Aβ损伤后大鼠SOD和MDA的变化及补肾活血化痰法的干预作用

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摘要：目的：观察β－淀粉样蛋白1－40(AB1－40)大鼠海马双侧注射后大脑组织超氧化物岐化酶(SuperoxideDismutase。sod)活力和丙二醛(malondialdehyde，mda)含量的变化及补肾活血化痰法(加减地黄饮子)干预作用。方法：采用大鼠海马立体定向注射凝聚态A1－40诱导老年性痴呆(Alzheimer’8 dise；Lqe，AD)动物模型。通过分光光度法检测大鼠大脑组织SOD和MDA的活性。结果：与假手术组比较，模型组脑组织SOD活力明显降低(P

关键词：阿尔茨海默氏病；补肾活血化痰法；超氧化物岐化酶；丙二醛

中图分类号：R－33

文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)01－0073－03

流行病学调查表明，我国500万老年人罹患阿尔茨海默病(AD)，65岁以上人群患病率为5％，且患病率随年龄增长而增多，80岁以上可高达20％，是世界上AD患者最多的国家。在国家科委组织的“跨世纪脑科学”会议上，探讨我国脑科学发展问题时，提出首选的重点研究项目之一即是：治疗AD的新途径――遗传学模式与中草药相结合。由于AD发病机制的复杂性，提示须从多途径、多靶点来进行AD的治疗，任何作用单一的药物很难奏效。中医药是我国独特的宝贵医疗资源，对于AD等疾病的治疗积累了丰富的理论和实践经验。中药复方的多靶点效应，当其作为一个整体进入体内，通过多成分、多途径、多层次的综合协调作用，调动机体的自稳态、自修复能力，从而达到治疗作用。本研究借助现代医学技术手段进行加减地黄饮子防治AD的基础研究，试图用现代医学理论阐明补肾活血化痰法治疗AD的机制，使其更好的推向国际市场。

1　材料与方法

1.1　实验药物

加减地黄饮子提取物：肉苁蓉、麦冬、人参、远志、五味子和山茱萸等用8倍量70％的乙醇回流提取3次，每次2h；生姜、薄荷和石菖蒲加10倍量水6h提取挥发油；方中熟地、茯苓、巴戟天、石斛、大枣与醇提取后的药渣及挥发油提取后药渣一同加16倍的水，回流提取3次，每次lh；醇提取浓缩液和水提取浓缩液混合，血竭等原粉加入，干燥得干膏，干膏粉碎成细粉，加入挥发油。实验用不含赋形剂的浸膏。盐酸多奈哌齐片由法国PFIZER PGM公司制造，产品批号5136903。Aβ1－40为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。Aβ1－40使用前用无菌生理盐水稀释成10ug・ul－1，37℃孵育1周，使其变为聚集状态的AB。

1.2　实验动物

选用健康雄性清洁级SD大鼠100只，鼠龄8―12周，体重(280±10)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号SCXK(京)2002－0003。经适应性饲养1周，随机分为空白对照组(blank)、假手术对照组(sham)、模型对照组(negtive)、盐酸多奈哌齐组(positive)和加减地黄饮子组(experiment)共5组。

1.3　试剂

考马斯兰蛋白测定试剂盒、超氧化物岐化酶测定试盒和丙二醛测定试盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.4　仪器

江湾I型C立体定向器(第二军医大学)；UV－2550型紫外分光光度计(日本岛津)。

1.5　方法

1.5.1　动物模型的制作　实验大鼠经腹腔注射1％戊巴比妥钠(40mg／kg)麻醉后，立体定向器耳杆固定头部。颅顶区备皮消毒后作2cm切口，分离骨膜使头骨暴露。于前囟向后3.0mm，在分别向中线左和右各旁开2.2mm处，用牙科钻打开颅骨。垂直进微量进样器针2.8mm，将1ul溶液在5rain缓慢注入，并留针5min使溶液充分弥散。模型组、盐酸多奈哌齐组、加减地黄饮子组左右侧海马各注射1ul Aβ1－40(10ug)溶液，假手术对照组注射1uL生理盐水后消毒并缝合切口皮肤。

1.5.2　给药方法　造膜后3天开始给药，根据人和动物按体表面积折算的等效剂量。盐酸多奈哌齐组按0.33rag・kg－1・d－1，加减地黄饮子组按1.0g・kg－1・d－1给药，每日1次灌胃。其余3组给等体积生理盐水，共4周。

1.5.3　分光光度法检测SOD和MDA活性大鼠迅速处死，在冰上取大脑(除去小脑和脑干)(1：9=大脑质量：组织缓冲液质量)匀浆器中匀浆成10％匀浆液。SOD和MDA活性按南京建成生物工程研究所提供的SOD和MDA试剂盒方法测定。

1.5.4　统计学方法所有数据运用SPS$13.0软件包进行处理，组间差异采用单因素方差分析。进一步post－hoc分析采用SNK检验，P

2　结果

2.1　加减地黄饮子对AD大鼠脑组织SOD活性的影响

从图1可知，模型组脑组织SOD活力(52.43±3.25)U／mgprot较假手术组(67.87±2.38)U／mgprot明显降低(P

2.2　加减地黄饮子对AD大鼠脑组织MDA含量的影响

从图2可知，模型组脑组织中MDA含量[(9.09±0.41)nmo]／mgprot]明显高于假手术组[(5.44±0.81)nmol／mgprot](P

3　讨论

祖国医学认为，老年性痴呆的成因与肾有十分密切的关系。肾为先天之本，肾藏精，主骨髓，上通于脑。脑为元神之府，是人体精气、髓海和神明凝聚之所，人的视、听、嗅、感觉及思维记忆等皆出于脑。脑的这些功能又都在脑髓的充盈下才能发挥，而髓海的充盈又依赖于肾气的温煦、充养。《医方集解》云“肾精不足，则志气衰，不能上通于心。故迷惑善忘也”。近年来，中医药对老年性痴呆治疗的研究报道中多数学者认为，肾虚是导致老年性痴呆发病的重要病理基础，痰凝血瘀则是老年性痴呆发病的重要因素，本虚椿实是老年性痴呆的基本病机。加减地黄饮子是地黄饮子去附子、肉桂，加血竭等化裁而成，具有补肾活血、开窍化痰之功效，用于防治老年性痴呆。该方具有改善大鼠脑内注射Aβ1－40诱导的学习和记忆能力下降的作用。

近年来，越来越多的研究发现氧自由基的产生与老年性痴呆有关，并认为氧应激在老年性痴呆发生发展中起关键作用。人体大脑与其他脏器相比，更易产生氧自由基并受其害，脑内糖代谢旺盛，神经元必须通过线粒体的氧化磷酸化产生三磷酸腺苷以获取能量，此过程可产生大量氧自由基。神经元细胞膜含大量易被氧化的多聚不饱和脂肪酸，易受氧自由基攻击。在衰老过程中，细胞本身具有抗氧化的能力随年龄增加而降低，氧化损伤逐渐成为不可逆的或损伤不能被很好修复，氧化损伤引起衰老也是老年性痴呆的原因之一。SOD能有效的消除过量的氧自由基，首先SOD催化超氧化物自由基歧化为氧和H2o2。然后CAT催化H2o2还原为氧和水。MDA是脂质过氧化反应的终产物，因而测试MDA的含量，常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映出细胞受损伤程度。本实验表明，与空白对照组比较，模型组SOD活力降低，MDA含量升高，(P