肺纤维化
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肺纤维化范文第1篇
不是癌症的癌症
特发性肺纤维化是罕见病的一种，每十万人当中仅14～43人会患上特发性肺纤维化。特发性肺纤维化以呼吸困难、干咳、缺氧导致运动受限为主要表现，患者平均预期寿命为诊断后的3～5年，或症状出现后的4～6年，被称为不是癌症的癌症。
这种疾病在世界各地均有发生，不分种族，在老年人当中更为常见，诊断时患者的平均年龄为66岁，但也不排除年轻人患病的可能性。
特发性肺纤维化其中的“特发性”是指目前尚不清楚发病原因，“肺纤维化”指肺组织由于疤痕形成而变硬或发生类似皮革样的改变，这种改变使肺无法扩展自如，氧气难以进入体内，患者出现呼吸困难，最常见的死亡原因为呼吸衰竭。
起初，特发性肺纤维化通常没有症状或者仅有一些轻微的症状，随着疾病恶化，患者可能会出现干咳、气短、疲乏无力、经常感冒、肺部感染、嘴唇发紫、皮肤发青、指甲形状发生变化（称为杵状指）、食欲不佳、体重减轻等。
警惕特发性肺纤维化信号
2011年特发性肺纤维化诊断和治疗循证新指南列出了可能引起特发性肺纤维化的几大高危因素――吸烟：每年吸烟超过20包;接触金属粉尘、木尘等;慢性病毒感染，包括肝炎病毒、人类疱疹病毒等;胃食管反流和遗传，其中遗传因素占所有特发性肺纤维化患者的比例小于5%。
对于有上述高危因素的人群，要特别警惕特发性肺纤维化出现的信号，一旦发现呼吸异常困难或气短、胸闷，要及时到正规医院的呼吸科就诊。上海市肺科医院李惠萍教授介绍：“由于特发性肺纤维化患病人数少，部分医生的相关诊断经验不足，容易造成误诊。目前，我国通过学术交流、进修培训等方式培养特发性肺纤维化诊疗骨干，患者如果怀疑自己有可能得了特发性肺纤维化，可以到相关的诊疗中心就诊。”
延缓疾病进展是治疗目标
肺纤维化范文第2篇
【关键词】 肺纤维化；泼尼松；丹红注射液；替米沙坦；疗效
特发性肺纤维化目前的发病原因仍不明确， 其发病率及致死率逐年上升， 临床常以抗炎及免疫等药物治疗为主， 虽然取得一定效果， 但副作用较大。本研究在临床联合用药治疗特发性肺纤维化， 取得了满意疗效， 并且无不良反应， 现分析报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取2011年11月～2013年10月在本院住院治疗确诊的肺纤维化患者114例， 按就诊顺序随机分为两组， 其中对照组57例， 男41例， 女16例， 年龄46～75岁， 平均年龄（62.82±4.83）岁， 病程5个月～3年， 平均病程（1.21±0.51）年；观察组57例， 男42例， 女15例， 年龄47～77岁， 平均年龄（61.98±5.26）岁， 病程4.5个月～2.5年， 平均病程（1.18±0.47）年。两组患者在性别、年龄、病程等一般资料比较， 差异无统计学意义（ P>0.05）， 具有可比性。
1. 2 纳入和排除标准 诊断标准参照中华医学会呼吸病分会制定的《特发性肺间质纤维化的诊断及治疗指南（草案）》作为标准[1]：出现无明显原因及诱因的进行性的呼吸困难， 时间>3个月；听诊双肺可以闻及明显的Velcro音；肺功能检查：有限制性的肺通气障碍， 或者有弥散；肺部CT可见肺部呈弥漫性的网状、斑点状高密度影、磨玻璃影及蜂窝状肺组织；动脉血气显示低氧血症或者运动后低氧血症。排除有明确职业病史、药物史等原因引起的肺间质性疾病；合并有糖尿病的患者；精神异常患者；有严重心肝肾功能损害者。
1. 3 治疗方法 两组均根据具体情况给予吸氧、抗感染、解痉、祛痰止咳等治疗。对照组在以上治疗基础上给予泼尼松治疗， 泼尼松服用方法开始剂量按照0.5 mg/（kg・d）， 连续口服4周， 口服4周后剂量减至0.25 mg/（kg・d）， 在连续口服6周左右， 剂量调整为0.125 mg/（kg・d）， 口服[2]；观察组治疗方案：在对照组治疗基础上加用替米沙坦40 mg/d， 口服；丹红注射液， 剂量按30 ml加入0.9%的生理盐水250 ml中， 1次/d， 静脉滴注， 治疗后观察两组患者的肺功能变化。
1. 4 统计学方法 统计用SPSS18.0统计软件进行分析， 计量资料以均数± 标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。以P
2 结果
两组的VC%、PaO2、DLCO治疗后与治疗前组内比较， 均显著下降， 差异有统计学意义（P
3 讨论
特发性肺纤维化是一种弥漫性的肺泡炎症和肺泡结构异常紊乱而导致的以肺间质纤维化为临床特征的疾病。肺组织的纤维化是本病的主要临床病理特征， 主要由于肺间质的炎性渗出和浸润所引起， 肺组织炎性渗出受到损伤后， 肺泡组织内的多种细胞可释放生成因子， 这种生成因子可使细胞外基质成分在肺内大量的沉积， 导致肺纤维化的形成。研究显示， 转化生长因子-β1（TGF-β1）是目前所知的最强的细胞外基质沉积促进因子， 可与肺组织细胞和炎症细胞通过相互渗透而产生反应， 从而使肺组织炎症和免疫损伤加重， 促使肺组织成纤维细胞快速增加， 刺激肺组织多种细胞外基质成分合成和沉积， 导致肺纤维化的出现[3]。另外患者肺循环的RAS也参与了肺纤维化的形成， 肺组织内的RAS活化可以诱导肺泡上皮细胞核血管的内皮细胞的凋亡， 增加成纤维细胞活性， 使细胞外基质沉积增加， 促进肺纤维化的发生[4]。肺间质纤维化发生后、透明膜形成， 导致肺内1型肺泡的上皮细胞被2型细胞增生代替， 使肺泡腔闭塞或者变小， 随之呼吸膜变厚， 出现肺弥散能力下降[5]， 从而引起一系列的临床症状。特发性肺纤维化目前治疗的目的主要是减轻细胞炎症、减轻肺组织细胞的进一步损伤， 改善患者肺功能状态， 改善临床症状， 阻止病情进一步发展。
泼尼松是一种临床常用的糖皮质激素， 具有抗炎、抗免疫作用， 是治疗肺纤维化的常用药物， 临床疗效显著， 但长期应用会出现糖代谢异常、骨代谢异常等不良反应。替米沙坦是一种血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）受体（ATI型）拮抗剂， 特异性较高， 与体内AT1受体相结合， 可降解缓激肽， 减少糖皮质激素治疗的不良反应[6]。研究显示， AngⅡ可使TGF-β1的生成增加， 促进肺纤维化的形成和发展[7]， 而替米沙坦作为AT1拮抗剂， 可抑制TGF-β1的产生， 对肺纤维化的发生起到一定的抑制作用。丹红注射液由丹参和红花提取而成， 可改善微循环， 使因纤维化而缺血缺氧的肺组织血流量增加， 改善缺氧状态， 保护肺功能[8]；可减少肺组织中Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原纤维的含量， 并促使已形成的胶原纤维得到降解[9]。丹红注射液中丹参的有效成分丹酚酸B能够抑制TGF-β1受体蛋白的表达， 还能够抑制细胞外信号调节激酶磷酸化和纤维蛋白酶原激活物抑制因子蛋白的表达；可释放活性氧阻止脂质过氧化反应， 起到抗纤维化的作用[10]。因此作者本次的研究显示， 联合用药的观察组治疗特发性肺纤维化， 显著改善了患者的症状及肺功能（VC%、PaO2、DLCO）， 临床治疗疗效显著优于对照组， 并且还减小了激素的副作用， 不失为一种良好的治疗方案。
参考文献
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肺纤维化范文第3篇
摘 要 目的：认识特发肺纤维化的临床特点，探讨导致该病的环境因素，以引起临床医师对特发性肺纤维化的重视，提早发现和合理的治疗，以期延长患者生命。方法：分析25例特发性肺纤维化病例，均有粉尘或油烟接触史，经螺旋CT肺部检查，肺部X线及肺功能检查,结合临床特点确诊。均采用甲基强的松龙大剂量冲击疗法并联合环磷酰胺，口服罗红霉素。结果：部分病例临床症状及影像学明显改善。治疗中发现，罗红霉素有一定的抗肺纤维化作用。结论：特发性肺纤维化的发病机制尚不清楚，而接触粉尘或油烟是引起该病的因素之一，自身免疫和遗传基因对发病过程可能有一定的影响。对有粉尘或油烟接触史者要尽早脱离该环境，以减少特发性肺纤维化的发病率。
关键词 特发性肺纤维化 临床特点 粉尘 油烟
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2011.12.038
资料与方法
