外植体选择和灭菌对x果组织培养影响的初步研究

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇外植体选择和灭菌对x果组织培养影响的初步研究范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

摘 要：该文以x果为试验材料，研究了不同外植体与不同灭菌方法对x果组织培养的影响。试验结果表明：x果组织培养适宜外植体为室内沙培x果带腋芽茎段；最适灭菌处理为酒精30s+0.1%HgCl2灭菌8min。

关键词：x果；外植体；组织培养；灭菌

中图分类号 S66 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）02-16-02

x果（Mangifera indica Linnaeus）为漆树科（Anacardiaceae）x果属（Mangifera Linnaeus）植物，是我国重要的热带果树之一。其果实芒果具有独特的风味，富含维生素，被誉为“热带水果之王”，已在热带、亚热带多个国家及地区广泛种植[1]。x果种子在贮藏时极易失去生活力，所以一般多采用无性繁殖[2]。利用组织培养技术建立x果快速繁殖体系，能在较短时间和较小空间内获得大量纯合无性系组培苗，对加速x果良种繁育推广有着积极的意义。本文就x果茎段离体培养中的外植体选择和灭菌进行了探索性的研究，以期为x果组培快繁体系的完善提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 本研究供试品种为桂七x，品种来源及特征特性如下：桂七x又名桂热82号，树势中等，枝条开张花期较迟，属晚熟品种，成熟期8月中、下旬。丰产稳产。桂热x82号主要在百色市田东县及南宁市种植。2014年百色市x果种植面积8.66万hm2，投产面积1.43万hm2，年产量17.43万t，x果总产值6.28亿元[3]。本试验以桂七x带腋芽茎段为外植体。

1.2 试验方法

1.2.1 取材地点和取材天气 取材地点设：A室外基地植株，B实验室沙盆植株，共2个地点。取材天气设：a连续阴天的一天，b雨后第二天，c连续晴天的一天，取材时间都为中午14：30左右。

1.2.2 外植体的预处理 从室外基地及室内沙盆植株中选择生长良好的枝条，剪取距幼嫩植株顶端约15cm长的茎段，去除顶端3节，剪去叶片，留1cm叶柄。将材料用洗衣粉溶液浸泡10～15min，再用自来水冲洗10～15min，放在超净工作台上。

1.2.3 不同灭菌处理对不同类型外植体灭菌效果的影响 在超净工作台里，分别采用以下的灭菌方法对不同类型x果外植体进行灭菌：（1）75%酒精浸泡30s，振荡，弃去浸泡液，无菌水冲洗1次，加有吐温的0.1%HgCl2的溶液浸泡加摇晃7min，弃去浸泡液，无菌水冲洗5次；（2）75%酒精浸泡30s，振荡，弃去浸泡液，无菌水冲洗1次，加有吐温的0.1%HgCl2的溶液浸泡加摇晃8min，弃去浸泡液，无菌水冲洗5次；（3）75%酒精浸泡30s，振荡，弃去浸泡液，无菌水冲洗1次，加有吐温的0.1%HgCl2的溶液浸泡加摇晃9min，弃去浸泡液，无菌水冲洗5次。

1.2.4 培养基及培养条件 将已进行灭菌处理的茎段切成约芽上0.5cm，芽下1cm，叶柄0.5cm的单芽茎段，分别接种至MS培养基中。试验材料均在25±5℃的培养室中培养，每天光照10h，光照强度1 600～2 000lx。7d后开始观察外植体污染及腋芽萌况，并统计污染率及萌发率。计算公式如下：

污染率（%）=污染的外植体个数/接种的总外植体个数×100；

无菌率（%）=100-污染率；

褐化率（%）=褐化的外植体个数/接种的总外植体个数×100

2 结果与分析

2.1 不同取材地点和取材天气对外植体灭菌效果的影响 由图1、图2可知，对于室外基地取材，连续阴天和雨后天气取材以及连续晴天取材，灭菌效果都很差，外植体接种的无菌率分别为13.3%、5.6%、17.8%，褐化率都为100%，可以看出连续晴天取材，灭菌效果略好，但污染仍较严重；对于室内沙盆取材，连续阴天、雨后及连续晴天取材灭菌效果差异不显著，无菌率分别约为93.3%、90%、93.3%，褐化率分别为64.4%、65.6%、64.4%。试验结果表明，取材地点对于灭菌效果影响很大，大田取材灭菌效果很不理想，而室内沙盆取材灭菌效果较大田取材好。取材天气对灭菌效果也有影响，但对于不同的取材地点影响程度不同，对于室外基地植株影响很大，而对于室内植株则影响很小。因此，以室内栽培植株为外植体，可得到很理想的灭菌效果，若以室外栽培植株为外植体，则建议晴天取样。

2.2 灭菌处理对不同类型外植体灭菌效果的影响 试验中酒精灭菌时间固定为30s，0.1%HgCl2的灭菌时间设7、8、9min3个处理，7d后观察并记录外植体的污染和褐化情况，试验结果见图3、图4。升汞是重金属盐杀菌剂，0.1%HgCl2溶液是一种灭菌效果很好的灭菌剂，但消毒时间要求极为严格，如果时间过短，杀菌不彻底，外植体污染严重。时间过长，会对组织细胞有杀伤作用，导致植物组织褐化严重会导致外植体死亡。由图3及图4可知，在的x果外植体灭菌过程中，室外基地取材的外植体灭菌效果不理想，3种灭菌处理的外植体褐化率达到100%且外植体无菌率都低于25%，3种处理差异不显著。相较于室外基地取材，室内沙培植株x果外植体的无菌率最高能达到93.3%，3种处理差异不显著但褐化率随着灭菌时间的延长而提高。

3 结论与讨论

外植体选择和灭菌是x果组培快繁体系建立的关键环节，从试验结果可知，外植体取材地点应该是x果组培外植体选择的关键因素，取材天气对于室内植株则影响很小，室内沙盆取材灭菌效果较大田取材好。原因可能是微生物的生长和活动与外界环境有一定的关系，温暖潮湿的环境容易滋生各种菌类，有利于微生物的繁殖室外大田环境复杂，可能存在的菌类种类和数量相对室内来说较多，且大田植株直接与地面接触，植物体上尘土较多，因此附着在植物体上的菌类多且复杂，灭菌很困难[4]。而室内环境则相对比较稳定，植株带菌量少，同样的灭菌处理便可得到更好的效果。因此，建议选择室内沙培植株带腋芽茎段作为建立x果组培快繁体系的外植体。从灭菌效果和腋芽萌发率2方面因素综合考虑，室内沙培x果带腋芽茎段最适灭菌处理为酒精30s+0.1%HgCl2灭菌8min。

参考文献

[1]铁万祝，罗关兴，王友富，等.我国x果产业发展概况与主要问题[J].中国热带农业，2013（5）：16-19.

[2]e.x果种子萌发及幼苗生长[J].种子，1990（2）：72-73.

[3]平少华.x果的前世今生[J].中国果蔬，2015（5）：45-48.

[4]朱广廉.植物组织培养中的外植体灭菌[J].植物生理学通讯，1996，32（6）：444-949. （责编：张宏民）