不同产地鱼腥草中槲皮苷含量测定

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摘要：目的 建立鱼腥草中槲皮苷含量的测定方法，比较不同产地鱼腥草中槲皮苷含量差异。方法 采用高效液相色谱法，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为乙腈-0.5%冰醋酸（19∶81），检测波长为256 nm，流速为1.0 mL/min。结果 槲皮苷在0.064 56～3.228 ?g范围内呈良好的线性关系，平均回收率为97.68%，RSD=1.3%（n=6）；所测定的不同产地样品中，四川产鱼腥草的槲皮苷含量最高。结论 本研究建立的方法快速简便，稳定可靠，专属性强。不同产地鱼腥草中槲皮苷含量差异较大。

关键词：高效液相色谱法；鱼腥草；槲皮苷；含量测定；不同产地

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.12.019

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）12-0078-03

Determination of Quercitrin in Houttuyniae Herba from Different Producing Areas YIN Xiao-hong1，2， JIN Han-tai3， TAN Lin-wei1，2， HE Lin-wang3， WANG Jian-fang1，2， MIN Hui1，2， HU Jiang-ning1，2 （1. Zhejiang CONBA Pharmaceutical Co.，LTD.， Hangzhou 310052， China； 2. Zhejiang Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Technology， Hangzhou 310052， China； 3. Zhejiang CONBA Chinese Medicine Co.，LTD.， Lishui 323400， China）

Abstract： Objective To establish a method to determine the content of quercitrin in Houttuyniae Herba； To compare the differences in the content of quercitrin in Houttuyniae Herba from different producing areas. Methods HPLC was used with octadecylsilane-bonded silica gel as the stationary phase and a mixture of acetonitrile and 0.5% HAc （19：81） as the mobile phase. The detection wavelength was 256nm.vThe flow rate was 1.0 mL/min. Results It was shown that quercitrinwas in a good linear relationship in the range of 0.064 56C3.228 ?g. The average recovery of quercitrin was 97.68%， RSD=1.3% （n=6）. Houttuyniae Herba from Sichuan Province contains the highest content of quercitrin. Conclusion This method is simple and rapid， with stability， reliability and strong specificity. The contents of quercitrin in Houttuyniae Herba from different producing areas were quite different.

Key words： HPLC； Houttuyniae Herba； quercitrin； content determination； different producing areas

鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草或干燥地上部分，味辛，微寒，归肺经，有清热解毒、消痛排脓、利尿通淋之功效，用于肺痈吐脓、痰热喘|、热痢、热淋、痈肿疮毒[1]。复方鱼腥草合剂为鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花经提取精制而成的中成药制剂。鱼腥草为复方鱼腥草合剂中的君药，但2015年版《中华人民共和国药典》并未对其进行含量控制。槲皮苷具有抗病毒、

基金项目：浙江省科技计划项目（2013C03005）

通讯作者：胡江宁，E-mail：

抗炎、利尿等作用[2]，笔者采用HPLC测定鱼腥草中槲皮苷的含量，用于鱼腥草的质量控制。同时对不同产地鱼腥草中槲皮苷含量进行对比分析，为更好地研究和开发利用这一药用植物以及复方鱼腥草合剂的质量提升提供参考。

1 仪器与试药

Agilent1200、Agilent1260高效液相色谱仪，Agilent XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）、Agilent SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m）、Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）、Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m）、Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m）、Welch Xtimate-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）色谱柱。Sartorious BS210s电子天平，Mettler Toledo XP26电子天平。

槲皮苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号111538-200504，含量测定用），水（纯化水），乙腈（Merck，色谱纯），其他试剂均为分析纯。鱼腥草药材为浙江、江苏、湖北、安徽、四川共5个产地15批市场流通商品，经浙江康恩贝制药股份有限公司高级工程师何厚洪鉴定为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的干燥地上部分。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

取本品粉末（过四号筛）约1 g，精密称定，精密加入50%乙醇100 mL，称定质量，回流提取1 h，放冷，再称定质量，用50%乙醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取槲皮苷对照品16.14 mg，置于25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得浓度为0.645 6 mg/mL的槲皮苷对照品贮备液。分别精密吸取一定量的槲皮苷对照品贮备液，以甲醇稀释成浓度为6.456、12.91、32.28、64.56、129.1、322.8 ?g/mL的对照品溶液。