一般资料：选择2006～2007年郑州大学第一附属医院呼吸内科收治25例特发性肺纤维化病人，男18例，女7例；年龄18～60岁，平均39.5岁。均有粉尘或油烟接触史，时间1～20年，平均13.5年。
临床特点：通常起病隐袭，主要症状是干咳和劳力性气促，随着肺纤维化的发展，发作性的干咳和气促逐渐加重，进展的速度有明显的个体差异性，经过数月至数年发展为呼吸衰竭和肺心病，起病后平均存活时间2.8～3.6年，常伴随食欲减退，体重减轻，消瘦无力等，体检可发现呼吸过快，>80%的病例双肺底可闻及吸气末期Velcro音，20%～50%有杵状指，晚期出现发绀等呼吸衰竭和肺心病表现，如下肢水肿，甚至腹水或胸腔积液。主要辅助检查是X线，肺部螺旋CT和肺功能，胸片显示双肺弥漫的网格状或网格小结状湿润影，以及双下肺和外周明显。个别早期患者的胸片可能基本正常或呈磨玻璃样变化，随着病情的进展，可出现直径多在3～15mm大小的多发性囊状透光影，此时称为蜂窝肺，螺旋CT有利于发现早期病变，如肺内呈现不规则线条网格样改变，伴有囊性小气腔形成，是诊断特发性肺纤维化的重要手段之一，肺功能表现为进行性限制性通气功能障碍和弥散量减少，实验室检查为非特异性变化，可有血沉加快，血乳酸脱氢酶增高和丙种球蛋白增高，有1%～26%的患者类风湿因子和抗核抗体阳性。外科肺活检显示组织学符合普通型间质性肺炎的改变，
上述25例临床表现，胸部X线表现，肺通气及弥散功能或病理活检确诊为特发性肺纤维化。
治疗方法：大剂量甲基强的松龙3天冲击疗法，此后40mg/日,口服4周，20mg口服8周,10mg口服维持，同时联合环磷酰胺和口服罗红霉素，院外服药，每隔1个月、2个月、3个月复诊，查肺部螺旋CT、胸片、肺功能及弥散量。
结 果
有20例患病临床症状明显减轻，胸部螺旋CT及胸部X线弥漫网格状或网格小结节浸润影明显吸收，其中5例患者经治疗病情无明显改善，放弃治疗。
例1：患者，男，18岁，以采石，碎石为职业3年后，出现活动后气短6个月，静息时气短2个月伴干咳，胸部X线及肺功能和肺螺旋CT检查符合特发性肺纤维化，经正规治疗月余病情逐渐加重，出现呼吸衰竭，家人放弃治疗。
例2：患者，男，39岁，个体建材经营户，主要为沙子、水泥、石灰等，有20余年经营史，因劳力性气促6个月住院，经胸部X线及肺功能螺旋CT检查，符合特发性肺纤维化，经治疗病情改善，维持用药，定期复查。
例3：患者，女，36岁，职业教师，有长期粉尘接触史，表现为劳力性气促6月，肺部螺旋CT显示双肺周边呈网格状改变及蜂窝状改变，双肺底可闻及Velcro音，肺功能及弥散量降低，经治疗病情改善良好。
例4：患者，女，56岁，家庭妇女，有油烟吸入史，40年，有劳力性气促1年，静息时无气促。查体：双肺底吸气末期壳闻及Velcro音。肺功能：肺活量降低，弥散量降低，肺部螺旋CT显示双肺周边生网格状改变。经治疗效果理想，
例5：男，60岁，职业为厨师，劳力性气促3年，加重6个月，查体：口唇发绀，呼吸急促、浅快，颈静脉怒张，双肺呼吸音低，可闻及广泛的Velcro音。肺功能：肺活量降低，弥散量降低。动脉血气分析：低氧血症。肺部螺旋CT：右侧胸腔积液，双肺弥散性网格状、蜂窝状改变。该病人病程较长，已经处在呼吸衰竭与形成肺心病阶段，经大剂量强的松龙冲击治及序贯治疗，联合环磷酰胺，口服罗红霉素，病情无改善。
以上5例患者，临床表现及影像学资料检查胸片呈双肺弥漫的网格状或网格结节状浸润影。肺功能：肺活量降低。明显低氧血症，弥散量降低，符合特发性肺纤维化特点，但有明显个体差异，病情轻重不等，治疗效果差异较大。
讨 论
特发性肺纤维化病因复杂，粉尘与油烟接触史是其致病因素之一。它严重降低患者生命生活质量，临床医师应高度重视该病的临床特点，重视病史询问和职业类别，特别对有劳力性气促患者，常规肺部螺旋CT检查，肺功能检查，弥散量检查，病排除心源性呼吸困难，及早发现可疑患者，有条件治疗的医疗单位尽早完善检查进行治疗，无条件的可转至可治疗医疗单位进行治疗，尽管特发性肺纤维化预后不理想，但作为医生的天职是及早发现病人，建议其尽早全面检查，特别是无创伤检查，如肺活量、肺部螺旋CT，结合与临床表现基本可以确诊，治疗方面，除目前国内的以激素联合环磷酰胺外，口服罗红霉素也一定的辅助治疗作用。特发性肺纤维化的发病率由于环境污染和职业类别的关系逐渐升高，对临床气促患者要常规胸部X线检查，发现异常者，进一步行肺功能和弥散量检查，同时排除肺部其他病变和心源性疾病。提高对该病临床特点的认识和掌握是及早发现该病的关键。
肺纤维化范文第4篇
关键词：特发性肺纤维化；家族性；多发
特发性肺纤维化（IPF）是一种原因不明的慢性炎性反应性间质性肺病，据统计IPF的5年生存率＜50%，而且有越来越高的趋势[1-3]。特发性肺纤维化的早期诊断难度较大，中晚期被误诊的机率也较大。临床病史结合影像学方面的表现基本可以明确诊断。 1 临床资料
本组已经临床病理确诊的特发性肺纤维化10例，男7例，女3例，年龄21～59岁，平均45岁。其中3例具有家族性发病的家族史。1例男性患者呼吸困难和干咳，呼吸困难呈进行性加重，并有紫绀、杵状指，病程2年，其父亲患有特发性肺纤维化。1例女性患者反复性呼吸困难伴干咳，病程半年，其弟弟患有特发性肺纤维化。1例男性患者无明显症状，仅于体检X线胸片时发现，其两个姐姐患有同种疾病。前两例行X线胸片检查，后1例患者（21岁）及其一个姐姐（26岁）采用 Philip 螺旋CT行胸部薄层平扫，层厚1.0 mm，层距1.2 mm。
2 结果
2.1 X线表现：2例X线均显示双肺粟粒状及大小不等的结节状阴影，局部见条索状及蜂窝状阴影，略呈毛玻璃样改变，见图1～2。
图1 男性
图2 女性
2.2 CT表现：2例薄层螺旋CT平扫均显示双肺磨玻璃样影、不规则线状或网格状影、斑片状实变影、小结节影、蜂窝样影。见图3～4。
图3 男性
图4 图3中男性的姐姐
3 讨论
特发性肺纤维化通常发病在40～70岁之间，发病率随年龄增加，近年来发病率呈上升趋势，本组病例的患者均较年轻。IPF主要表面为进行性的呼吸困难，早期症状不典型，晚期症状常有感冒发生，同时会有发烧发生[4-5]。
3.1 IPF的病因和病理：特发性肺纤维化病变局限于肺部，有学者认为吸烟和不良的环境是两大主要致病因素，另外煤尘、金属粉末和木屑是另一重要致病因素。IPF起病隐匿，发病过程主要有三个步骤[6-7]：①肺泡的免疫和炎性反应；②肺实质损伤；③受损肺泡修复和纤维化。IPF病理主要是肺组织内出现片状、不均一、分布多变的间质改变。
3.2 IPF的影像诊断：①X线胸片：95%异常，具体表现为双侧弥漫分布、相对对称、多位于基底部、周边部、或胸膜下区的网状或网状结节影，多伴有肺容积缩小。随病情进展，可出现多发性囊装透光影（蜂窝肺）；②高分辨率CT（HRCT）平扫：HRCT是诊断IPF的最为有效的方法之一，在判断IPF疾病的活动状态、指导治疗和疗效判断、对患者的预后判断有着非常重要的意义。本组病例中的患者与她姐姐的肺部CT表现相符（见图4），病变在两下肺外围部集中分布，有时会累及到肺中央，从胸膜下至肺门病变慢慢有所减轻。
早期：主要是肺泡间隔的急性炎性反应改变。CT表现为两肺下部弥漫性小片状和颗粒状高密度影，两侧大致对称，愈近胸膜病变愈密集，HRCT显示小片状阴影主要为小叶性实变或小叶融合性病灶，其内可见含气的支气管影。磨玻璃样阴影是早期常见的CT征象之一，分布于小片状阴影相同，只是密度比小叶性实变阴影低。早期的小叶间隔增厚主要见于胸膜下区，在薄层CT上呈现与胸膜垂直并达到胸膜平行线状影，长约1～2 cm，边缘光滑，可能与淋巴性水肿有关。
晚期：主要是慢性肺纤维化。各种CT表现从不同的角度反映了肺间质纤维化的过程，或反映了不同的组织结构。不同的纤维化表现：胸膜下区的弓线影，小叶间隔增厚扭曲，网状及细颗粒状影，肺界面征，蜂窝状阴影，肺气肿，支气管扩张，局灶性肺组织密度增高等。
综上所述，结合病理改变，IPF的HRCT主要表现有如下几个特点：①毛玻璃状改变；②不规则线状或网格状影；③牵拉性支气管扩张；④小结节影；⑤蜂窝状。
3.3 鉴别诊断：本病诊断较为困难，应仔细询问病史，进一步行高分辨率CT扫描，影像特征结合临床病史资料，再排除各种致肺间质改变的疾病并作相应检查。肺活支气管肺泡灌洗液检查是诊断本病的主要依据。在X线胸片表现为双侧弥漫性粟粒状、小结节状时，应与粟粒型肺结核、弥漫型细支气管肺泡癌、矽肺病和其他一些肺部弥漫性结节疾病这几种疾病相鉴别。
