改良的白术药材薄层色谱鉴别研究

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（浙江省中医药研究院中药研究所，浙江 杭州 310007）

摘 要：目的：建立新的白术薄层色谱鉴别方法。方法：以苍术酮、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ为对照品，分别以石油醚（60～90℃）与乙酸乙酯（10∶0.2）和正己烷- 醋酸乙酯（3.5∶1）为展开剂，进行二次展开，10%硫酸乙醇显色后在波长365nm下检识。结果白术药材薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。结论 该方法准确可靠，能够为白术的质量控制提供参考。

关键词：白术；薄层色谱鉴别；苍术酮；白术内酯Ⅲ；白术内酯Ⅰ

中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1673-7717（2011）03-0535-02

Research on the Advanced TLC Methods to Identify Atractylodes Macrocephalae

SHOU Dan, YU Zhong-ming，ZHANG Jian-min

（Zhejiang Academy of traditional Chinese medicine, Hangzhou 310007, Zhejiang,China）

Abstract:Objective: To establish the advanced TLC method of Atractylodes macrocephalae. Methods: Atractylon、Atraetylenolide Ⅲ and Atraetylenolide Ⅰ were used as the reference substance andthe mixture of benzene（60～90℃）-ethyl acetate（50∶1） and hexane-ethylacetate （3.5∶1） as the mobile phase with twice-development ,containing 10% sulfuric acid was used for coloration. The fluorescence chromatogram was detected at 365 nm in the ultraviolet lamp house. Results: The spots in the chromatogram of the test solution corresponding to the position to the each reference substance had the same color. Conclusion： The method is accurate and stable, and can be used for the quality control of Atractylodes macrocephalae.

Key words:Atractylodes macrocephalae；TLC ；Atractylon；Atraetylenolide Ⅲ ；Atraetylenolide Ⅰ

收稿日期：2010-09-29

基金项目：浙江省科技计划资助项目（2008R20007）;浙江省中医药科技计划资助项目（2007CB157）

作者简介：寿旦（1973-），女，浙江诸暨人，副研究员，硕士，研究方向：中药成分研究及中药新药开发。

白术为菊科植物白术Artactylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎，性苦、甘、温，归脾、胃经。具健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎之功效［1］，为中医临床传统用药，全国各地均有出产，但是研究报道以浙江、安徽、四川等地的品质为优。白术的主要成分有苍术酮、白术内酯等，已分离得到的有苍术酮、多种白术内酯及内酰胺以及杜松脑等近20个化合物［2］，药理研究证明苍术酮、内酯类成分是白术抗炎、健脾有效成分［3-4］。苍术为菊科植物茅苍术Artactylodes lancea（thumb.）DC.或北苍术Artactylodes chinensis （DC.）Koidz.的干燥根茎［ 5］,与白术为同科不同种属，易混淆。《中华人民共和国药典》2010年版一部中白术的鉴别方法以白术药材为对照药材，未设对照品。本文以苍术酮、白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ三种成分为对照品，采用二次展开，建立了专属性更强的白术薄层色谱鉴别方法，以期为白术药材的鉴别方法改进提供实验依据。

1 仪器与试药

双槽展开缸PF562C （瑞士CAMAG） ；薄层色谱摄像仪REPROSTAR 3 （瑞士CAMAG） ；AE-240电子分析天平（瑞士梅特勒）；KQ -400型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司） 。薄层板：硅胶G60预制板（20 cm ×20 cm，MERCK公司） 。微量定量点样毛细管（瑞士CAMAG）。

所用试剂均为分析醇（华东医药化学试剂公司） 。苍术酮、白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ对照品均由本实验室自行制备，经HPLC检测，其纯度在98%以上，符合鉴别试验纯度要求。白术药材样品采自浙江磐安浙八味种植基地，为从全国各地收集并复种的种质样品。苍术购自浙江省立同德医院中药房，白术及苍术均由高家鉴主任中药师鉴定。

2 方法与结果

2.1 对照品与供试品溶液制备

2.1.1 对照品溶液制备 精密称取苍术酮1mg至1mL量瓶中，加甲醇使苍术酮充分溶解，加甲醇至刻度，摇匀，即得含量为1mg/mL的苍术酮对照品溶液；精密称取白术内酯Ⅰ1mg至1mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得含量为1mg/mL的白术内酯Ⅰ对照品溶液；精密称取白术内酯Ⅲ 1mg至1mL量瓶中中，加甲醇至刻度，摇匀，即得含量为1mg/mL的白术内酯Ⅲ对照品溶液；

2.1.2 供试品溶液制备 取干燥白术粗粉1g，精密称定，置于锥形瓶中，加10mL甲醇，超声20min，放冷后，滤过，滤液于室温自然挥干至体积约1mL，即得白术药材供试品溶液。

