HPLC测定常通舒颗粒中二苯乙烯苷含量

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[摘 要] 目的：建立常通舒颗粒中二苯乙烯苷含量分析方法。方法：采用FORTIS-C18柱（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液（76：24）为流动相，采用梯度洗脱，流速1.0mL・min-1，柱温30℃，检测波长320nm。 结果：二苯乙烯苷在9.36～93.6μg/mL浓度范围内有良好线性关系（r=0.9999），平均加样回收率为98.8%，RSD为1.11%。结论：本方法灵敏度高、准确、重复性好、专属性强，可作为控制常通舒颗粒质量重要方法。

[关键词] 二苯乙烯苷；常通舒颗粒；高效液相色谱法

中图分类号：R284.1 文献标识码： A 文章编号：2095-5200（2015）04-056-03

常通舒颗粒为原卫生部部颁药品标准中药成方制剂第10册（WS3-B-2031-95）收载。本方由何首乌、当归、赤芍、火麻仁、桑椹等五味药材组成。具有滋阴养血，润肠通便之功效。用于习惯性便秘，老年性便秘及产后便秘等症[1]。原制剂质量标准中只有检查和鉴别项，缺乏对制剂中药材定量控制，无法对制剂原料药材进行品质管控，制剂工艺科学性和稳定性无法提供科学依据，无法控制成品内在质量。为更好控制本制剂质量，笔者以方中何首乌为控制药材，以主要药效成分2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为定量分析指标，建立了常通舒颗粒定量分析方法，为该制剂质量标准提升提供重要依据。现代药理研究发现，何首乌补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨功效相关药理作用是促进造血功能，提高机体免疫功能，降血脂，抗动脉粥样硬化，保肝，延缓衰老，影响内分泌功能，润肠通便等作用[2]。何首乌功效作用物质基础主要为磷脂、蒽醌类、葡萄糖苷类等成分[3-4]。其中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷是何首乌主要药理活性物质及其质量控制指标成分。中国药典也将其作为何首乌及含何首乌制剂主要质量评价标定物[5]。

本文采用hplc法对不同批次常通舒颗粒中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量进行分析，结果表明：本法灵敏度高、重复性好， 结果准确。

1 仪器与试药

Dionex-U3000液相色谱仪（Dionex公司，Dionex Chemeleon色谱工作站）；Mettler Toledo MS104S型电子天平（d=0.01mg，瑞士Mettler Toledo）公司；2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品（供含量测定用，中国食品药品检定研究院，批号0819-200203）；常通舒颗粒及缺何首乌阴性对照样品（湖北清大制药有限公司，规格：5g/袋）；甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司 ，分析纯）；乙腈（天津大茂，色谱纯）；磷酸（武汉市江北化学试剂有限责任公司 ，分析纯）；水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备

取经五氧化二磷减压干燥器中干燥至恒重，二苯乙烯苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含93.6μg溶液，即得。

2.2 供试品制备

取本品5.0g，用研钵研成粗粉，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述方法制得不含何首乌阴性对照溶液。

2.3 系统适应性试验与色谱条件

采用以乙腈：0.1%磷酸溶液为流动相，采用梯度洗脱[5-9]，乙腈%（A），0.1%磷酸%（B）梯度洗脱程序为在0～12min内A：B为（76：24）；时间从12～60min过程中，A比例从76%89%；而B从24%11%。色谱柱为：FORTIS-C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长320nm，进样量为：10μL，在此色谱条件下，二苯乙烯苷色谱峰理论板数不小于4000，分离度大于1.5。色谱图见图1。

2.4 标准曲线与线性范围

准确吸取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL分别置10mL量瓶中，加流动相稀释，并定容至刻度，摇匀，得到浓度分别为4.68μg/mL、9.36μg/mL、18.72μg/mL、46.80μg/mL、74.88μg/mL、93.60μg/mL二苯乙烯苷对照品溶液。分别准确吸取10μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得到回归方程为：Y=0.8976X+1.4421，r=0.9999；结果表明二苯乙烯苷在4.68～93.60μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

取二苯乙烯苷对照品溶液，按照上述色谱条件，进样分析，重复进样6次，结果色谱峰保留时间稳定，计算6次色谱峰面积RSD分别为0.96%。

2.6 稳定性试验

取常通舒颗粒中供试品溶液，室温下分别在0h、3h、6h、12h、24h进样测定，记录色谱峰面积，计算其RSD为1.52%，表明处理后常通舒颗粒供试品溶液室温下24h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批常通舒颗粒样品（批号20130708）6份，精密称定，按上述方法制备供试品溶液，依法测定，结果：二苯乙烯苷平均含量0.47mg/g，RSD为1.83%。

2.8 加样回收率试验

称取重复性实验已测定含量常通舒颗粒样品（批号20130708）9份，每份2.5g，精密称定，分别加入二苯乙烯苷对照品溶液（浓度93.6μg/ml）11.0mL、12.0mL、13.0mL（3种不同水平，各3份），按上述方法同法制备供试品溶液，进样10μL。按外标两点法计算二苯乙烯苷含量，结果见表1。

2.9 样品测定

按上述色谱条件对5批样品进行含量测定，得到三次测定平均值。结果5批样品含量分别为0.47 mg/g、0.46 mg/g、0.41 mg/g、0.48 mg/g、0.44mg/g。

3 讨论

常通舒颗粒中，何首乌为方中君药。中国药典对何首乌质量控制为测定二苯乙烯苷，结合型蒽醌总量。对于本复方制剂而言，分析二苯乙烯苷含量能严格控制原料与工艺稳定性，并且能特征性表征何首乌（由于蒽醌类化合物在蓼科很多植物中均含有，不能特征性反映何首乌）。因而笔者选择本方中君药何首乌所含二苯乙烯苷作为本方定量控制指标。

笔者还对生产厂家提供何首乌药材进行了测定，结果显示，何首乌中二苯乙烯苷含量为0.93%。经计算，常通舒颗粒在制备过程中，其二苯乙烯苷转移率为78.6%，说明常通舒颗粒制备工艺合理，能充分保证有效成分转移率，并且证明何首乌药材投放量合格。今后将进一步提高制备工艺水平，保证制剂质量进一步提高和制备工艺稳定性。

参 考 文 献

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[4] 杨琳，林万程，施家乐，等.何首乌中有效成分二苯乙烯苷研究进展[J].河北医科大学学报，2008，29（1）：157～160.

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[6] 张维萍，王冬梅，吴庆芝，等.RP-HPLC法同时测定安神补心片中5个成分含量[J].药物分析杂志，2014，34（2）：259-263.

[7] 杨慈海，宋 军，成 森.高效液相色谱法测定颈康胶囊中二苯乙烯苷含量[J].中国药业，2013，22（24）：35-36.

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[9] 秦郁文，唐富丽.HPLC法测定七宝美髯软胶囊中二苯乙烯苷含量[J].中国药师，2013，16（5）；686-688.