西吡氯铵滴眼液中吡啶的测定

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摘要： 目的：建立西吡氯铵滴眼液中吡啶的气相色谱测定法。方法：用5%二苯基-95%二甲基硅氧烷共聚物为固定相的毛细管柱（30m×0.54mm×5.0μm），柱温在35℃维持5分钟，然后以每分钟8℃的升温速率升至115℃，以氮气为载气，气化室和检测器温度分别为120℃和260℃。结果：吡啶与杂质峰之间的分离良好。在0.492～9.84μg/ml的范围内吡啶的峰面积和浓度线性相关，回收率99.8%（n=9），RSD为4.9%（n=6）。结论：该分析方法准确可靠，简便易行，可用于西吡氯铵滴眼液中吡啶的测定。

Abstract： Objective： To establish a gas chromatography method for the determination of pyridine in cetylpyridinium chloride ophthalmic solution. Methods： The separation was performed on a capillary column which was a copolymer of 5% diphenyl-95% diphenyl siloxane as stationary phase.Column temperature was 35℃ for 5 minutes.Then it increased to 115℃ in rate of 8℃ per minute.Carrier gas was nitrogen. Injector and detector were set at 120℃ and 260℃ respectively. Results： Pyridine and contamination could be completely separated with the established method. It was a linear correlation between the peak area and the concentration in concentration range of 0.492～9.84μg/ml.The recovery was 99.8%（n=9）.RSD is 4.9%（n=6）. Conclusion： The established method was accurate， simple and is suitable for determination of pyridine in cetylpyridinium chloride ophthalmic solution.

关键词： 西吡氯铵滴眼液；吡啶；气相色谱法

Key words： cetylpyridinium chloride ophthalmic solution；pyridine；gas chromatography

中图分类号：R988.1 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2013）26-0304-02

0 引言

西吡氯铵为一种季铵盐类表面活性剂，常被用于消毒和进行一般环境卫生的抗菌试剂，对于革兰氏阳性菌和阴性菌均具有广谱抗菌活性，同时也能抗病毒以及抑制一些病原性真菌和原生动物[1]。西吡氯铵在临床主要用于中、轻度细菌性结膜炎的治疗[2]。由于西吡氯铵的主要降解产物是吡啶，同时该降解产物具有一定毒性，因此西吡氯铵滴眼液中吡啶的准确测定，对于保证西吡氯铵滴眼液的用药安全和质量可靠具有重要意义。本文研究并建立了西吡氯铵滴眼液中吡啶的气相色谱测定方法，方法灵敏、准确，可用于西吡氯铵的质量控制。

1 仪器与试剂

岛津公司14-A气相色谱仪，色谱柱：HP-5毛细管柱（30m×0.54mm×5.0μm），浙江大学N2000色谱工作站。

西吡氯铵滴眼液（0.4ml：0.1mg，批号040901、040902、040903），中国药科大学药物制剂教研室提供，吡啶为分析纯，水为重蒸水。

2 方法

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照溶液：取吡啶适量，精密称定，加水溶解并稀释至2.5μg/ml，摇匀，即得吡啶对照液。

2.1.2 供试溶液：取西吡氯铵滴眼液作为供试液。

2.2 色谱条件

用HP-5毛细管柱（30m×0.54mm×5.0μm），柱温在35℃维持5分钟，然后以每分钟8℃的升温速率升至115℃，以氮气为载气，气化室温度：120℃，检测器温度：260℃，不分流进样测定。

2.3 测定法

分别取吡啶对照液和供试品各1.0μl，照气相色谱法（中国药典2010年版二部附录ⅤE）进样测定，记录色谱图并以吡啶的峰面积外标法定量测定。

2.4 系统适用性实验

取供试品适量，向其中加入吡啶储备液，使吡啶的浓度为2.5ug/ml。混匀后取1.0μl注入气相色谱仪，记录谱图。另取空白辅料配置空白溶液，及西吡氯铵滴眼液，依法处理并进样，记录色谱图，见图1。可见吡啶的保留时间4.3min，理论塔板数8600，与杂质峰的分离度2.6，能够完全分离，杂质不干扰测定。