2.1.3 苍术供试溶液制备 取干燥苍术粗粉，照供试品溶液制备方法操作，制得苍术供试溶液。

2.1.4 薄层色谱鉴别法［6］ 照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）实验，分别吸取上述各样品的供试品溶液和对照品溶液各2μL，分别用微量定量点样毛细管手工点样于同一块硅胶G板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（10∶0.2）为展开剂，预饱和20 min后上行展开8 cm，取出晾干，继用正己烷- 醋酸乙酯（3.5∶1）为展开剂，预饱和20 min后上行展开5cm，取出，晾干，浸入10%的硫酸乙醇溶液，迅速取出，105 ℃加热至斑点显色清晰，于365nm下观察，白术供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有相同的荧光斑点。苍术供试品色谱中，仅在与苍术酮对照品色谱相应的位置上有相同的荧光斑点，而与两种内酯对照品色谱相应的位置上无相同的荧光斑点。结果见图1。

2.2 药典方法试验及结果

2.2.1 供试品溶液制备 取干燥白术粉末0.5g，加正己烷2mL，超声处理15min，滤过，滤液作为白术供试品溶液。取干燥苍术粉末0.5g，加正己烷2mL，超声处理15min，滤过，滤液作为苍术供试品溶液。

2.2.2 对照药材溶液制备 取白术对照药材0.5g，加正己烷2mL，超声处理15min，滤过，滤液作为白术对照药材溶液。

2.2.3 薄层鉴别法 照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）实验，分别吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各10μL，分别点于同一块硅胶G板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，白术供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上有相同颜色的斑点。苍术供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上有相同颜色的斑点。结果见图2。

3 讨 论

（1）曾尝试通过一次展开进行鉴别，采用正己烷-乙酸乙酯为展开剂，结果苍术酮斑点Rf值适中，但是内酯成分近原点位置，没有达到有效分离，鉴别效果不佳。如采用石油醚-乙酸乙酯为展开剂，则对内酯成分的分离较为理想，但是苍术酮斑点几乎在溶剂前沿位置，色谱图中几种指标成分的分离及分布情况不甚理想。经过条件摸索，最终采用二次展开，首先用低极性展开剂系统将低极性成分，包括苍术酮分离至前沿位置，然后再用中极性展开剂系统进行较短展距的上行展开，分离内酯等中极性成分，而极性较大的杂质成分保留在原点附近。通过二次展开，使极性差异较大的3种指标成分达到较好的分离度，最大程度避免杂质干扰。

（2）对展开剂的种类及配比进行了摸索，分别选用正己烷-乙酸乙酯、环己烷-乙酸乙酯等作为一次展开剂，结果显示展开结果无显著差异，最终选用环己烷-乙酸乙酯为展开剂，比例50∶1为佳；分别选用石油醚-乙酸乙酯、石油醚-氯仿等作为二次展开剂，结果显示石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯分离效果好，斑点Rf值适宜，故最终选择以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（3.5∶1）为二次展开剂。

（3）供试品溶液制备方法的比较。曾经采用白术药材直接通过SPE固相萃取小柱进行洗脱分离的制备方法进行了试验研究，以白术粉末 1g，直接加入经甲醇、水预洗的固相萃取小柱（200mg/3mL）顶端，加水3mL，以1mL/min速度洗脱，继用20%甲醇溶液2mL洗脱，弃去上述2种洗脱液，用甲醇3mL洗脱，弃去初洗脱液0.5mL，收集后续洗脱液，室温自然挥干溶剂至1mL作为供试品溶液。试验结果近原点杂质明显减少，内酯斑点更清晰，但是由于操作过程较长，苍术酮斑点有所减小。并且含淀粉较多的样品经水洗脱后容易堵塞柱子。而正文中供试品溶液制备方法操作简单，苍术酮含量较高，可操作性强，虽然有少数白术样品薄层色谱图中近前沿部位有杂质，内酯成分清晰度不佳，但不影响结果判断。故最终确定甲醇直接提取为供试品溶液制备方法。

（4）试验中对显色剂及显色方法进行了比较，选用10%香兰素硫酸为显色剂，显色后色谱图在自然光下检视效果很好，苍术酮斑点清晰，但是内酯成分在自然光及365nm紫外灯下检视都没有明显的斑点，选用10%硫酸乙醇为显色剂，虽然自然光下色谱图中苍术酮斑点颜色较暗淡，但是内酯成分在紫外灯光下呈现为明显的蓝色荧光斑点，苍术酮为明亮的黄色荧光斑。因此确定10%硫酸乙醇为显色剂。在此基础上，分别以喷雾显色及浸渍显色显色方法，结果浸渍法显色效果好，且环境污染小，因此以浸渍法为显色方法。

参考文献

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典・1部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010： 95.

［2］ 李伟,文红梅,崔小兵,等.白术的化学成分研究［J］.中草药，2007，38 （10 ）： 1460-1462.

［3］ 周德文,周立勇.术类的药理和药效［J］.国外医药・植物药分册，1996，11（3）：120.

［4］ 李伟,文红梅,崔小兵,等. 白术健脾有效成分研究［J］.南京中医药大学学报，2006，22（6）：366.

［5］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典・1部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010： 150.

［6］ 叶燕, 程雪梅, 桂新.白术药材的薄层色谱研究［J］.时珍国医国药，2009，20（7）：1702.