总之，在本组病例中，有3例患者的家人均同时患有特发性肺纤维化，其中1例患者及其亲人在早期未见有明显临床症状，仅于常规体检时发现。近年来，特发性肺纤维化的发病率呈上升趋势。鉴于该病有家族性多发的情况，家族性多发在特发性肺纤维化的诊断中具有重要的参考价值。
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肺纤维化范文第5篇
【关键词】 肺纤维化；，，肾阳虚；，，糖皮质激素；，，受体
摘要：目的探讨糖皮质激素受体(GR) mRNA在肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织的表达及其意义。方法60只健康SD大鼠，随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及肾阳虚肺纤维化组(RYA)，每组再分成两亚组，每亚组10只，用博莱霉素气管内滴入及腺嘌呤灌胃复制肺纤维化及肾阳虚肺纤维化大鼠模型，于14 d及28 d取大鼠肺组织，运用组织芯片，通过HE及胶原纤维染色以判断肺炎症及纤维化程度和对肺内胶原蛋白定量，通过原位杂交(ISH)对肺组织GRmRNA表达进行定位定量分析。结果14 d时，肾阳虚组及肺纤维化组GRmRNA表达皆呈上调趋势，但无统计学意义(P>0.05)；28 d时，BLM组GRmRNA表达明显上调，与BLM组比较，RYA组GRmRNA表达则明显下调(P
关键词：肺纤维化； 肾阳虚； 糖皮质激素； 受体
Abstract：ObjectiveTo investigate the glucocorticoid receptor(GR)mRNA expression in lung tissues in pulmonary fibrosis with renalyang asthenia and pulmonary fibrosis rat models and its clinical value.Methods60 healthy SpragueDawley rats were randomly pided into the NS group(NS)，the pulmonary-fibrosis group(BLM) and the pulmonary fibrosis with renal-yang asthenia group(RYA)，every group had 20 rats and were subpided into two subgroups by 14 days and 28 days courses，each subgroup had 10 rats.Pulmonary fibrosis rat models were established by blemycin-induced by way of oncedripping into trachea， in addition， pulmonary fibrosis with renalyang asthenia rat models as well as adding adenine by primed-stomach once each day，on day 14 and day 28 respectively，these rats were killed and the rat lung tissues were acquired;and by means of tissue microarray associated with computer-picture analysis technology，the severe degree of inflammation and fibrosis，collagen quantity in rat lungs，were estimated by HE and collagen dye， GR mRNA expression were detected by in situ hybridization way.ResultsGR mRNA expression in rat lung of BLM were upregulated(P0.05)，however，those in RYA were downregulated(versus BLM P0.05) on day28; GR mRNA expression among three groups were not significant on day14.ConclusionGR mRNA upregulation in lung tissue could be one of the mechanism of glucocorticoid's effective cure for pulmonary fibrosis，and GR mRNA downregulation in lung tissue in renalyang asthenia syndrome could be one of cause of glucocorticoid's noneffective therapy for pulmonary fibrosis，in addition，the Chinese traditional medicine with warming Yang effect could be effective therapy for pulmonary fibrosis.
Key words：Pulmonary fibrosis; Renal-Yang asthenia; Glucocorticoid ; Receptor
肺纤维化的治疗目前临床上仍以糖皮质激素为主，虽有一定疗效，但病情的进展恶化往往难以逆转甚至延缓；肾阳虚证经研究证实主要为下丘脑-垂体-靶腺轴(肾上腺、性腺、甲状腺)功能减退所致，肾上腺轴功能减退致糖皮质激素分泌减少为其主要机制之一［1］；此外，糖皮质激素只有与其受体(GR)结合方能将信号传递而发挥作用，故明确GR mRNA在肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织的表达，对评价糖皮质激素及具温肾壮阳(温阳)作用的中药在肺纤维化防治中的作用和指导其临床应用将具有非常重要意义。
1 材料与方法
1.1 材料COOLPIX450高级数码像机(日本Nikon公司)，美国Imagepro plus 专业图像分析软件系统(美国Media Cybernetics公司) ;Model 2000，MicroHybridization Incubator杂交箱(美国Robbins Scientific Corporation) ;GR原位杂交检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司); 博来霉素(批号Y32480)15 mg/支(日本化药株式会社) ;腺嘌呤(Adenine 11003) (北京欣经科生物技术有限公司);健康SD大鼠60只，150~250 g，6~7周龄，雌雄各半(四川大学华西实验动物中心提供)。
1.2 方法
1.2.1 实验动物分组、动物模型的建立［2~4］及标本的采集①健康SD大鼠60只，雌雄各半，实验条件下饲养1周后分组，先按性别分层后随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及 肾阳虚肺纤维化组(RYA)，每组20只，再据14，28 d两时相再分成两亚组，每亚组雌雄各5只；②大鼠称重后，予速眠新II(1 ml/kg)大腿外侧肌注麻醉，生效后在无菌操作下于颈前正中切开皮肤2~3 cm，钝性分离皮下组织及肌肉，暴露气管，用7号针头连1 ml注射器，于气管环间刺入气管后平行进气管，将针头斜面对着气管前壁缓慢滴入博来霉素(5 mg/kg)，然后缝合切口，将大鼠直立旋转使药液于肺内分布均匀，放回笼中正常饲养，并从即日起，BLM组每天灌胃生理盐水3 ml，RYA组，则在BLM组基础上每天灌胃腺嘌呤(300 mg/kg)；③ NS组气管内滴入生理盐水0.2~0.3 ml，并每天灌胃生理盐水3 ml。所有大鼠分别于第15天和第29天早上8~9点速眠新II麻醉下取标本。先于腹腔静脉抽血3~5 ml，静置15 min后3 500 r/min离心10 min，吸取上层血浆于Ep管中，于20℃保存备用，同时于腹主动脉放血至动物死亡后剖开胸腔将肺完整取出，先观察肺大体情况并称肺重，然后用4%多聚甲醛灌注左肺后剪下左肺下叶于4%多聚甲醛中固定；④按肺系数= 肺重 (g)/体重( g)×100%计算肺系数，肺纤维化程度越重，其肺系数就越大；⑤据文献方法［2~4］，从肺组织HE染色的病理改变胶原纤维染色及定量对肺纤维化模型进行鉴定，并在此基础上，结合大鼠的整体表现、肾脏的肉眼及显微镜下改变和肾功能及血浆皮质醇的变化对肾阳虚肺纤维化模型进行鉴定。
