1―磷酸鞘氨醇受体在糖尿病小鼠肾脏表达变化

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【摘 要】目的：观察1-磷酸鞘氨醇受体在四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠肾脏表达变化。方法：腹腔注射四氧嘧啶制作糖尿病小鼠模型，应用q-PCR检测糖尿病小鼠肾脏S1P受体表达变化。结果：实验结束12周时糖尿病小鼠出现明显肾功能损伤。糖尿病小鼠肾组织S1P2、S1P4和S1P5 受体mRNA表达显著增加。结论：表达增加S1PR可能参与糖尿病小鼠肾功能损伤过程。

【关键词】1-磷酸鞘氨醇受体；糖尿病；肾功能

【文章编号】1004-7484（2014）07-4152-02

前言

1-磷酸鞘氨醇（sphingosine -1-phosphate， S1P）是一种有生物活性的溶血磷脂，是磷脂类分解代谢过程的中间产物。S1P与其特异性受体结合，调控血管形成、免疫调节、恶性肿瘤等生理病理过程[1]。目前已经分离鉴定出5种高亲和力的S1P受体（sphingosine-1-phosphate receptors， S1PR），即S1P1-S1P5。本研究在四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠模型中，检测肾组织中5种S1P受体mRNA表达，观察S1P受体在糖尿病肾脏的表达变化情况。

1材料与方法

1.1糖尿病动物模型制作与分组

健康雄性C57BL/6小鼠，SPF级，30只，体重为20 ± 5 g，购自广东省医学实验动物中心动物生产部。动物实验在中山大学实验动物中心动物实验部屏障环境实验室进行。小鼠禁食后给予单次腹腔注射200 mg/kg四氧嘧啶 （生理盐水新鲜配制）制作糖尿病小鼠模型。注射72h后测空腹血糖值≥11.1 mmol/L确定为糖尿病小鼠。选同批次10只正常健康动物作为正常对照组，共观察12周。

1.2 标本收集和检测

每周称量并记录各组动物体重变化。实验结束时，小鼠麻醉后剥离肾脏，称量并记录双侧肾脏的湿重。血糖用葡萄糖氧化酶法检测；血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）分别用酶法、速率法由Beckman CX-5全自动生化分析仪进行检测；尿蛋白（UP 24h）测定用磺基水杨酸-硫酸钠比浊法。

1.3 q-PCR检测肾脏S1P受体表达

按照试剂盒说明书抽提细胞总 RNA，分别进行反转录和实时荧光定量PCR反应。反应条件为： 95 ℃ 预变性5 min；95 ℃ 10 s，60 ℃ 退火15 s，共 40 个循环。S1P 受体引物由生工生物工程（上海）有限公司合成。

1.4统计学分析

实验数据用SPSS11.5统计软件分析，组间比较采用t检验，结果用均数 ± 标准差 （Mean ± SD）表示。P < 0.05被认为存在统计学差异。3讨论

四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠模型是常用的化学试剂诱导所致糖尿病实验动物模型，出现的慢性糖尿病肾功能损害与人类糖尿病相似[2-3]。本研究实验12周结束时，糖尿病小鼠空腹血糖高于糖尿病空腹血糖诊断标准，“三多一少”症状明显，体重下降，肾脏肥大指数（肾重/体重比）、血尿素氮、血肌酐、24小时尿蛋白较正常动物明显升高，表明糖尿病动物模型建立成功，糖尿病肾功能障碍形成。

在四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠肾脏中，我们发现S1P2、S1P4和S1P5受体mRNA表达明显上调，以S1PR2受体表达增加最为显著，提示S1P受体表达的改变可能参与糖尿病小鼠肾功能损伤形成过程。这些表达增加的不同类型S1P受体在糖尿病尤其是糖尿病肾功能损伤尤其是肾脏纤维化发病进程中发挥什么样的作用是我们感兴趣并将进一步探讨的问题。

参考文献

[1] 景小东， 佘强. 1-磷酸鞘氨醇在心血管系统中作用的研究进展[J].医学综述， 2013，19（15）： 2719-2721

[2] 郭仲杰， 彭娟， 罗天友， 等. 四氧嘧啶与链脲佐菌素诱导兔 1 型糖尿病模型的比较[J].四川动物， 2014 ， 33 （1）：123-126

[3] KATSUMA S.， HADA Y.， UEDA T.， et al. Signalling mechanisms in sphingosine 1-phosphate-promoted mesangial cell proliferation [J]. Genes Cells， 2002， 7（12）： 1217-1230

作者简介：

刘慰华（1977-），女，博士，讲师，主要研究方向：药理学，

通讯作者：

刘彬

*基金项目：

高等学校博士学科点专项科研基金（20124423120001）；广东高校优秀青年创新人才培养计划项目（2012LYM_0111）