RP―HPLC法测定缬沙坦含量

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摘要：目的 建立hplc测定缬沙坦原料的含量。方法 供试品溶液与对照品溶液稀释相同倍数后经过精密度试验、重复性试验、稳定性试验、回收率试验、测定定量项、样品测定等步骤。结果 在进样浓度为5.0～75.0 μg/mL范围内与峰面积线性良好，r=0.9999（n=18），平均回收率为100.9%（RSD%=0.49%，n=9）。结论 该方法专属性好，准确，灵敏，用于缬沙坦含量的测定结果可靠。

关键词：缬沙坦；含量；高效液相色谱；定量分析

缬沙坦（Valsartan），化学名为（S）-N-戊酰基-N-{[2'-（1H-5-四氮唑-基-1，1'-联苯）-4-基]-甲基}-缬氨酸。缬沙坦结构中含1个手性碳原子，产品为S-构型。本文所研究的缬沙坦由湖南千金湘江药业股份有限公司研制生产。

1仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪；UV-762 紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；BS110S 电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。缬沙坦对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为100651-201203，含量99.8%；缬沙坦原料6批（批号20121001～20121003，20121101～20121103）。甲醇、乙腈均为色谱纯，磷酸氢二钠为分析纯；水为二次重蒸水。

2方法与结果

2.1色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-冰醋酸（500∶500∶1）为流动相；检测波长为225 nm；流速为1.0 mL/min。理论板数按缬沙坦峰计算应不低于4000，缬沙坦与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

2.2 溶液制备 取本品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成约含缬沙坦0.05 mg/mL的样品溶液；另取缬沙坦对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成约含缬沙坦0.05 mg/mL的对照品溶液。

2.3线性关系及标准曲线 精密称定缬沙坦10 mg，置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，分别精密量取2.5 mL，2.5 mL，4 mL，5 mL，6 mL，7.5 mL置100 mL、20 mL、20 mL、20 mL、20 mL、20 mL量瓶中，制成5 μg/mL、25 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL、60 μg/mL、75 μg/mL 6个浓度范围，用流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取各溶液10 μL，分别注入色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标（Y），浓度（μg/mL）为横坐标（X）进行线性回归，回归方程为Y=7.266x+0.0627，r=0.9999。缬沙坦在5～75 μg/mL浓度范围内线性良好。

2.4精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，连续进样6次，记录色谱图，分别于第2 d、第3 d重复上述操作。主峰峰面积的RSD=1.1%（n=18）。说明仪器精密度良好。

2.5重复性试验 取"2.2"项下方法制备的同一份供试品溶液5份，分别再次重复测定5次，计算含量，RSD=1.4%。说明方法的重复性良好。

2.6稳定性试验 取本品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释至刻度制成中含0.05 mg/mL的溶液。取上述液作为供试品溶液，置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8、10、12 h时，测定峰面积，RSD=0.6%。说明样品溶液稳定性良好。

2.7回收率试验 精密称取缬沙坦约20 mg、25 mg、30 mg，分别置50 mL容量瓶中，加流动相30 mL，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取缬沙坦对照品适量（以干燥品计），精密称定，加流动相溶解并稀释制成中约含0.05 mg/mL的溶液。按外标法以峰面积计算供试品中缬沙坦的含量，计算平均回收率。结果缬沙坦高、中、低3个加入量的回收率（n=3）分别为99.96%（RSD=1.2%）、100.12%（RSD=1.6%）、100.08%（RSD=1.4%），平均值（n=9）为100.06%。

2.8定量项 取线性试验项下浓度为5μg/ml溶液，逐级稀释对照品溶液，测定样品峰的峰高，同时测定相同条件下的色谱基线噪声，取基线噪声的10倍值为定量限，连续进样6次，记录色谱图，因此本品定量限为0.5 ng（0.1%）。

2.9样品测定 取6个批次的样品各2份，分别按照"2.2"项下方法制备供试品溶液，按色谱条件测定，见表1。

同时，取以上样品，按照中国药典（2010年版）缬沙坦含量测定方法进行酸碱滴定，见表2。

3讨论

3.1高效液相色谱分辩率高于其它色谱法[1-2]；速度快；重复性高；自动化操作，分析精确度高。酸碱滴定法是基于酸碱反应的滴定分析方法，其操作误差主要与滴定条件、指示剂、终点判断以及操作水平等影响因素有关。

3.2丁酰基缬沙坦是缬沙坦原料中主要控制杂质之一。其与缬沙坦主要区别在于正丁酰基。在进行滴定法进行含量测定时，易使含量测定结果偏高。采用高效液相色谱进行含量测定时，缬沙坦与丁酰基缬沙坦有效分离，含量测定结果准确，方法专属性高，方法简便、快速、准确、重现性好。

参考文献：

[1]Drug Standards of China （国家药品标准）.YBH01882012.

[2]Drug Standards of USP35-NF30 Page 4997. Pharmacopeial Form： Volume No.33（3） Page 467.