1.2.2 效应指标的检测
1.2.2.1 血浆尿素氮(BUN)肌酐(Cr)及皮质醇(Cor)含量测定①BUN和 Cr的测定采用比色法，严格按试剂盒说明书操作；② Cor的测定采用放射免疫法，并运用自动γ计数仪进行测定，严格按试剂盒说明书操作。
1.2.2.2 组织芯片的制作及相关指标的检测［5，6］(1)制作:肺组织于4%多聚甲醛中固定8 h后制成蜡块，并将28 d BLM组作两份切片(6 μm)，用于从原位杂交(ISH) 水平鉴定组织芯片用。之后按文献方法［5，6］操作，将所有蜡块用于制作组织芯片，共制作4套组织芯片蜡块，同时相的3组标本放在同一组织芯片块上，每套两个组织芯片蜡块，每个蜡块含30点阵，每点直径2 mm。 切片:将组织芯片蜡块于切片机上切片(6 μm)，漂片后粘贴于玻片上于80℃烘烤3 h后室温下保存备用。将备用的组织芯片玻片分别用于HE及胶原纤维染色、原位杂交检测GR mRNA。鉴定:肉眼及用胶原纤维染色，观察玻片上各点阵情况，若点阵上各点完整无缺失则组织芯片合格。此外，从原位杂交GR mRNA定量比较组织芯片及原蜡块以鉴定组织芯片对原蜡块的代表性。(2)胶原纤维染色:采用显示胶原纤维细胞和肌肉的新染法，按文献方法［3］进行，结果判断为胶原纤维呈红色，细胞核和血细胞呈绿色，肌肉呈黄色。（3）GR mRNA.表达的原位检测［2，3］：①运用组织芯片，常规脱蜡脱水，在探针杂交前所用的液体皆加入RNA酶的抑制剂Erasol使浓度达0.1%；② 30%H2O21份加蒸馏水10份滴加于切片上室温10 min，蒸馏水洗3次；③ 切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶，室温消化组织芯片5 min(石蜡切片10 min)，用原位杂交用PBS洗3次各5 min，蒸馏水洗1次；④室温后固定10 min，蒸馏水洗3次；⑤ 每张切片加20 μl预杂交液，放于湿盒中于杂交箱中40℃预杂交2 h，吸取多余液体后于每张切片加杂交液20 μl，盖上封口膜于杂交箱中40℃杂交过夜；⑥杂交后的洗涤:揭掉封口膜37℃左右水温的2×SSC洗5 min×2次；37℃0.5×SSC洗15 min×1次；37℃0.2×SSC洗15 min×1次；⑦滴加封闭液于37℃反应30 min，甩去多余液体后滴加生物素化鼠抗地高辛于37℃反应60 min，原位杂交用PBS洗5 min×4次；⑧滴加SABC于37℃反应20 min，原位杂交用PBS洗5 min×3次，之后滴加生物素化过氧化物酶于37℃反应20 min，原位杂交用PBS洗5 min×4次；⑨DAB显色20~30 min，水洗终止反应，经苏木素复染、盐酸酒精分化及自来水冲洗后脱水、透明、封片。⑷ 图像采集、处理及分析定量：利用 Imagepro plus 专业图像分析软件系统，于组织芯片上的每点(包括部份石蜡切片)的左右上下四个视野各采集一张100倍的图像用于图像处理及分析，4张图像的平均值代表该芯片上该指标的量，4套芯片上相对应的同一指标的4点再取平均值，代表该大鼠肺组织的该指标的量:①HE染色，运用图像分析软件的计数功能对图像上的细胞核进行分离然后自动计数细胞核数，每个细胞核代表一个细胞，并与正常对照组细胞数的均数比较，其高出的差值越大，示炎症程度越重；② 胶原纤维染色定量总胶原和原位杂交定量GR mRNA，运用图像分析软件先进行颜色分离，然后自动计算其积分光密度(IOD)；IOD为各个单独探测到的像素光密度的总和，包含了横向的面积和纵向的像素深度，其值越大示所检测指标含量越高，故IOD越大示纤维化程度越重，此外，由于图像分析软件不能区分肺组织的不同细胞，故只能肉眼定位，大致判断目的基因表达的分布。
1.2.3 统计学处理实验数据用SPSS13.0软件行单因数方差分析(ANOVA)，所测数据以 ±s表示。
2 结果
2.1 动物表现肺纤维化组 (14 d及28 d)大鼠取食排便活动均减少，肾阳虚纤维化组还表现为消瘦，有的倦缩拱背，毛发松散脱落，口唇苍白，眯眼，尾巴湿冷。生理盐水组活动取食皆活跃。
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2.2 病理改变
2.2.1 肾阳虚纤维化组双肾肿胀增大，表面见黄色米粒状颗粒弥漫分布，但不突起肺纤维化组和生理盐水组双肾无明显肿胀增大。生理盐水组肺表面光滑，呈粉红色，弹性良好；肺纤维化组及肾阳虚纤维化组肺呈暗红色，体积增大，弹性较差，表面凸凹不平，但肺纤维化组更为明显见。图1~3。
1.NS(28d 肺肾) 2.BLM(28d 肺肾) 3.RYA(28d 肺肾)
图1 各组大鼠肺肾大体改变比较（略）
2.2.2 肾脏及肺病理光镜观察肾阳虚大鼠肾皮质区大多数肾小球毛细血管基底膜增厚，系膜细胞增多，肾小球呈分叶状，除见较多异物肉芽肿结节之外，主要病变在肾小管，尤其是近曲小管与间质的炎症、异物肉芽肿、肾小管囊状扩张并有较多纤维化病灶形成。肺纤维化组和生理盐水组肾组织未见异常改变。生理盐水组肺组织结构清晰，肺泡壁未见增厚，肺泡上皮细胞结构完整，胶原染色示无明显胶原沉积。肺纤维化组肺泡间隔显著增宽，肺泡腔变形、闭塞、成纤维细胞及其基质增生，其中有较多的单核细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润，胶原染色示红色的胶原条索状弥漫沉积，交织成网。肾阳虚纤维化组上述改变较轻，但炎性细胞浸润程度依旧；胶原染色示肺泡间隔区域胶原沉积减轻，但支气管壁及其周围仍沉积明显。见图2。
2.3 各组肺系数肺炎症及纤维化程度比较14 d时，RYA组和BLM组肺胶原纤维的沉积及炎性细胞浸润皆非常明显，但二者比较无明显差异(P
表1 各组肺系数肺炎症及纤维化程度比较（略）
与NS组比较P>0.05;， ，，，＃，＃＃， ＃，P0.05; ， ＃，P0.05; P
1.NS(28d 胶原染色 ×100)
2.BLM(28d 胶原染色 ×100)
3.RYA(28d 胶原染色 ×100)图
图2 各组大鼠肺组织胶原沉积程度比较（略）
1.NS(28d ISH ×100)
2.BLM(28d ISH ×100)
3.RYA(28d ISH ×100)
图3 各组大鼠肺组织GRmRNA表达比较（略）
2.4 各组血浆Cr BUN及Cor含量比较RYA组大鼠血浆Cr 及BUN皆明显升高，Cor则明显降低，提示RYA组大鼠肾阳虚形成；BLM组三指标则无明显改变。见表2。
表2 各组血浆Cr BUN及Cor含量比较（略）
与NS组比较，*P>0.05， **P
2.5 肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织GRmRNA的表达14 d时，RYA组及BLM组GRmRNA表达皆呈上调趋势，但与NS组比较无统计学意义；28 d时，BLM组肺组织GRmRNA表达明显上调，主要分布于Ⅱ型肺泡上皮及支气管上皮细胞、淋巴细胞及巨噬细胞的胞核胞浆中，而RYA组无明显上调，但与BLM组比较，GRmRNA表达则明显下调。见图3及表3。
表3 肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织GRmRNA的表达（略）
与NS比较*，＃， ＃＃P>0.05， ** P0.05， ＃＃P
3 讨论
