血管紧张素转化酶基因ACE(I/D)多态性与缺血性脑卒中中医证候相关性分析

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摘要 目的：探讨血管紧张素转化酶基因ace（I/D）多态性与缺血性脑卒中患病及中医证候的关系。方法：应用聚合酶链反应(PCR)筛查382例脑梗死患者和200例健康对照组的血管紧张素转化酶基因ACE（I/D）多态性分布,探讨不同基因型与缺血性脑卒中患病及不同中医证候的关系。结果：脑梗死组DD、DI、II基因型分别为167、93、122例;健康对照组分别为42、75、83例;脑梗死组DD基因型显著高于健康对照组(χ2=4.42，P

关键词 脑卒中 缺血性 中医证候 血管紧张素转化酶 基因多态性

肾素―血管紧张素系统是参与体内血压调节的重要系统，而血管紧张素转化酶（ACE）是该系统中的关键酶之一。ACE基因的遗传变异影响体内ACE水平，国内外学者对ACE基因多态性与高血压、脑梗死三者间的关系进行了深入研究，结果却差异较大。为进一步探讨ACE基因在脑梗死发生发展中的遗传机制，对脑梗死患者ACE基因插入/缺失多态性与血浆血管紧张素(angiotensin，Ang)水平以及与缺血性中风中医证候相关性的关系进行分析，我们利用聚合酶链反应（PCR）技术对武汉地区382例缺血性脑卒中患者及200例健康对照人群的ACE基因I/D多态性进行了检测和分析。

1 资料与方法

1.1 研究对象：在湖北省中医院神经内科、武汉市第一医院神经内科、武汉大学附属中南医院共收集符合纳入标准脑梗死患者382例；健康对照组200例。脑梗死组：男性206例，女性176例；平均年龄为67.8岁±13.1岁，40～49岁46例，50～59岁89例，60～69岁137例，70～79岁110例；病史中有高血压病者219例，风湿性心脏病者34例，冠心病者98例，糖尿病者113例，高脂血症206例，吸烟者134例，饮酒者78例，有脑血管病高危因素家族史261例；中医证候分类：风痰瘀血、痹阻脉络证237例,肝阳暴亢、风火上扰证145例。健康对照组：男性107例，女性93例；平均年龄为63.7岁±14.5岁，40～49岁24例，50～59岁58例，60～69岁87例，70～79岁31例；病史中无高血压、冠心病、脑梗死等心脑血管疾病，身体各系统未发现重大疾病，吸烟者51例，饮酒者37例，有脑血管病高危因素家族史84例。

1.2 方法：分述如下。

1.2.1 基因PCR-RFLP分析：①基因组DNA应用DNA提取试剂盒从人血白细胞中提取。②参照文献［1］设计引物。PCR核苷酸引物P1:5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3'，P2:5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’。引物合成由上海生工工程技术服务有限公司完成。③目的DN段PCR扩增：PCR反应体系为50ul,常规配制,置于PCR扩增仪，94℃预变性5min，94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸2min，循环35周期，72℃延伸10min后终止扩增。循环完毕，取出反应物。PCR产物在含0.5g/L溴化乙锭的12.0g/L琼脂糖凝胶内电泳,通过凝胶成像系统判定结果。剩余扩增产物置于4℃冰箱保存。

1.2.2 统计学方法：两组间等位基因频率和基因型频率的比较采用χ2检验,两组间及组内计量资料的比较采用方差分析,P

2 结果

2.1 基因型分布：血管紧张素转化酶基因型、等位基因频率分布PCR扩增出两种DN段,一种是490bp片段,称之为插入型(I型),另一种是190bp片段,称之为缺失型(D型),因此,在群体中可有DD、DI及II三种基因型。见图1。

图1经琼脂糖凝胶电泳后的结果：1、2、5、8、9、10为II基因型,显示490bp电泳条带;4、7为DD基因型,显示190bp电泳条带;3、6为DI基因型,显示490bp、190bp两条电泳条带;M为DNA Marker。

2.2 脑梗死组及不同证型与健康对照组ACE I/D基因分型比较：见表1。

由表1可见，脑梗死组DD、DI、II基因型分别为167、93、122例;健康对照组分别为42、75、83例;脑梗死组DD基因型显著高于健康对照组(χ2=4.42，P

风痰瘀血、痹阻脉络证脑梗死患者DD、DI、II基因型分别为96、32、109例;肝阳暴亢、风火上扰证脑梗死患者DD、DI、II基因型分别为71、61、13例。两个证型与健康对照组比较，风痰瘀血、痹阻脉络证患者DD基因型比健康对照组显著增多(χ2=4.71,P

本研究脑梗死组和健康对照组ACEI/D基因多态性在两组人群中的分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。脑梗死组ACE-DD基因型和D等位基因频率均明显高于正常对照组(P