2.3 色谱条件

固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为乙腈- 0.5%冰醋酸（19∶81），检测波长为256 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃，进样量为10 ?L。理论板数按槲皮苷峰计应不低于3000。

2.4 系统适用性试验

分别取对照品溶液（32.28 ?g/mL）、供试品溶液各10 ?L，按“2.3”项下色谱条件注入高效液相色谱仪进行测定，色谱图见图1。结果样品中槲皮苷与相邻色谱峰的分离度>1.5，理论板数按槲皮苷峰计不低于2000，保留时间约为14.0 min。

2.5 线性关系考察

吸取“2.2”项下不同浓度的对照品溶液各10 ?L，按“2.3”项下色谱条件分别测定，以峰面积（A）对对照品溶液浓度（C）进行回归计算，得回归方程A=290.610C-72.925，r?=0.999 9。槲皮苷在0.064 56～3.228 ?g范围内呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

取鱼腥草供试品溶液（5号），重复进样5次，测定槲皮苷的峰面积并计算，结果槲皮苷峰面积均值为640.9，RSD=0.2%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取鱼腥草供试品溶液（5号），在0、2、4、8、12、24 h分别进样10 ?L，记录峰面积，结果峰面积均值为638.4，RSD=0.9%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性试验

取同一批号（5号）样品6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，记录峰面积，计算得到样品中槲皮苷平均含量为0.23%，RSD=1.1%，表明方法的重复性良好。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量的鱼腥草样品（5号）约0.5 g，精密称定，共6份，精密加入浓度为0.645 6 mg/mL的槲皮苷对照品溶液2 mL，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进样10 ?L进行分析，计算加样回收率。结果平均回收率为97.68%，RSD=1.3%，加样回收率良好，见表1。

2.10 耐用性试验

取同一供试品溶液，分别使用Agilent XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）、Agilent SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m）、Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）、Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m）、Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m）、Welch Xtimate-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）色谱柱测定，结果槲皮苷平均含量为0.23%，RSD=1.4%（n=6），表明不同色谱柱耐用性良好；取同一供试品溶液，微调流动相比例并测定，结果槲皮苷平均含量为0.23%，RSD=1.7%（n=3），表明流动相耐用性良好。

2.11 不同产地药材含量测定

取15批鱼腥草药材，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 ?L，进样，记录峰面积，计算含量，结果见表2。

3 讨论

供试品溶液制备中，分别以25%甲醇、50%甲醇、75甲醇、甲醇、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、乙醇为溶剂回流提取1 h，结果50%乙醇提取样品中槲皮苷含量明显高于其他溶剂提取，因此确定50%乙醇为提取溶剂。并考察了超声、回流提取方式，结果显示回流提取效果更优。分别回流提取30、60、90 min，结果表明三者无明显差异，考虑方法耐用情况，选择回流提取60 min。

以不同比例乙腈-水、乙腈-冰醋酸、甲醇-水为流动相进行试验，结果流动相为乙腈-0.5%冰醋酸（19∶81）时，槲皮苷分离度高，稳定性较好。

槲皮苷是鱼腥草的次生代谢产物。植物次生代谢产物的积累是一个非常复杂的过程，受许多环境因素的影响。有研究发现，将贯叶连翘移栽到土耳其北部的几个不同地方，其主要有效成分金丝桃素、绿原酸等含量差异很大[3]。长白山地区的高山红景天中红景天苷的含量受土壤营养成分影响，富含有机质、低pH值及含氮丰富的土壤有利于红景天苷的积累[4]。

目前，鱼腥草中槲皮苷含量测定方法研究有少量报道，其前处理方法、流动相选择、色谱柱各有不同，更有以槲皮素为检测指标监控槲皮苷的变化情况[5-8]。本研究建立一种简便、快速、灵敏、准确并较耐用的测定鱼腥草中槲皮苷含量的RP-HPLC分析方法。以槲皮苷含量为指标，通过对多批市场流通的不同产地鱼腥草药材进行测定，了解鱼腥草药材的内在质量情况，发现不同产地鱼腥草药材的槲皮苷含量差异较大，以四川产鱼腥草中槲皮苷含量最高，可为复方鱼腥草合剂的质量提升提供参考。

参考文献：

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（收稿日期：2015-12-03）

（修回日期：2016-01-18；编辑：陈静）