肺纤维化为肺间质结缔组织代谢失衡而过度沉积所致，目前还未有特效的治疗方法，临床上仍以糖皮质激素治疗为主，虽有一定疗效，但病情的进展恶化往往难以逆转甚至延缓；据研究证实，肾阳虚证的本质主要为下丘脑-垂体-靶腺轴功能减退所致，而温阳中药能改善此轴功能，其中，以肾上腺轴功能减退糖皮质激素分泌减少为主要机制［1］，据此机制，说明糖皮质激素具有温阳作用，而具有温阳作用的中药也可能具有防治肺纤维化的潜在价值；此外，糖皮质激素只有与其受体结合方能将信号沿受体后信号通路下传而调控靶基因的表达而发挥作用，故我们运用中西医结合之优势，建立了肾阳虚肺纤维化及肺纤维化大鼠模型，并从GR mRNA表达的水平来评估温阳中药及糖皮质激素在肺纤维化防治中的价值。据腺嘌呤致肾阳虚和博莱霉素致肺纤维化动物模型相关文献的评价方法［2~4］结合客观指标肾功能及血浆皮质醇的改变，说明肾阳虚肺纤维化及肺纤维化大鼠模型复制成功。据Pujol L［7］等研究发现，对糖皮质激素敏感的间质性肺疾病结节病和隐源性间质性肺炎患者肺组织GRalpha mRNA的表达明显高于对激素不敏感的特发性间质纤维化的患者，而GRbeta mRNA则无明显差异；但肺纤维化肺组织GR mRNA的具体表达情况目前还未完全明了。据我们的实验结果显示，在博莱霉素致大鼠肺纤维化形成过程中，GR mRNA在肺纤维化大鼠肺组织的表达于2周时无明显上调，4周时却明显上调，而此时相是以I型胶原纤维沉积为主，这就说明肺组织GR mRNA表达的上调是糖皮质激素防治肺纤维化之所以有效的机制之一；此外，大鼠肺组织的炎症反应程度于2周及4周两时相无明显差异，提示肺组织GR mRNA表达的上调与肺组织炎症反应程度无明显比例关系，说明糖皮质激素防治肺纤维化的作用并不完全依赖其抗炎作用。据实验结果显示，在大鼠肾阳虚肺纤维化形成过程中， 肺组织GR mRNA表达无明显上调，提示肾阳虚抑制了肺纤维化肺组织GR mRNA表达的上调，即在肾阳虚状态下肺纤维化肺组织GR mRNA表达下调；据中医认为，久病及肾，久病必累及肾之阴阳［8］，故随着肺纤维化病人病程的进展，常常会致肾阳虚之发生，而此时肺组织GR mRNA表达下调，这就是临床上许多肺纤维化病人对糖皮质激素不敏感及糖皮质激素未能阻止病程进展的原因之一，当然，肺组织GR mRNA表达下调也可认为是肾阳虚证的物质基础之一。此外，经上千年的临床实践已明确温阳药能纠正肾阳虚，现代研究也证实温阳药确能改善下丘脑-肾上腺轴之功能［1］，正常情况下，糖皮质激素高分泌日久会导致GR的下调，反之亦然，但在肾阳虚状态下，据实验结果显示血浆糖皮质激素及肺组织GR mRNA表达皆明显降低，故温阳药在改善下丘脑-肾上腺轴功能的同时也极有可能上调肺组织GR mRNA的表达， 而糖皮质激素防治肺纤维化的作用巳非常明确，故可认为温阳中药对肺纤维化具有防治作用，值得进一步研究。
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肺纤维化范文第6篇
[关键词] 骨髓间充质干细胞；肺纤维化；成纤维细胞；肺泡损伤
[中图分类号] R256.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）07（b）-0034-04
[Abstract] Pulmonary fibrosis caused by various reasons is a chronic inflammatory interstitial lung disease. There are many medicine used in clinic including hormone， immunosuppressor， cytotoxic agents， antifibrotic drug， immunomodulator and so on， but clinical experience confirms that the curative effect is not so good. Therefore， it is important to ascertain the pathogenic mechanism of pulmonary fibrosis， and seek valid treatment method. In recent years， bone marrow-derived mesenchymal stem cell （BMSCs） transplantation as a novel bio-therapy method has become one of the hotest points in the field of medicine. BMSCs may offer the means of recapitulating several mechanisms （inhibiting inflammatory response， promoting epithelial tissue repair， reducing the collagen deposition， inhibiting the expression of matrix metalloproteinases， etc， that are sufficient for alleviating pulmonary fibrosis. And BMSCs could become the seed cells treating pulmonary fibrosis because of the typical biological character. But recent research finds that there are some differences between the opportunity to BMSCs implantation and therapeutic effect. This review will provide an overview on the role of bone marrow-mesenchymal stem cell in pulmonary fibrosis.
[Key words] Bone marrow-derived mesenchymal stem cell； Pulmonary fibrosis； Fibroblast； Alveolar damage
肺纤维化为慢性进展性、消耗性疾病，致死率较高，预后差，确诊后平均生存年限均小于5年。近年来患病率逐年升高，每10万人患病例数从6.8例增加至16.3例，其最终导致肺功能丧失呼吸衰竭，严重影响人们的生活[1]。引起肺间质纤维化的危险因素众多，其中主要包括吸入灰尘、粉尘、烟尘；长期大量吸烟；服用或接触胺碘酮、博来霉素等相关药物；以及基础疾病如结缔组织或血管炎性疾病等[2]。当外界危险因素作用于机体后至肺纤维化形成大概可分为3个阶段：①急性肺毒性阶段：即外界毒性刺激可引起DNA双链的断裂，并且引起肺泡上皮细胞凋亡和坏死；②炎症阶段：免疫细胞进入肺内并且释放各种各样的可促进肺纤维化形成的细胞因子；③胶原蛋白沉积阶段：当肺纤维化发生时，正常的肺间质增大，被增殖的纤维母细胞和平滑肌细胞填充，基质金属蛋白酶表达增高并且参与受损肺组织结构的重建。研究表明，骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）移植可对损伤的肺组织具有保护作用，并且通过阻断肺纤维化形成的信号通路来抑制纤维化的发生[3]。本文将通过以下几个方面具体介绍BMSCs在肺纤维化中的作用。
1 骨髓间充质干细胞的生物学特性
当肺组织损伤时，BMSCs可感知损伤信号，并且迁移并定植到受损组织参与组织损伤与修复。经尾静脉或器官移植的BMSCs可定植于肺、心、脾、肝、小肠等器官，并且可最早、最大量的定植于肺组织。Lee等[4]研究表明，经小鼠尾静脉注射荧光标记的BMSCs，可检测到BMSCs在肺脏组织内的迁移和定植率是最高的，1 h后可高达83%，24 h定植率为42%，随时间延长含量降低，而在心脏、脾脏、肝脏、小肠1 h定植含量小于1%，24 h后含量几乎为零。Zangi[5]实验研究也得到类似结果。在博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中发现，受损肺组织部位的细胞可产生一种可溶性细胞因子如粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）等调节骨髓池中的干细胞数量，从而通过SDF-1/CXCR4轴刺激BMSCs增殖并且迁移至损伤的肺组织，发挥减轻博来霉素导致的肺组织损害的作用。BMSCs的这种可感知受损信号并迁移至损伤部位的功能为其在肺纤维化中的运用提供理论基础。
2 骨髓间充质干细胞可分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞
BMSCs具有多向分化潜能，体外培养发现，在不同的培养条件下BMSCs可增殖分化为不同类型细胞，如Ⅱ型肺泡上皮细胞，来参与受损组织的修复[6]。肺部上皮细胞分为Ⅰ型、Ⅱ型肺泡上皮细胞，正常情况下Ⅰ型肺泡上皮细胞只占肺泡上皮细胞群的40%左右，其主要作用为水和离子的转运、宿主防御、肿瘤抑制；其余为Ⅱ型肺泡上皮细胞，其除了可以合成和分泌肺泡表面活性物质、细胞因子、生长因子受体、酶及其他基质蛋白外，还能在肺泡上皮损伤后增殖分化成为Ⅰ型肺泡细胞对肺组织进行修复，Ⅱ型肺泡上皮细胞具有干细胞的功能，可参与肺的损伤与修复，有“修复细胞”的美誉[7-8]。在肺纤维化发生早期阶段，外界有毒物质刺激使肺泡结构受损，Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤、凋亡和坏死，这也是肺纤维化早期重要的特征，当其出现过度凋亡时就容易造成肺组织修复异常，从而导致肺纤维化的发生和肺实质的重构[9]。肺纤维化发展过程中，MSCs可分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞，并且在一定程度上修复受损肺组织部位的干细胞池[10]，使肺泡表面受损的肺泡上皮细胞来源增加，从而增加其损伤修复能力从而来缓解肺纤维化的发生。同时BMSCs还具有抗肺上皮细胞凋亡作用，它能抑制促凋亡蛋白Bax的表达，减少肺损伤的Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡[11-12]。当Ⅱ型肺泡上皮细胞出现过度凋亡时容易造成肺组织修复异常，从而导致肺纤维化的发生和肺实质的重构，而BMSCs可阻断该过程的发生对肺组织具有保护作用。
3 骨髓间充质干细胞抑制炎性反应及旁分泌功能
在肺纤维化早期阶段，BMSCs可通过抑制前炎症信号通路和上调抗炎通路来保护受损的肺组织[13-14]。Oriz等[15]报道称，BMSCs可产生高水平的IL-1受体拮抗剂，从而阻断IL-1的前炎症细胞因子，降低前炎症细胞因子、血管生成因子、一氧化氮等。同时MSCs可降低支气管肺泡灌洗液中的巨噬细胞炎症蛋白-2和TNF-α水平来保护受损的肺部组织，并且提升血浆和支气管肺泡灌洗液中的IL-10的水平。IL-10为单核细胞分泌的一种抗炎细胞因子，它可下调T1细胞因子的表达[16-17]。在博来霉素诱导的肺纤维化发生时，BMSCs可通过分泌IL-1ra细胞因子来降低纤维化后期胶原蛋白的堆积和基质金属蛋白酶的水平[18]。IL-1ra是一种细胞因子，在肺部损伤时，它能够和主要的炎症因子IL-1β和IL-1特异性的竞争受体，发挥抗炎效应。在博来霉素诱导的肺纤维化早期，由于博来霉素的刺激作用，大量细胞因子如INF-α、IL-2、IL-1β、IL-4水平升高，BMSCs移植后可大大降低这些细胞因子的水平，从而减弱和抑制炎性反应，缓解肺纤维化的发生。另外，BMSCs还具有旁分泌多种细胞因子的功能，如肝细胞生长因子、干细胞因子、基质源因子1α、转化生长因子-β、肿瘤坏死因子-α等，调节促炎/抗炎因子的平衡，进而来调节内皮细胞和上皮细胞的通透性，降低炎性反应，加强组织修复[19-20]。并且BMSCs本身具免疫原性，可减轻宿主的免疫排斥反应，进而减弱肺纤维化发生时的炎性反应，起到保护肺组织的作用。
4 骨髓间充质干细胞对肌成纤维细胞活化和细胞外基质的影响
肺纤维化的典型表现为进行性的细胞外基质沉积，肺间质增多，肺组织结构破坏，肺功能逐步丧失[21]。肌成纤维细胞活化是肺纤维化发生的关键环节，高表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），肌成纤维细胞来源主要由上皮-间质转化和原位成纤维细胞的激活与转化[22-23]。TGF-β在促进肌成纤维细胞活化中起关键作用。外源性的移植BMSCs可阻断TGF-β/Smad通路，来减少肌成纤维细胞活化，进而抑制肺纤维化的进程[24-25]。博来霉素诱导的肺纤维化动物模型肺组织高表达基质金属蛋白酶如MMP2、MMP9、MMP3使胶原蛋白堆积，早期经尾静脉注射BMSCs可减少成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化，并抑制基质金属蛋白酶的表达，从而降低胶原蛋白的沉积，减缓肺纤维化。
5 骨髓间充质干细胞或可诱导加重肺纤维化
一些学者认为[26]，BMSCs也许是病理状态下肺纤维发生时纤维母细胞主要来源。肺纤维化的形成过程十分复杂，其中包括外周血单核细胞分化成的纤维细胞和成纤维细胞样的祖细胞。体外研究发现[27]，BMSCs可产生Wnt蛋白和TGF-β，从而使成纤维细胞增殖和细胞外基质的形成，这更增加了BMSCs促进纤维母细胞堆积和胶原沉积的可能性。有研究证明[28]一定条件诱导下，BMSCs可向成纤维细胞分化，以表皮生长因子对体外生长的BMSCs进行诱导分化，培养14 d后细胞呈现均一的纤维细胞样带有长突起的纺锤形细胞，Ⅰ、Ⅲ型胶原染色均为阳性。He等[29]亦证实在碱性成纤维细胞生长因子的诱导下BMSCs分化为成纤维细胞，如此可以推测临床上如果在肺纤维部位移植BMSCs，其在局部生长因子刺激下或可直接分化为肺成纤维细胞。也有研究证明在一定条件下BMSCs可分化为肌成纤维母细胞、合成细胞外基质、表达α-SMA，进而促进纤维化的发生[30]。
6 骨髓间充质干细胞植入时机的选择与疗效差异
有学者认为[31-32]，不同时机植入BMSCs对治疗肺纤维化的疗效不尽相同。崔瑗等[31]的实验研究为监测不同时间BMSCs对博来霉素诱导的肺纤维化动物模型的影响，实验发现用博来霉素刺激实验动物造模后分别于第1天和第7天给予尾静脉移植BMSCs，对模型动物肺组织病理分析发现，诱导肺纤维化模型后第1天给予干预比第7天给予干预治疗效果要明显；并且在肺损伤第1天给予BMSCs干预治疗的动物模型肺组织内可检测到外源性来源的BMSCs细胞，而在第7天给药组却没有类似结果。分析其原因可能与博来霉素刺激后第7天给予移植BMSCs干预肺脏对BMSCs的趋化作用降低有关。Epperly等[30]的报道证明，损伤后中晚期植入携带绿色荧光蛋白基因的BMSCs细胞在接受照射的受体小鼠内经历了一个从巨噬细胞到成纤维细胞的转变，该时期正是其肺泡纤维化迅速发展的时期，因此晚期植入BMSCs甚至可能起到促进肺纤维化作用。由上可以得出这样的结论BMSCs 对于肺纤维的治疗作用有可能越是在肺组织损伤的早期移植MSCs，其控制肺纤维化的效果越好。
目前BMSCs移植在肺纤维化治疗中作用效果的研究仍未定论，综合现有文献结论笔者认为，在肺纤维早期肺泡上皮损伤及炎症阶段BMSCs通过其自身的优势可发挥一定抗纤维化作用；随着肺纤维化的进程的发展，在肺纤维化中后期BMSCs移植或可加重肺纤维化的程度。因此未来BMSCs移植在肺纤维化治疗方面的运用仍需进一步的研究，探明BMSCs移植的最佳时机及移植的最佳剂量并进而研究其作用机制，以期找到治疗肺纤维化的合理的治疗方案。
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肺纤维化范文第7篇
【关键词】特发性肺纤维化；中西医结合疗法
特发性肺纤维化是以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱最终导致肺间质纤维化为特征的疾病。其病因可能是由病毒、真菌、环境污染、毒性物质等原因造成的。这些致病因素作用于肺内常驻免疫细胞，产生炎症和免疫反应。特发性肺纤维化的主要症状为进行性呼吸困难、咯痰、咳嗽，其予后不良，多数患者在确诊后5年内死亡。目前治疗主要以糖皮质激素及细胞毒性药物为主，但疗效不满意[1]。笔者采用中西医结合的方法，治疗该病62例，取得满意疗效，现总结报告如下。
1资料与方法
11一般资料62例患者均为2000年6月至2010年6月我中心收治的门诊或住院患者。其中男38例，女24例，年龄34～56岁。
12诊断标准参照2000年美国胸科学会（ATS）制订的标准[2]，依据病史、症状体征、肺部CT及相关检查。
13中医辨证分型参照《中医症候辨证规范》[3]及《中医诊断学》[4]有关内容，分为肺肾阴虚夹痰瘀型，肺脾气虚夹痰瘀型，脾肾阳虚夹痰瘀型。本文选择的62例患者均符合肺脾气虚夹痰瘀型。症见神疲乏力、喘息短气、咳声不扬、咯痰、面色皎白、食欲不振、舌淡苔白、脉细弱。
14排除标准患有肺结核、支气管哮喘者，慢性阻塞性肺气肿急性发作者，可能影响证候判断者。
2治疗方法
