培土生金法对肺脾两虚型慢阻肺大鼠肺功能的影响

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[摘要] 目的 探讨培土生金法对肺脾两虚型COPD大鼠肺功能影响。方法 于2016年6―7月，在甘肃中医学院动物实验中心开展研究。采用每日被动烟熏、气管内两次注射脂多糖及灌服番泻叶的方法，复制大鼠肺脾两虚型COPD模型；实验随机分为正常组、模型组及治疗组，在第28天做大鼠肺功能测定，光镜观察大鼠肺组织病理变化。结果 与正常组比较，模型组MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s均明显降低；MV、PEF（P

[关键词] 培土生金；慢性阻塞性肺疾病；肺脾两虚型；肺功能

[中图分类号] R332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）11（a）-0040-03

[Abstract] Objective To investigate effect of the Method of reinforcing earth to strengthen metal on lung function in pulmonosplenic asthenia rats with COPD.Methods From June to July 2016， the research had been developed in Animal Experimental center. Pulmonosplenic asthenia rats models with COPD were established by forcing rats to smoke every day ，injecting LPS in the airway two times and feeding with decoction of Folium Sennae.Rats were randomized into the normal group， model group and treatment group. In the 28th day，the lung function was measured and the pathologic changes of lung tissue was examined by microscope.Results Compared with the normal group，MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s were significantly decreased in the model group，MV、PEF（P

[Key words] Reinforcing earth to generate metal；COPD；The Lung and Spleen Deficiency Syndrome；Lung function

慢性阻塞性肺疾病（COPD）以不完全可逆的饬魇芟尬特征。气流受限呈进行性发展，伴有气道和肺对有害颗粒或气体所致慢性炎症反应的增加[1]。中医将其归于“肺胀”范畴，认为病变首先在肺，继而影响到脾，中焦脾土的病变是COPD传变或恶化的关键。脾虚则邪易侵，易生痰，肌肉削，进而致疾病缠绵。实验于2016年6―7月，选取甘肃中医学院动物实验中心清洁级Wistar大鼠30只作为研究对象。采用气管内滴注LPS，被动吸烟及灌服番泻叶法建立肺脾两虚型COPD大鼠模型。选取参苓白术散干预治疗，观察其对模型大鼠肺功能和肺组织病理的影响，探讨其可能的作用机制，以期为临床培土生金法治疗肺脾两虚型COPD提供实验依据。

1 临床资料

1.1 动物

3月龄清洁级Wistar大鼠共30只，雌雄各半，体质量（200±20）g，由甘肃中医学院动物实验中心提供，随机分为3组：即正常组，模型组，治疗组，每组各10只。

1.2 受试药物

番泻叶浸液：番泻叶浸泡12 h，绞汁过滤，装入烧杯，浓缩至含生药1 g/mL，4 ℃冰箱保存；参苓白术散：由人参、白术、茯苓、甘草、山药、莲子、白扁豆、薏苡仁、砂仁、桔梗等药物组成，实验选用免煎剂。均购于甘肃中医药大学附属医院门诊中药房。

1.3 主要试剂及仪器

脂多糖（批号 L-2880）；兰州牌香烟（焦油量14 mg 烟气烟碱量1.1 mg，烟气一氧化碳量 14 mg）；生物信号采集系统。

2 方法

2.1 造模方法

采用宋一平等[2]研究方法加以改良建立大鼠COPD模型。第1、14天，经口气管滴注LPS：大鼠麻醉后，头部自由垂落于鼠板边缘，四肢宽松固定于鼠板。暴露口腔，以卵圆钳向前外侧牵拉舌头。将喉镜插入大鼠口中压紧舌根防止后坠，同时向上提拉下颌，灯光下可见大鼠喉部有一透亮区，于吸气相将气管插管插入气道。同时将气管套管拔出，将1 mL针管内先抽入相应量溶于生理盐水的LPS（1 mg/mL），于大鼠吸气瞬间迅速推注LPS（大鼠用量0.1 mg）。再向气管内迅速推注0.5～1 mL气体1～2次以使LPS充分分布于肺组织内。拔出针管，轻拍大鼠胸背部，并轻抖动，使药物均匀分布于肺内。 第 2～28天（滴注LPS当天不烟熏，正常组呼吸空气），每日上午将大鼠放于染毒箱内，持续烟熏30 min后，置于鼠笼常规饲养。自造模第7天起在熏前30 min给予浓度1 g/mL冰冷番泻叶浸液，按1 mL/100 g体重的剂量，连续灌胃至28 d造模结束。

