批次药材色谱图的叠加图谱见图1，其中有18个峰特征显著，重现性好，因此确定这18个峰为指纹图谱的共有指纹峰。根据10批玉簪花药材指纹图谱的检测结果[共有指纹峰相对保留时间（RT）和相对峰面积（RA）]，采用国家药典委员会编写的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2010年2.0版）以中位数法生成标准指纹图谱（见图1）。在图1中，6号峰为参照物（山奈酚）峰。结果表明，10批不同产地的玉簪花相似度值均>0.9，结果见表2。
3 讨论
3.1 检测波长考察
玉簪花主要含有皂苷类、黄酮类及香豆素类成分，实验中同时选定了256、295、340 nm 3个波长进行检测。又因供试品和对照品溶液经200～400 nm全波长扫描，溶液在256 nm处均呈现最大吸收，故实验中选定了256 nm为检测波长。
3.2 流动相选择
选择流动相时，为使各成分分离完全，相对保留时间稳定，出峰时间短，本研究中采用梯度洗脱的方法，分别以甲醇-水、甲醇-磷酸、乙腈-水、乙腈-冰醋酸等不同体积分数、不同比例的流动相系统进行等度和梯度洗脱试验。结果表明：采用甲醇（A）-0.5%磷酸溶液（B）进行梯度洗脱为佳，峰形尖锐且分离度较好，流动相在不同时间洗脱比例时，各峰的保留时间适中，且基线较平稳，不易漂移。考虑到线性梯度洗脱程序简单、操作容易、具有普遍适用性的特点，并能有效的提高色谱图的分离度，因此选择上述流动相条件进行线性洗脱。鉴于玉簪花中化学成分复杂，为避免色谱峰拖尾，因此流动相加入酸，既可以有效避免了色谱图的拖尾现象，又有利于指纹图谱的分析。
3.3 提取溶剂及方法的考察
3.3.1 提取溶剂的考察 取玉簪花药材粉末1 g，共6份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇各20 mL，称重，超声处理40 min，取出，放冷，称重。分别用相应的溶剂补足失重，过滤，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。分别考察HPLC指纹图谱，经过对出峰个数及分离度等的综合比较，确定甲醇为适宜的提取溶剂。
3.3.2 提取条件的考察 取玉簪花药材样品中粉0.5 g，共5份，精密称定，精密加入甲醇25 mL，密塞，称重，分别在设定条件下提取，放冷，用甲醇补足失重，滤过，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过。比较用甲醇超声提60、40、20 min所测得相应峰峰面积与甲醇回流60 min的相应峰峰面积，各提取方式色谱图的峰数、峰位差别比较，超声提取40 min的响应值较其他提取方式高，因此选超声提取40 min。因此选择以甲醇为提取溶剂，超声40 min为玉簪花药材的提取条件。
3.4 参照物的选择
相关文献报道玉簪属植物中含有黄酮类[13]，其中解红霞等[9-10]从玉簪花中分离出了山奈酚，何健等[14]建立了药材中山奈酚-7-O-葡萄糖苷含量测定方法，王静等[15]以山奈酚作为对照品对玉簪花中的总黄酮进行测定。玉簪花药材中提取物全波长扫描中最大吸收波长与山奈酚一致，故选用山萘酚为参照物（S）。
3.5 试验结果和研究意义
蒙药是中华民族医药的瑰宝，具有鲜明的民族特色、地域特点和独特的理论体系，其资源独特，具有悠久的临床应用和实践历史，疗效显著。然而，由于蒙药的研究开发相对于中药以及其他民族药相对缓慢，尤其是在蒙药材质量标准的控制上，仍然有很多蒙药材尚不完善，这大大限制了蒙药的现代临床应用和开发研究，因此，亟待完善蒙药材的质量标准，为加快蒙医药发展奠定理论基础。另外，民族药材在临床上应用广泛，而且药材产地来源广泛，所以有必要对药材的质量控制和评价进行研究。但是其成分复杂，活性成分不明，鉴别困难，单靠测定已知的有效成分控制其质量稳定性是不够的，药效的发挥必须强调整体性，所以提出了色谱指纹图谱鉴别。色谱指纹图谱质量控制能够在中药（蒙药）有效成分不明确的状况下，仍可有效地表征其质量。HPLC 指纹图谱技术作为鉴别和评价天然产物的有效工具，目前已广泛用于中草药及其各种制剂的质量控制。