早期诊断，早期治疗。肺脾气虚夹痰瘀型以益肺健脾、化痰祛瘀为主。采用自拟宣肺化痰汤治疗。药物组成：黄芪20 g，丹参20 g，莪术15 g，全瓜蒌15 g，佛耳草12 g，桔梗12 g，鱼腥草20 g，沙参15 g，枳实12 g，白术12 g，炙甘草10 g，痰浊偏盛者，加白芥子12 g，竹茹20 g，瘀血偏盛者，加桃仁12 g，赤芍12 g，肺虚偏盛者，加五味子15 g，诃子肉15 g，黄精12 g，脾虚偏盛者，加山药20 g，莲子肉12 g，1剂/d，水煎分2次温服，1个月为1疗程，3个疗程观察疗效。所有患者均配合西药治疗，即波尼松30～40 mg/d，连服3～6个月，环磷酰胺100～150 mg/d，口服。
3治疗效果
62例患者治疗后，1年生存率9839%（1例患者死亡，61/62）。3年生存率为8871%（7例患者死亡，55/62）。5年生存率为6935%（19例患者死亡，43/62）。本组大部分患者经过中西医结合治疗后，临床症状及肺脾肾功能均有不同程度的改善。详见表1
4讨论
特发性肺纤维化是呼吸系统疾病中诊断最为复杂，最为困难的一组疾病，是国内外共同关注的一个疑难疾病，是威胁人体健康的疾病之一，它可使患者丧失劳动能力及生活自理能力，给自身及家人带来极大的负担和压力。近年来，对该病的研究越来越受到重视。但此病的病因仍不十分清楚。治疗上，在急性病例用糖皮质激素可改善症状，但慢性时多无效。应用免疫抑制剂及细胞毒性药物有协同作用[5]。这些药物存在依从性差，副作用大，耐药性高，易复发等缺点。而中药副作用小、作用温和，且能提高人体的免疫功能及耐受西药的能力，有改变血液流变的作用，在当今医学界日益受到重视。中西医结合治疗特发性肺纤维化在增强疗效、改善症状、减少药物副作用等方面均有重要意义。
在中医文献中，并无特发性肺纤维化的记载，该病属中医“肺痹”、“肺痿”、“咳嗽”、“虚劳”、“喘证”等范畴，病属本虚标实，其病因为肺气虚冷，瘀血内阻，痰浊热蕴。基本病机为营卫宣降逆乱，痰热瘀浊凝着，气阴肺体痹损。肺脾气虚夹痰瘀型患者，属肺痹而尚未出现肺痿者，治以益肺健脾，化痰祛瘀为主。方中黄芪补中益气，丹参莪术活血祛瘀行气，瓜萎、佛耳草宣肺止咳平喘；桔梗、鱼腥草宣肺祛痰排脓，沙参清肺养阴，枳实行气通痞，白术、炙甘草补气健脾润肺，诸药合用，共奏益肺健脾，活血祛瘀，化痰止咳，补气养阴之功。其疗效优于有关文献报道，值得进一步研究。
参考文献
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肺纤维化范文第8篇
【摘要】
目的通过观察细胞凋亡，探讨复方鳖甲软肝方防治肺纤维化的机理和疗效。方法选SD雄性大鼠180只，随机分为假手术组，模型组，阳性药物对照组，复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组，共6组，每组30只。博莱霉素常规造模的同时给药，假手术组和模型组每天灌胃生理盐水，其余4组灌药进行防治。各组分别于7，14，28 d随机抽取10只大鼠，8只制成光镜标本，2只麻醉后快速开胸取肺组织，进行电镜标本的制作。免疫组化载玻片用DEPC处理后备用。结果Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞以及成纤维细胞均有凋亡。bax在肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞，肺泡巨嗜细胞胞质和胞膜均表达。假手术组和高、中剂量组呈弱阳性表达，模型组强阳性表达。Bcl-2在核膜和线粒体表达，模型组强阳性表达，药物组弱表达。结论复方鳖甲软肝方通过调节细胞凋亡，上调Bax活性，抑制Bcl-2的活性，抑制Ⅱ型上皮细胞凋亡，减少纤维积聚和纤维化形成，对肺纤维化起到防治作用。
【关键词】 复方鳖甲软肝方；凋亡；超微结构
Abstract:ObjectiveTo study the preventive and therapeutic effect of compound prescription with turtle shell (CPTS) on rats with IPF (Idiopathic pulmonary interstitial fibrosis) caused by Bleomycin A5.Methods180 SD rats were randomly pided into six groups:sham operation group，model group，positive medicine group， high-dosage group， medium-dosage group and low-medium group.After they were given the medicine， ten rats in each group each time were killed respectively on the 7th，14th and 28th day. 8 of them were made for light microscope specimen. 2 rats were operated to open thorax and get lung tissue speedily. Immunohistochemical glass covers were dealt with DEPC for use.ResultsAT Ⅰ， ATⅡ and fibroblast all showed apoptosis， Bax expression in AT Ⅰ，ATⅡ and alveolus macrophage cytoplasm，cytolemma expression was less positive in sham operation group，high CPTS and medium CPTS groups and remarkably positive in model group，which showed CPTS could restrain apoptosis of AT and macrophage.Bcl-2 was expressed in chondriosome and on karyotheca. Expression in model group was less positive and remarkably positive in CPTS groups，which showed CPTS could restrain formation of IPF.ConclusionCPTS has obvious treating effect through reducing fiber piling and restraining forming of fibrosis on rats with IPF caused by Bleomycin A5， CPTS can regulate the alveolar apoptosis by inhibiting the Bcl-2 expression， enhancing the Bax expression and inhibiting the apoptosis of ATⅡ .
Key words:Compound prescription with turle shell; Apoptotic; Supermicro structure
特发性肺间质纤维化以肺泡上皮细胞凋亡（apoptosis）导致肺泡结构完整性破坏和肺成纤维细胞增生为特征［1］。早期各种炎症细胞和肺泡细胞分泌炎症因子引起细胞损伤与细胞增殖失控，启动细胞凋亡的途径，引起肺纤维化［2］。Bcl-2和Bax是一对相互拮抗的基因产物，两者自可形成同二聚体，也可相互作用为异二聚体。Bcl-2和Bax与凋亡调控直接相关：Bax增高促进细胞凋亡；Bcl-2增高抑制细胞凋亡［3］。两者的平衡状态维持肺组织细胞的正常，保持呼吸功能的稳定。
1 器材
1.1 药物防治药物：复方鳖甲软肝方(内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司生产的复方中药干粉，600 g/瓶，批号：20020501)，高剂量1.4 g·kg-1·d-1、中剂量0.7 g·kg-1·d-1、低剂量药物为0.35 g·kg-1·d-1，相当于临床日用量（0.1 g·kg-1）的14倍，7倍，3.5倍。
