酚氨咖敏颗粒含量测定方法的改进

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[摘要] 目的：建立HPLC法同时测定氨酚咖敏颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量。方法：采用HPLC法，色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：1%醋酸溶液（用三乙胺调pH为3.5）-甲醇-乙腈（65∶10∶25）；流速：1.0 ml/min；检测波长：273 nm；柱温：30℃。结果：对乙酰氨基酚检测浓度的线性范围为12.3～123.2 μg/ml（r=0.999 6），平均回收率为98.65%，RSD=0.31%（n=3）；咖啡因检测浓度的线性范围为2.44～24.42 μg/ml（r=0.999 8），平均回收率为99.15%，RSD=0.15%（n=3）；氨基比林检测浓度的线性范围为8.23～82.34 μg/ml（r=0.999 9），平均回收率为98.40%，RSD=0.39%（n=3）。结论：本法灵敏，可靠，简单可行，可用于氨酚咖敏颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量测定。

[关键词] 氨酚咖敏颗粒；对乙酰氨基酚；咖啡因；氨基比林；HPLC

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号]1673-7210（2010）11（b）-044-03

Simultaneous determination of Paracetamol, Caffeine, Aminopyrine in Paracetamol, aminophenazone phenacetin, caffeine and chlorphenamine maleate Granules

JIAO Fuzhe1, GAO Jianling2

(1.Nanyang Health School for Medical Workers, He'nan Province, Nanyang 473000, China; 2.Nanyang Medical College, He'nan Province, Nanyang 473000, China)

[Abstract] Objective: To establish a method for determination of Paracetamol, Caffeine, Aminopyrine in Paracetamol, aminophenazone phenacetin, caffeine and chlorphenamine maleate Granules by HPLC.Methods: The Kromasil C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used, a mixture of 1%-Acetic acid (adjust pH to 3.5 by triethylamine)-methanol-acetonitrile (65∶10∶25） as the mobile phase. The detection wavelength was at 273 nm, the flow rate was 1.0 ml/min. The temperature of the column was at 30℃. Results: The linear of range Paracetamol was at 12.3-123.2 μg/ml (r=0.999 6), the average recovery was 98.65% with a RSD of 0.31% (n=3); the linear range of Caffeine was 2.44-24.42 μg/ml (r=0.999 8), the average recovery was 99.15% with a RSD of 0.15% (n=3); the linear range of Aminopyrine was 8.23-82.34 μg/ml (r=0.999 9), the average recovery was 98.40% with a RSD of 0.39%(n=3). Conclusion: The method is simple, reliable and sensitive. This method can be used for the determination of Paracetamol, Caffeine, Aminopyrine in Paracetamol, aminophenazone phenacetin, caffeine and chlorphenamine maleate Granules.

[Key words] Paracetamol, aminophenazone phenacetin, caffeine and chlorphenamine maleate Granules; Paracetamol; Caffeine; Aminopyrine; HPLC

氨酚咖敏颗粒是由对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林及马来酸氯苯那敏组成的复方制剂，临床用于感冒引起的鼻塞、发热、头痛、咽喉痛、神经痛及风湿痛等[1]。检验标准[2]采用HPLC法测定咖啡因、氨基比林、马来酸氯苯那敏的含量，未测定对乙酰氨基酚的含量；也有人报道采用HPLC法单纯测定氨酚咖敏颗粒中对乙酰氨基酚的含量，但其他组分不能检出，效率较低[3-4]。本文采用HPLC法同时测定氨酚咖敏颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林，操作简便，快速，准确，为该品种检验标准的修订提供一个依据。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪；AEL-200电子天平（上海分析天平厂）；超声波清洗器（上海金利超声公司）；对乙酰氨基酚对照品（批号：100018-8905）；咖啡因对照品（批号：171215-200507，中国药品生物制品检定所）；氨基比林对照品（批号：100503-200301，中国药品生物制品检定所）；氨酚咖敏颗粒（南阳市天舜药业有限公司，批号：20060103、20051218、20050412）；甲醇和乙腈为色谱纯，水为去离子水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取经105℃干燥至恒重的对乙酰氨基酚对照品约60 mg与咖啡因对照品约12 mg及经60℃干燥2 h的氨基比林对照品约40 mg，置100 ml棕色量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，得对照品A溶液。精取对照品A溶液5 ml，置50 ml棕色量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，得对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取氨酚咖敏颗粒10袋，精密称定内容物研细，精密称取适量（约相当于氨基比林10 mg），置25 ml棕色量瓶中，加乙醇超声处理15 min，放冷，乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，再精密量取续滤液5 ml，置50 ml棕色量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，即得。另取缺对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林、马来酸氯苯那敏的阴性样品同法制得阴性样品对照液。

