高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量

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摘 要：复方氨基酸注射液是一种透明、无色或微黄色的澄明液体，适用于不能口服或经肠道补给营养，以及营养不能满足需要的患者。本文采用高校液相测定了复方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量，以A磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵1.15g，加水800m溶解后，用磷酸调节pH值至2.0±0.1，加水稀释至1000ml）-B甲醇梯度洗脱为流动相，检测波长为280nm；本方法可用于复方氨基酸注射液中色氨酸和酪氨酸的含量测定。

关键词：复方氨基酸注射液；高效液相；含量

复方氨基酸注射液是一种透明、无色或微黄色的澄明液体，适用于不能口服或经肠道补给营养，以及营养不能满足需要的患者。复方氨基酸注射液具有促进人体蛋白质代谢正常，纠正负氮平衡，补充蛋白质，加快伤口愈合的作用。氨基酸（Amino acid）是构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使他的分子具有生化活性[1-4]。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酵素和酶。酪氨酸是一种芳香族氨基酸，亦是20种用来合成蛋白质的蛋白氨基酸之一[5-11]。色氨酸具有促进胃液及胰液产生的作用。目前主要生产复方氨基酸注射液的厂家有上海长征富民金山制药有限公司、广东利泰制药股份有限公司、八峰药化宜昌有限责任公司、石家庄四药有限公司、西南药业股份有限公司、湖南科伦制药有限公司、安徽丰原药业股份有限公司、广东科伦药业有限公司、广东利泰制药股份有限公司、广州百特侨光医疗用品有限公司等。本文采用高校液相测定了复方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量。

1 仪器与试药

瑞士梅特勒-托利多MS精密天平（梅特勒-托利多中国公司）；SCQ-1020超声波清洗器 （上海声彦超声仪器有限公司）；UltiMate3000 高效液相色谱仪（上海仪先仪器有限公司）；E2000制冷色谱柱温箱（上海子期实验设备有限公司）；UV2800紫外可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；PHS-3C酸度检测仪（深圳市卡迪亚科技有限公司）；MP-TA-10L 超纯水器（成都优越科技有限公司）。乙腈（济南汇丰达化工有限公司）、三乙胺（吴江市吉祥精细化工有限公司）、冰醋酸（济南汇丰达化工有限公司）、甲醇（吴江市吉祥精细化工有限公司）、醋酸钠（济南汇丰达化工有限公司）、磷酸二氢钠（吴江市吉祥精细化工有限公司）、四氢呋喃（济南汇丰达化工有限公司）、磷酸（淄博丰仓化工有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果[11]，确定色谱条件如下。色谱柱为奥泰公司 C18 色谱柱（250 mm×4.6mm，5μm）；以A磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵1.15g，加水800m溶解后，用磷酸调节pH值至2.0±0.1，加水稀释至1000ml）-B甲醇，梯度洗脱，流动相为在0-10分钟内流动相配比从A-B=95：5到A-B=90：10，在11-25分钟内流动相配比从A-B=90：10到A-B=80：20为流动相；检测波长为280nm；流速1.0mL・min-1；柱温：30℃。理论板数按色氨酸峰计算应不得低于3000。

2.2 供试品溶液的制备

精密量取复方氨基酸注射液适量，置于容量瓶内，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取酪氨酸和色氨酸对照品适量，加水制成每1mL含酪氨酸200μg和色氨酸2mg的溶液，即得。

2.4 标准曲线的制备

分别精密称取色氨酸对照品、酪氨酸对照品200.0mg、20.0mg，置50ml容量瓶中，加入水使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1、2、4、6、8mL，置于10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。依照色谱条件测定，以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，色氨酸在0.4～4.0mg・mL-1范围内呈良好的线性关系；酪氨酸在40～400μg・mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.5 专属性试验

依照处方取除色氨酸和酪氨酸以外的原辅料制成阴性对照样品，依上述方法测定，结果在色氨酸和酪氨酸出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.6 稳定性试验

依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时进样测定，供试品色氨酸和酪氨酸峰面积的RSD分别为0.63%和0.65%。结果表明样品至少在4小时内稳定。

2.7 回收率试验

精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的色氨酸和酪氨酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.5%和99.6%，RSD分别为0.89%和0.86%。

2.8 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定复方氨基酸注射液三批样品中色氨酸和酪氨酸的含量，结果三批样品的色氨酸和酪氨酸含量分别为标示量的100.2%、100.2%、99.9%和99.8%、100.2%、99.9%。

3 讨论

分别考察乙腈一水（75：35），水-甲醇（20∶80），乙腈-0.01mol・L-1的磷酸溶液（80：20），水-甲醇-三乙胺（20∶80：0.01），乙腈-甲醇-20mmol/L磷酸二氢钠溶液（磷酸调pH 3.5±0.1）（10：5：85），以A磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵1.15g，加水800m溶解后，用磷酸调节pH值至2.0±0.1，加水稀释至1000ml）-B甲醇梯度洗脱， 乙腈-0.01moloL-1的磷酸氢二钠-磷酸（10：90：0.05），乙腈-0.01mol/L的磷酸氢二钠-磷酸（20：80：0.01）不同比例的流动相，结果以以A磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵1.15g，加水800m溶解后，用磷酸调节pH值至2.0±0.1，加水稀释至1000ml）-B甲醇梯度洗脱为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用以A磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵1.15g，加水800m溶解后，用磷酸调节pH值至2.0±0.1，加水稀释至1000ml ）-B甲醇梯度洗脱为流动相。

参考文献

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[5]丁大鹏，马文丽，郑文岭.酪氨酸酶抑制剂的研究进展[J].实用医学杂志，2005（12）.

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