阳性对照药：醋酸强的松0.56 mg·100 g-1·d-1，广东华南制药厂生产，批号011201。
造模药物：注射用盐酸博莱霉素(bleomycin，BLM-A5 )，日本化药株式会社生产，批号X12100。
1.2 动物及分组SD大鼠180只，雄性，体重200～220 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，动物级别：SPF/VAF，许可证编号：SCXK2002-0003。饲养于同级动物房，自由饮水。购入后适应性饲养1周，进行实验分组。动物随机分为6组：假手术组；模型组；阳性药物对照组；复方鳖甲软肝方（以下表格中简称鳖甲方组）高、中、低剂量组。每组30只。各组均于7，14，28 d随机抽取10只大鼠采血，同时取肺制成光、电镜标本。
1.3 试剂凋亡试剂购于北京中杉金桥生物技术有限公司分装的Sigma公司试剂。SP-9002，ZLI-9017DAB，SC-7480 Mouse anti-Bax， SC-1666 Mouse anti-PAR4 SC-7382 Mouse anti-BCL-2。
1.4 仪器
石蜡切片机，莱卡2016、包埋机，KD-BM。低温冰箱MDFU5410(-60℃)成都泰盟科技有限公司，数码显微照相机Nikon Coolpi×4500。
2 方法
2.1 大鼠肺纤维化模型制备用1.5%戊巴比妥钠（0.1 ml·kg-1）腹腔注射麻醉后，将大鼠仰卧固定于手术台上，颈部剪去毛、常规碘酒与酒精消毒，切开颈正中皮肤，逐层分离，暴露气管，然后用一次性1 ml注射器向气管内注入0.3 ml博莱霉素生理盐水溶液（5 ml·kg-1），然后立即将动物直立并旋转，使药液在肺内均匀分布。假手术组大鼠肺部注入等体积的生理盐水。
2.2 取材和切片制备
2.2.1 各组光镜取材常规取材。事先用APES处理切片，37℃ 24～48 h温箱干燥备用。石蜡切片，厚度为5 μm。脱蜡后组织片裱于APES处理后的载玻片上（免疫组化染色），入37℃温箱干燥48 h备用。
2.2.2 各组电镜取材常规普通电镜取材。
2.3 免疫组化操作步骤（Bcl-2，Bax）将切片置于二甲苯Ⅰ、Ⅱ各脱蜡15 min100%酒精Ⅰ15 min，100%酒精Ⅱ15 min，95%酒精10 min90%酒精10 min，80%酒精5 min，70%酒精5 min，蒸馏水冲洗0.3%甲醇-过氧化氢室温下孵育20 min蒸馏水洗两次，2 min/次 ，PBS洗5 min0.1mol/L枸橼酸缓冲液内微波炉抗原修复（温度98～100℃）20 min室温自然冷却后加10%山羊血清，37℃湿盒内室温孵育30 min倾去血清，不洗，加一抗，鼠抗PARP(1∶100)，鼠抗Bax和Bcl-2（1∶100），湿盒内4℃过夜。取出湿盒室温放置30 min，37℃放置1 h0.01 mol/L PBS洗3次，5 min/次湿盒内滴加生物素化二抗（抗鼠1∶100）0.01mol/L PBS洗3次，5 min/次滴加辣根酶标记的链酶卵白素工作液，湿盒内37℃孵育30 min0.01 mol/L PBS洗3次，5 min/次DAB显色（1 ml蒸馏水中加入DAB、缓冲液及H2O2各一滴，混匀），显微镜下控制显色程度水充分冲洗以中止显色梯度酒精脱水：70%酒精30Sec，80%酒精1 min，90%酒精5 min，95%酒精10 min，100%酒精Ⅰ、Ⅱ各30 min，二甲苯各透明20 min中性塑胶封固阴性对照用0.01 mol/L PBS 代替一抗，其余步骤同上。
2.4 结果
判定在用DAB显色的免疫细胞化学切片上，阳性反应按颜色深浅分为：棕黄色为强阳性；黄色为阳性；浅黄色为弱阳性；与间质颜色一致者为阴性。
3 结果
3.1 电镜下细胞凋亡结果电镜下可见Ⅱ型细胞核膜表面凹凸不平，染色体边集，电子密度增强，固缩现象明显。胞质内凋亡小体中可见膜包裹完整的细胞核碎片。Ⅰ型细胞细胞器和胞质浓缩，细胞膜破坏，核染色质的凝集边界不清。
3.2 Bax和Bcl-2在肺组织中表达免疫组化结果
3.2.1 Bcl-2在肺组织中免疫组化结果7 d时Bcl-2在假手术组肺组织中细胞质、细胞核中均无表达，只在肺间隔Ⅱ型细胞的核膜部分表达；复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组在肺泡上皮细胞、肺泡巨噬细胞部分细胞质呈浅黄染色，呈现阳性表达，偶见肺巨噬细胞核着色（棕色）呈强阳性表达。假手术组在28 d时仍然呈肺间隔Ⅱ型细胞的核膜部分表达，其意义有待进一步探讨。模型组肺泡间隔细胞及巨嗜细胞胞质内见分布均匀的棕色颗粒，明显多于假手术组和药物组。且绝大多数已进入胞核，而复方组的Bcl-2的阳性表达则偏重于胞质。
3.2.2 Bax在肺组织中免疫组化结果实验结果表明，Bax在肺组织中主要在肺泡Ⅰ型、部分Ⅱ型细胞和肺泡腔炎症细胞的胞质部位呈阳性表达，部分在肺泡隔间质细胞表达。7 d时假手术组和高、中剂量药物组在肺泡Ⅰ型和Ⅱ型细胞、肺泡炎症细胞和部分间质细胞的胞质中呈阳性表达，尤其Ⅰ型细胞中表达较多，部分间质细胞的胞核也有表达。在模型组、阳性药物组、低剂量组在肺间隔肺泡Ⅰ型细胞有部分表达，在巨噬细胞胞浆呈阳性表达结果。14 d假手术组和高、中、低剂量组在肺泡间隔细胞质均呈现弱阳性表达。阳性药物组和模型组表达较弱。28 d假手术组和高、中、低剂量组肺泡间隔表达较好，呈阳性，但不如7 d表达明显。肺泡Ⅰ型上皮细胞也有部分表达。
4 讨论
BLM通过损伤肺部基膜，使上皮与间质细胞得以持续性接触从而激活上皮细胞和成纤维细胞，产生过量胶原，形成不可逆肺纤维化。复方鳖甲软肝方可以防止细胞脱落，特别是小剂量组效果最好。是否中药在某些情况下药量过大可以对机体产生毒副作用值得探讨。
最近研究结果显示［1～3］，肺泡上皮细胞凋亡在肺纤维化的发生与发展中可能起非常重要的作用。肌成纤维细胞在致炎因子的作用下，诱导上皮细胞的凋亡引发纤维化，这一点在体内外实验中均得到证实。凋亡的上皮细胞主要在肌成纤维细胞的基本病灶周围促使纤维灶的生成。另外在增生的上皮细胞中发现肿瘤抑制蛋白p53和p21表达上调，这可能导致细胞凋亡。众所周知：在IPF的形成过程中由于炎症的刺激，肺泡上皮细胞和各种炎症细胞都分泌细胞因子，细胞因子以各种形式或促进、或抑制调节各种细胞的凋亡。各种细胞都存在凋亡的状态，通过凋亡的形式调节肺泡的稳定状态。在实验中我们从电镜照片中可以看到肺Ⅰ型和Ⅱ型细胞凋亡，以及成纤维细胞均有明显的凋亡。说明这些细胞参与IPF的形成和防治过程。细胞中Bcl-2主要定位在核膜的胞质面、内质网及线粒体内膜上，与膜的结合对于其发挥功能是极其重要的［4］。实验表明，失去膜定位能力的Bcl-2蛋白抗凋亡能力减弱了许多。从实验中发现，Bcl-2在假手术组，7，14，28 d仅在肺组织中Ⅱ型细胞核膜中有表达，以7，28 d结果明显；细胞内线粒体则无表达，其意义有待进一步探讨。药物高、中、低剂量组呈现阳性或弱表达，模型组呈阳性或强阳性表达，说明复方鳖甲软肝方对Bcl-2蛋白的调亡有抑制作用，通过抑制凋亡来减缓胶原的形成。有报道说：肝的炎症早期，Bcl-2呈高表达，后期纤维化以后呈现低表达。同肺的假手术组一直仅在Ⅱ型细胞核膜表达相比有些不同，该种结果是否与不同脏器有关，还是有其他未知的影响因素［4，5］，有待进一步考证。但正是同一种凋亡蛋白无论通过何种途径在不同器官同时表达，证明其结构基础有相通性，从而支持了我们异病同治的理论。而同一种蛋白在不同器官有不同的表现形式，又表达了各个器官之间的差异性。
文献报道Bax主要在细胞质和细胞膜上表达［4］，但在7 d复方鳖甲软肝方各组均呈阳性表达，高剂量组呈强阳性，并且在细胞间质细胞的细胞核上的也有部分表达，其原因还有待进一步探讨。28 d 阳性药物组Bax却有极少的表达；假手术组和复方鳖甲软肝方高剂量组Bax在肺部的细支气管上皮细胞和肺间质细胞呈现阳性表达。14 d中间期相对较低，呈现弱阳性表达。表现为一种波浪型，同文献报道不一致［5，6］，其原因有待进一步探讨。
总之，复方鳖甲软肝方通过调节细胞中Bax和Bcl-2的凋亡蛋白表达，抑制成纤维细胞增生，抑制细胞因子，调节AT-II的凋亡，保持上皮细胞完整性，从而达到抗纤维化的作用。但两者在肺中相互作用的关系，我们将在后期实验中探讨。
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