2.5 线性

分别精密量取吡啶储备液0.1ml，0.2ml，0.5ml，1.0ml，2.0ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；照上述色谱条件1.0μl注入气相色谱仪，记录谱图。以吡啶的浓度为横座标，吡啶峰面积为纵座标进行线性回归，在0.492～9.84μg/ml的范围内，吡啶的峰面积和浓度线性相关，回归方程A=1.766×104×c-1.493×103，相关系数r=0.9990，线性关系良好。

2.6 精密度

取吡啶对照液1.0μl，照上述色谱条件，重复进样6次，记录吡啶色谱峰面积，相对标准偏差RSD为4.9%，方法的进样精密度较好。

2.7 定量限和检测限

取吡啶对照液，以水稀释至不同浓度后测定，测得吡啶定量限约250ng/ml（S/N≥10），检测限约50ng/ml（S/N≥3），方法灵敏度较高，适合微量吡啶的检查。

2.8 回收率

精密移取吡啶储备液0.5ml，置10ml量瓶中，加供试品至刻度，摇匀，分别取该溶液和吡啶对照溶液各1.0μl注入气相色谱仪，记录谱图，并计算回收率，结果见表1。

2.9 样品测定

按测定法项下的方法测定西吡氯铵滴眼液样品中的吡啶，结果见表2。由结果可见，西吡氯铵滴眼液中吡啶含量在0.13%～0.22%，方法能够准确测定西吡氯铵滴眼液中的吡啶。

3 讨论

3.1 实验中为了避免西吡氯铵在汽化室中的降解对吡啶的测定造成干扰，对汽化室温度进行了优化，发现汽化室温度在120℃以下时西吡氯铵对测定无干扰，因此选择汽化室温度为120℃。

3.2 中国药典（2010年版）二部[3]中头孢他啶及注射用头孢他啶中吡啶的检查采用了HPLC法，但由于本品中西吡氯铵浓度低，因此可能降解生成的吡啶浓度相应也较低，采用HPLC法测定时无法准确测定，故考虑改用GC法测定，方法检测限50ng/ml，灵敏度高。

3.3 中国药典（2010年版）二部[3]附录有机溶剂残留项下规定，原料药中吡啶的限度为0.02%。而对于制剂中吡啶的限度制定，应结合实际产品的每日给药剂量及吡啶对人体的毒害来制定。注射用头孢他啶单次给药剂量1000mg[4]，中国药典（2010年版）二部[3]对其中吡啶的限度为头孢他啶量的0.4%。由于西吡氯铵滴眼液单次给药剂量2滴，每日3-4次[2]，剂量低于注射用头孢他啶；同时滴眼液与注射剂给药方式不同。此外，西吡氯铵滴眼液中测得吡啶含量在0.13%～0.22%之间，综合上述考虑将吡啶的限度暂定为以西吡氯铵计不得过1.0%。

4 结论

通过对西吡氯铵滴眼液中吡啶检查的方法学研究表明，采用气相色谱法，用5%二苯基-95%二甲基硅氧烷共聚物为固定相的毛细管柱（30m×0.54mm×5.0μm），柱温在35℃维持5分钟，然后以每分钟8℃的升温速率升至115℃，以氮气为载气，气化室温度：120℃，检测器温度：260℃，不分流进样测定。依法进行测定，吡啶与杂质峰之间的分离良好，空白无干扰；在0.492～9.84μg/ml的范围内，吡啶的峰面积和浓度线性相关，回归方程A=1.766×104×c-1.493×103，相关系数r=0.9990；方法回收率99.8%（n=9），精密度试验RSD为4.9%（n=6）；表明该分析方法准确可靠，简便易行，可用于西吡氯铵滴眼液中吡啶的

检查。

参考文献：

[1]Thorsteinn Loftsson， Thorsteinn Thorsteinsson， Mar Masson. Hydrolysis kinetics and QSAR investigation of soft antimicrobial agents. Journal of Pharmacy and Pharmacology， 2005，57：721-727.

[2]北京德瑞菲尔公司.西吡氯铵滴眼液（亮奇）[J].眼科，

2007，16（5），后插Ⅲ.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[M].北京：化学工业出版社，2010：135.

[4]席兰艳，袁洪，黄志军等.注射用头孢他啶在健康人体的生物等效性[J].中国医院药学杂志，2010，30（4）：299-302.