2.3 色谱条件与系统适用性试验[5]

色谱柱：Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：1%醋酸溶液（用三乙胺调pH为3.5）-甲醇-乙腈（65∶10∶25）；流速：1.0 ml/min；检测波长：273 nm；柱温：30℃；进样量：20 μl。各组分的理论板数应均不低于4 000，且各组分间的分离度应符合要求。见图1。

图 1 HPLC色谱图

（A.对照品；B.供试品；C.阴性样品；1.对乙酰氨基酚；2.咖啡因；3.氨基比林）

Fig.1 HPLC chromatography

(A.Reference substance; B.Sample; C.Negative sample;

1.Paracetamol; 2.Caffeine; 3.Aminopyrine)

2.4 线性关系考察

分别精密量取对照A溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml置50 ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取20 μl，进样，记录色谱图。以峰面积为纵坐标（Y），对照品浓度（μg/ml）为横坐标（X），得对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的回归方程分别为：Y=2.76×104X+2.36×103（r=0.999 6）；Y=3.06×105X+1.26×103（r=0.999 8）；Y=1.77×105X+4.05×103（r=0.999 9），线性范围分别为12.3～123.2、2.44～24.42、8.23～82.34 μg/ml。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液20 μl，重复进样5次，测得对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林色谱峰面积的RSD分别为0.32%、0.44%、0.35%。

2.6 重复性试验

精密称取同一批号的样品6份，分别测定含量，按外标法计算对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量，并将咖啡因计算结果与1.097 2相乘。结果对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量分别为93.5%、96.7%、98.6%，RSD分别为0.98%、0.62%、0.56%。

2.7 稳定性试验

取含量测定项下的同一份供试品溶液，在室温下放置0、2、4、6、8、10、12 h，同法测定，记录色谱峰面积，RSD为0.82%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

精密称取氨酚咖敏颗粒样品（含对乙酰氨基酚92.6%、咖啡因96.8%、氨基比林99.2%）适量（约相当于氨基比林5 mg），共3份，分别精密加入8.0、10.0、12.0 ml的对照品A溶液，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，进样20 μl，测定色谱峰面积，并按外标法计算含量，将咖啡因计算结果与1.097 2相乘。结果见表1。

表 1 回收率试验结果（n=3）

Tab.1 Results ofrecovery test (n=3)

2.9样品含量测定

取氨酚咖敏颗粒样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液和对照品溶液，各进样20 μl，测定色谱峰面积，并按外标法计算。样品含量测定结果见表2。

3 讨论

本法采用LC-MS分离技术[6]，选用的流动相保留时间短，分离效果好，在流动相中加入三乙胺，对分离和保留时间虽然没有明显的影响，但可改善主峰的拖尾现象，流动相的pH值改为3.5时，峰形较理想。同时选定273 nm波长处检测，能保证三种检测成分的检测灵敏度。按本品的处方配制的空白溶液在该色谱条件下无吸收，不影响待测成分的测定。

[参考文献]

[1]贾新岳,闫秋娟,王芳.酚氨咖敏片制备工艺研究[J].中国药业,2009,18(3):30.

[2]国家药品监督管理局.国家药品标准:化学药品地方标准上升国家标准[S].12册.2002:31.

[3]徐淑媛,王太亮.高效液相色谱法测定酚氨咖敏片中对乙酰氨基酚含量[J].中国药业,2008,17(2):33-34.

[4]赵凤菊,缪明春.高效液相色谱法测定酚氨咖敏颗粒中对乙酰氨基酚含量[J].中国药业,2009,18(6):37.

[5]隆旭红,金文丽,刘燕君.HPLC法测定氨咖黄敏胶囊及片中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量[J].药物分析杂志,2006,26(12):1850-1851.

[6]孙毓庆,王延琮.现代色谱法及其在医药中的应用[M].北京:人民卫生出版社,1998:198-200.

[7]刘晓哲.HPLC法同时测定酚氨咖敏颗粒中三组分的含量[J].药物分析杂志,2007,27(9):1487.

[8]曹敏,熊然英,晋儒慧.HPLC法同时测定酚氨咖敏颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量[J].中国药品标准,2007,8(1):51-53.

（收稿日期：2010-08-11）