RP-HPLC法测定酮甲霜中酮康唑和甲硝唑的含量
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[摘要] 目的:建立反相高效液相法测定酮甲霜中酮康唑和甲硝唑含量的方法。方法:采用Diamonsil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相:甲醇-水(74∶36);检测波长:239 nm;流速:1.0 ml/min。结果:酮康唑在0.06～2.10 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 5),平均回收率为98.89%,RSD=1.40%;甲硝唑在0.06～2.10 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 1),平均回收率为98.75%,RSD=1.10%。结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于酮甲霜中酮康唑和甲硝唑的质量控制。
[关键词] 反相高效液相法;酮甲霜;酮康唑;甲硝唑;含量测定
[中图分类号] R927.2[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2010)04(c)-079-02
Content determination of ketoconazole and metronidazole in Compound Ketoconazole Cream by rp-hplc
WANG Xiaoyan1, GAO Dan2
(The PLA 230th Hospital, Dandong 118000, China)
[Abstract] Objective: To establish a method for the content determination of ketoconazole and metronidazole in Compound Ketoconazole Cream by RP-HPLC. Methods: The Diamonsil C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column was used. The mobile phases consisted of acetonitrile and water (74∶36), the flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was at 239 nm. Results: The linear ranges of ketoconazole was at 0.06-2.10 μg (r=0.999 5), the average recovery was 98.89% with a RSD of 1.40%; the linear ranges of metronidazole was at 0.06-2.10 μg (r=0.999 1), the average recovery was 98.75% with a RSD of 1.10%. Conclusion: The method is fast, reliable, accurate and can be used in the quality control of ketoconazole and metronidazole in Compound Ketoconazole Cream.
[Key words] RP-HPLC; Compound Ketoconazole Cream; Ketoconazole; Metronidazole; Content determination
酮甲霜是我院研制的含酮康唑和甲硝唑的皮肤外用制剂,酮康唑和甲硝唑具有抗真菌作用[1],临床上用于治疗体癣、牛皮癣、湿疹以及神经性皮炎等[2]。酮康唑和甲硝唑的含量测定有电位滴定法、紫外-可见分光光度法[3]。本文建立了以HPLC法同时测定酮甲霜中酮康唑和甲硝唑两组分含量的方法[4-5]。现介绍如下:
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(HITACHI ,7110),酮康唑原料(南京白敬宇制药有限公司生产,KE-071115);甲硝唑原料(武汉武药制药有限公司生产,CO4-L0706226);酮康唑对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100294-200602);甲硝唑对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100191-200305),酮甲霜(第二三医院的医院制剂,含酮康唑和甲硝唑分别是1%)。其他试剂为色谱纯。
2 方法与结果
2.1 酮甲霜的制备
按照处方组成(酮康唑1 g、甲硝唑1 g、氮酮2 ml、乙二胺四乙酸二钠0.05 g、乳膏基质加至100 g)分别称取酮康唑、甲硝唑研磨过6号筛(80～100目),置乳钵中,加氮酮、乙二胺四乙酸二钠研磨均匀,按等量递加法加入基质中,充分研匀,分装,即得[6-7]。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取酮康唑对照品和甲硝唑对照品适量,加甲醇溶解,并制成含酮康唑1.0 mg/ml和甲硝唑1.0 mg/ml的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取酮康唑适量,加无水乙醇于80℃水浴加热溶解,冷却放置量瓶中,用乙醇加至刻度,冰浴2 h,滤过,配制成含酮康唑50 μg/ml和甲硝唑50 μg/ml的供试品溶液。
2.4 阴性对照品的制备
按处方比例,取除酮康唑和甲硝唑的其他试药,按“2.1”项下方法制成缺酮康唑和甲硝唑的阴性样品,再按“2.3”项下方法制成阴性对照品溶液。
2.5 色谱条件
色谱柱:Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相:甲醇-水(74∶36),流速:1.0 ml/min,检测波长:239 nm,柱温:30℃,进样量:20 μl。
2.6 系统适用性试验
分别取酮康唑和甲硝唑对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液,按上述色谱条件进行试验,考察系统适用性。HPLC色谱图见图1。由图1可知,酮康唑和甲硝唑能够有效的分离,空白基质没有干扰。
2.7 线性关系考察
分别精密量取对照品贮备液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 ml,置于50 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,分别精密量取20 μl,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定色谱峰面积,以进样浓度(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,计算回归方程,结果表明酮康唑进样量在0.06～2.10 μg范围内,呈良好的线性关系,回归方程为Y=24 616X-135 469(r=0.999 5);甲硝唑进样量在0.06～2.10 μg范围内,呈良好的线性关系,回归方程为Y=16 915X-113 242(r=0.999 1)。
2.8 精密度试验
精密吸取“2.2”项下对照品溶液20 μl,重复进样5次,按上述色谱条件测定色谱峰面积,酮康唑的RSD为1.34%,甲硝唑的RSD为1.50%,结果表明本法精密度良好。
2.9 稳定性试验
取“2.3”项下供试品溶液,分别于放置0、2、4、6、8、12 h后,注入液相色谱仪,测定色谱峰面积,酮康唑的RSD为1.27%,甲硝唑的RSD为1.65%,结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定。
2.10 重复性试验
精密称取同一批样品5份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,分别测定色谱峰面积,酮康唑的平均含量为1.82%,RSD为0.4%;甲硝唑的平均含量为2.05%,RSD为0.3%。结果表明本法重复性良好。
2.11 回收率试验
分别精密称取酮康唑和甲硝唑对照品适量,按处方比列加入基质中制成含酮康唑、甲硝唑含量分别约为标示量的80%、100%、120%的样品。按回归方程,测定并计算回收率。结果见表1。
表 1回收率试验(n=3)
Tab.1 Result of recovery (n=3)
2.12 样品含量测定
取本品约1 g(约相当于酮康唑10 mg、甲硝唑10 mg),精密称定,加无水乙醇适量,置80℃水浴中溶解,放冷至室温,移至100 ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,冰浴冷却2 h后,滤过,弃去初滤液,取续滤液25 ml用乙醇稀释至50 ml,进样20 μl,计算含量,结果见表2。
表 2 样品含量测定(n=3)
Tab.2 Content determination of samples (n=3)
3 讨论
本方法简便,准确,空白基质没有干扰,可用于酮甲霜中酮康唑和甲硝唑的含量测定。
[参考文献]
[1]林傧,陈俊杰,林建武,等.复方酮康唑乳膏治疗外耳道真菌病疗效观察[J].中国医药导报,2006,3(24):49.
[2]夏玉满.萘替芬酮康唑乳膏治疗手足癣疗效观察[J].中国医药导报,2006,3(35):85.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:614.
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[8]王娟.HPLC法测定匹卡米隆分散片的有关物质[J].中国现代医生,2007, 45(8):68,77.
(收稿日期:2009-12-22)