2.3 脑梗死组及不同证型患者与健康对照组不同基因型血管紧张素水平的比较:见表2。

由表2可见，脑梗死组患者DD基因型血浆AngⅡ水平为（33.5±10.7）ng/L，显著高于健康对照组（27.1±6.5）ng/L，F=3.31,P

3 讨论

肾素―血管紧张素（RAS）系统是体内重要的体液调节系统，在水盐代谢平衡和血管张力调节中有重要的作用。目前部分研究显示RAS系统的各组分与脑血管病存在密切的关系。RAS系统各组分代谢途径复杂，作用的靶器官广泛，彼此之间存在一定的制约及促进作用，而RAS系统的底物血管紧张素原、关键酶ACE都存在着基因的多态性［2］。

缺血性脑卒中是临床多发病、常见病。其发生发展具有复杂的病理生理机制。目前的研究表明，RAS系统的功能亢进与脑血管病的发生有密切的关系。血管紧张素转化酶是RAS系统的关键酶，是一种多肽酶。其基因组全长为21kb定位于染色体17q23，包括26个外显子和25个内含子，其内含子16上有一个287bp的Alu的插入片断，有个体缺失此片断，呈现ACE基因的插入（I），缺失（D）多态性，表现为II、ID、DD三种基因型。这也是目前研究较多的基因位点［3］。

ACE基因多态性与脑梗死的相关性，各家报道不一。姚丽芬等［4］在对60例脑梗死患者及33例高血压脑出血与62例健康者的ACE基因的插入/缺失多态性研究的结果表明，高血压性脑出血的DD基因型及D等位基因频率明显高于正常组，脑梗死组DD基因型和D等位基因频率与正常对照组比较有显著的差异。并且指出ACE基因的多态型是尤其伴高血压的脑梗死、脑出血的易患因素。Sharma等研究中发现ACE基因的多态性与脑血管病无密切的联系。

目前对于中医证候与脑卒中基因多态性的研究相对较少，沈乃莹等［5］采用PCR―SSP方法对急性脑梗塞阴虚、阳虚、气虚、痰湿及血瘀体质患者共103例及正常体质对照组99例进行HLA-DDAI等位基因分型，提示HLA-DDAl0501基因与阴虚体质相关联，HLA―DDAl0301基因与气虚、痰湿及血瘀体质相关联。宋剑南等［6］也提出载脂蛋白E及其基因多态性通过影响血脂与痰瘀证候有密切的关系．而我们的研究表明痰瘀贯穿中风的整个病程，由此可以推测中风痰瘀证候可能与载脂蛋白E及其基因多态性有密切的关系。

本研究结果表明，脑梗死组ACE-DD基因型和D等位基因频率均明显高于健康对照组(P

探讨中国人RAS系统基因多态性与脑卒中证候的关系只是探讨基因多态性与中医证候的一个环节。随着现代医学的研究已经从单基因病的研究，转向常见病、多发病的相关基因的多基因调控的研究，中医学用证候概括发病过程中的疾病不同时期的病机，证候是有规律的病理表现，就必然有物质基础支配机制。而这种物质基础就有可能反映在基因组多态性的水平上。探讨RAS系统各物质的基因多态性与急性期缺血性脑卒中的证候的相关性对于证候的深化认识具有一定的意义，从多角度、多因素分析探讨中医证候将有助于解释证候的实质。因此可以通过用病证结合的方法、通过对疾病的中医证候基因组学特征的研究，来探索疾病证候、基因组学之间的关系，从同一种病不同证候到同一证候不同疾病的基因表达谱差异的比较中寻找证候的共性和异性，建立“证候―基因表达谱”，从而揭示中医证候的科学内涵。

4 参考文献

［1］Pullicino P,Kwen P,Greenberg S,Becker AL,Glenister N.Angiotens incoverting enzymegene and lacunar stroke［J］.Stroke,2003,27:568-570.

［2］张旭,夏君慧,金得辛,等.血管紧张素转化酶基因多态性与脑梗死危险因素的关系［J］.中华流行病学杂志,2001(12):435-438.

［3］Guidelines subcommittee.1999 worl dheal thorganization 2 in ternationalsociety hypertension guidelines for the management of hypertension［J］.J Hypertens,2003，7:151-183.

［4］姚丽芬,刘丽娟,徐辉,等.血管紧张素转换酶基因多态性在脑血管病中作用及机制的初步研究［J］.中国急救医学,2002,22(10):585-586.

［5］沈乃莹，闫征.HLA―DQA1等位基因与急性脑梗塞多种中医体质类型的相关性研究［J］.中医杂志,2001,42(4):342.

［6］宋剑南,陈杲.论载脂蛋白E及其基因多态性与中医痰瘀证候的关系［J］.中国中医基础医学杂志,2002,8(12):1315.

收稿日期 2009-01-06