2.2 给药方法

实验药物用量均按体表面积比率（D2=D1×0.018×5）配制药液，临床等效剂量为实验中剂量。注 D2：大鼠（200 g）的临床等效剂量，D1：成人（70 kg）日用量。模型复制成功后进行药物干预，按1 mL/100 g体重的剂量灌胃：治疗组给予参苓白术散灌胃治疗，正常组给予等容量生理盐水灌胃。每日下午 1 次 ，连续灌胃干预至28 d。

2.3 实验观察与指标检查

2.3.1 肺功能测定 用10%水合氯醛（国药准字H37022673）（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，待其完全麻醉，将大鼠固定于手术台上，大鼠喉镜经口气管插管方法，插入Y型气管插管并固定，将插管一端连接生物信号采集系统传感器，自动描记呼吸曲线，测定大鼠每分钟通气量（MV）、呼气峰流量（PEF）及吸气峰流量（PIF）等指标。

2.3.2 标本采集与处理 肺功能测定完毕，取血后处死大鼠，开胸分离肺脏，取左肺上叶，肉眼观察后，用生理盐水拭去肺表面血渍置于4%多聚甲醛溶液中外固定。酒精梯度脱水，浸蜡，包埋，切片，HE染色，于光镜下观察肺组织形态学改变。

2.4 统计方法

实验数据采用SPSS 20.0统计学软件进行处理，计量资料符合正态性分布，采用（x±s）表示，行独立样本t检验，P

3 结果

3.1 肺功能检测结果

与正常对照组比较，模型组MV、PEF、PIF均降低（P

3.2 大鼠肺组织形态学改变

正常组呼吸道及肺泡结构正常，支气管纤毛排列整齐，支气管腔及肺泡腔未见炎症。模型组大鼠肺组织支气管壁及周围组织有大量炎性细胞浸润，血管扩张充血，气管粘膜上皮部分脱落，管壁增生，肺泡壁变薄或断裂，部分融合成肺大疱，符合COPD的病理改变[3]，提示造模成功。治疗组大鼠肺组织损伤明显减轻。

4 讨论

实验采用持续熏烟，两次气管滴注LPS配合灌服番泻叶的方法制作大鼠肺脾两虚COPD模型。肺功能可动态反映COPD通气功能，较好地评价气流受限的程度。有研究显示，培哚普利通过下调C0PD大鼠血清和肺组织匀浆中IL-8、TNF-a含量，改善肺功能。与模型组比，PEF（25.77±3.45）mL/s升高，（P

该实验，与正常组比，模型组MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s均明显降低；MV、PEF（P

COPD稳定期营养不良表现为胸闷、消瘦、腹泻、动则气短加重等症状，中医辨证属肺脾两虚证，选用参苓白术散治疗COPD，契合病机。参苓白术散出自宋代官方颁布的《太平惠民和剂局方》，全方有补肺气，健脾气，培土生金，兼以渗湿浊，行气滞之功，被后世奉为“培土生金”法（即补脾益肺法）代表方。徐升等[6]研究表明黄芪建中汤组 FEV0.3/FVC、PEF、FEV0.3明显升高（P

综上所述，参苓白术散虽不能防止大鼠COPD的形成，但通过健脾益肺，提高机体抵免疫力，减少感染机会；减少痰液分泌，通畅气道；增进食欲，改善营养状态；缓解呼吸肌疲劳，延缓肺功能下降。将培土生金法贯穿临床诊治全程，发挥中医辨证论治特色，将为研发治疗肺脾两虚型COPD的有效中医复方提供理论依据。

[参考文献]

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[2] 宋一平，崔德健，茅培英. 慢性阻塞性肺病大鼠模型的建立及药物干预的影响[J].中华内科杂志，2000，39（8）：51-52.

[3] 中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组.慢性阻塞性肺疾病诊治指南（2007年修订版）[J].中华结核和呼吸杂志，2007，30（1）：8.

[4] 孟丽霞，王均鹏，曾凡军，等.培哚普利对COPD大鼠肺功能及IL-8、TNF-a含量的影响[J].疑难病杂志，2015，14（2）：168-170.

[5] 王胜，熊玲玲，邓雪，等.氨茶碱和辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症和气道黏液高分泌的影响[J].中南大学学报：医学版，2016， 41（1）：37-42.

[6] 徐升，孙丽萍，张念.培土生金法对 COPD 大鼠肺功能的影响实验研究 [J]. 山东中医杂志，2013，32（2）：107-109.

[7] 许坚，林琳.培土生金对慢性阻塞性肺病大鼠免疫调节的研究思路[J].中国医药指南，2013，11（31）：354.

[8] 王小祥，林俊.参苓白术散加减对慢性阻塞性肺疾病稳定期肺脾气虚型的影响[J].云南中医中药杂志，2013，34（5）：21-24.

（收稿日期：2016-08-05）