蒙药玉簪花是蒙药常用的一种药物，可用于治疗肺热、咽喉肿痛、嘶哑、胸热等，具有悠久的用药历史，其疗效确切，然而，目前对于玉簪花的化学成分和理作用研究仍然较少，国内一些学者对其化学成分和药理作用进行了研究报道，如薛培凤等对玉簪花的主要化学成分和药理作用进行了研究，对玉簪花中的总多糖、总黄酮、山奈酚、甾体化合物等的提取方法和含量测定进行了研究报道，并发现玉簪花具有抗炎、镇痛等作用[16-17]。另外，何军伟等[18]也对玉簪花的乙醇提取物进行了抗炎作用研究，刘接卿等[19]对玉簪花中的抗肿瘤活性甾体成分进行了研究，叶晓川等[20]及辛颖等[21-22]对玉簪花进行了体外抑菌实验研究。然而，因玉簪花产地众多，来源广泛，其活性物质含量也稍具差异，虽然有关于玉簪花中总多糖、总黄酮、山奈酚、甾体化合物及总黄酮的含量测定的报道，但是对玉簪花药材指纹图谱的研究报道仍然较少。因此，基于目前对玉簪花指纹图谱质量控制方法、质量标准规范要求等仍不完善这一现状，本研究采用HPLC法，对采集的10个批次玉簪花药材，通过对玉簪花指纹图谱中的峰数目、峰形、柱效、分离度及峰面积等多指标进行综合评价，表明该方法的稳定性、精密度和重复性较好，图谱相似度采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2010年2.0版），结果显示，各产地药材与标准指纹图谱的相似度在 0.9～1.0。结果表明，各批次玉簪花药材来源质量均一、稳定。该指纹图谱方法的建立为玉簪花药材的内在质量及相关制剂的研究控制提供了科学依据。
[参考文献]
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（蒙药卷）[M].上海：上海科学技术出版社，2004：142.
[2] 李时珍.本草纲目[M].2版.北京：人民卫生出版社，1977：1208.
[3] 内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙药材标准[M].赤峰：内蒙古科学技术出版，1987：386.
[4] 卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准（蒙药分册）[M].北京：人民卫生出版社，1998：10.
[5] 占布拉道尔吉.无误蒙药鉴（蒙文版）[M].呼和浩特：内蒙古人民出版社，1988：233-244.
[6] 王娜娜，薛培凤，耿婕，等.蒙药玉簪花总多糖提取工艺优选与含量测定[J].中国药业，2014，23（15）：47-49.
[7] 李晓娟，薛培凤，鞠爱华，等.蒙药玉簪花中山奈酚的HPLC含量测定与薄层色谱鉴别[J].内蒙古医学院学报，2011，33（4）：307-310.
[8] 张金花.蒙药玉簪花化学成分研究[D].呼和浩特：内蒙古医学院，2009：25-26.
[9] 解红霞，张金花，张宏桂，等.蒙药玉簪花的化学成分研究[J].中国药学杂志，2009，44（10）：733-735.
[10] 解红霞，薛培凤，张宏桂，等.可见分光光度法测定玉簪花中总皂苷的含量[J].北京中医药大学学报，2009，32（9）：624-625.
[11] 张金花，谢红霞，薛培凤，等.蒙药玉簪花中的甾体化合物[J].中国药学杂志，2010，45（5）：335-337.
[12] 国家药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）[J].中成药，2000，22（10）：671-675.
[13] 钟国跃，周华蓉，禹志领，等.民间药物“玉簪”抗非特异性炎症活性的研究[J].中国中药杂志，2003，28（10）：979-980.
[14] 何健，高英，李卫民.HPLC法测定蒙药玉簪花中山奈酚葡萄糖苷的含量[J].中药新药与临床药理，2010，21（2）：192-194.
[15] 王静，薛培凤，赵子龙，等.紫外分光光度法测定蒙药玉簪花中总黄酮的含量[J].内蒙古医科大学学报，2013， 35（2）：93-95.
[16] 李春燕，薛培凤，刘美娜，等.蒙药玉簪花抗炎作用研究[J].时珍国医国药，2015，26（7）：1559-1560.
[17] 解红霞，薛培凤，周静，等.蒙药玉簪花镇痛作用的实验研究[J].内蒙古医学院学报，2010，32（1）：36-38.
[18] 何军伟，杨丽，朱继孝，等.蒙药玉簪花不同浓度乙醇提取物的抗炎作用及其HPLC分析[J].江西师范大学学报：自然科学版，2016，40（2）：183-185.
[19] 刘接卿，王翠芳，邱明华，等.玉簪花的抗肿瘤活性甾体皂苷成分研究[J].中草药，2010，41（4）：520-526.
[20] 叶晓川，李文媛，颜彦，等.玉簪花体外抑菌实验研究[C].第九届全国中药和天然药物学术研讨会，2007：4.
[21] 辛颖，达拉胡.蒙药玉簪花不同萃取部位抗炎活性研究[J].亚太传统医药，2015，11（23）：5-7.
[22] 辛颖，白玉花.蒙药玉簪花乙醇提取物体外和体内的抑菌活性研究[J].中成药，2015，37（3）：653-656.
（收稿日期：2017-01-02 本文编辑：张瑜杰）