HPLC法测定对乙酰氨基酚泡腾片含量
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【摘 要】对乙酰氨基酚也称为对羟基乙酰苯胺、醋氨酚或扑热息痛，是一种常用的退热和止痛药物。本实验建立反相高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚泡腾片中对乙酰氨基酚的含量。方法：采用安捷伦 C18色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm），磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10），检测波长为254nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。结论：本法简便、准确，可用于对乙酰氨基酚泡腾片中对乙酰氨基酚的含量测定。
【关键词】对乙酰氨基酚泡腾片；含量；测定
对乙酰氨基酚也称为对羟基乙酰苯胺、醋氨酚或扑热息痛，是一种常用的退热和止痛药物。对乙酰氨基酚有解热镇痛作用，用于感冒发烧、关节痛、神经痛、偏头痛、癌痛及手术后止痛等。对乙酰氨基酚是非那西丁在体内的代谢产生，其抑制中枢神经系统前列腺素合成的作用与阿司匹林相似，但抑制外周前列腺素合成作用弱。本实验采用高效液相色谱法对对乙酰氨基酚泡腾片中的对乙酰氨基酚的进行了含量测定。
1.仪器与试药
1.1仪器
FL2200-2高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（上海子期实验设备有限公司）；R-215旋转蒸发仪（瑞士步琦有限公司）；HQ-50高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司） ；ABS220-4分析天平（德祥科技有限公司）；AP-01P无油隔膜真空泵（杭州格图科技有限公司）；JL_720DTH超声波清洗器（南京科捷分析仪器有限公司）；TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2色谱柱
安捷伦 C18色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品
对乙酰氨基酚 购自中国药品生物制品检定所。
1.4试剂
甲醇（上海谱振生物科技有限公司）、磷酸二氢钠（抚顺市新光精细化工有限责任公司）、溴化四丁基铵（北京迈瑞达科技有限公司）、乙腈（上海谱振生物科技有限公司）、冰醋酸（武汉宏信康精细化工有限公司）、三乙胺（郑州皇朝化工产品有限公司）、四丁基硫酸氢铵（上海谱振生物科技有限公司）、庚烷磺酸钠（沈阳试三生化科技开发有限公司）、四氢呋喃（武汉宏信康精细化工有限公司）。
1.5试药
对乙酰氨基酚泡腾片。
2.测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-10]。流动相：磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10），检测波长：254nm，流速：1.0ml・min-1。柱温：30℃。理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取对乙酰氨基酚对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取对乙酰氨基酚泡腾片适量，研细，精密称取，置50mL量瓶中，加水溶解，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4专属性试验
在处方中去对乙酰氨基酚制成阴性样品，依上述方法测定，结果在对乙酰氨基酚出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5精密度试验
精密称取对乙酰氨基酚对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为20μg・mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.76%，表明本方法精密度良好。
2.6对照品的线性考察
精密称取对乙酰氨基酚对照品15mg，置250ml容量瓶中，加入流动相溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1.5、2.5、3.0、3.5、4.5mL，置于5mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，对乙酰氨基酚在18～60μg・mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7重现性试验
称取同一批的对乙酰氨基酚泡腾片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.83%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的对乙酰氨基酚对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.2%，RSD=0.86%。结果表明此方法的回收率良好。
2.9样品稳定性试验
取同一批对乙酰氨基酚泡腾片样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8小时，精密吸取供试品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定对乙酰氨基酚泡腾片中对乙酰氨基酚的RSD=0.72%。结果表明供试品8小时内稳定。
3.结论
分别考察磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（80：10：10），甲醇-0.01mmol・L-1三乙胺水溶液（70∶30，冰醋酸调pH7.0），甲醇-0.3%磷酸（37∶63），2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：30：0.1），乙腈-四氢呋喃-三乙胺磷酸缓冲液（25：15：60），磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10），0.34%四丁基硫酸氢铵溶液-乙腈（75∶25）不同比例的流动相，结果以磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10）为流动相。本实验表明此方法可用于对乙酰氨基酚泡腾片中对乙酰氨基酚的含量测定。对乙酰氨基酚泡腾片中对乙酰氨基酚的含量为标示量的95-105%。
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