采用高效液相色谱法同时测定复方丹参滴丸中的多成分含量
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摘 要 目的：采用高效液相色谱法（HPLC法）同时测定复方丹参滴丸中的7种成分。方法：应用Diamonsil C18色谱柱，以乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，在柱温35 ℃下使用205、270和285 nm三波长同时检测。结果：7种成分的峰面积与浓度的线性关系良好，平均回收率在94.3%～101.3%间，加样回收率符合要求。结论：该方法简单、准确可靠且重现性好，可用于该制剂的质量控制。
关键词 复方丹参滴丸 HPLC法 含量测定
中图分类号：R284; R927.2 文献标识码：A 文章编号：1006-1533(2011)08-0413-03
Quantitative determination of multi-components in Compound Danshen Dripping Pill by HPLC method
Yao Lin1*，Cheng Wei-ming2**
（1. Shanghai Food and Drug Packaging Material Control Center，Shanghai， 201203；
2. Zhejiang Institute for Food and Drug Control，Hangzhou，310004）
Abstract Objective: To establish an HPLC method for the simultaneous determination of 7 components in Compound Danshen Dripping Pill. Method: Diamonsil C18 was used as the solid phase， and acetonitrile-methanol-0.1% (v/v) phosphoric acid as the mobile phase for the gradient elution. The column temperature was 35℃，and the detective wavelengths were set as 205， 270 and 285 nm. Results: the linearities of the 7 components were all good in the range of the test concentration，and the average recoveries were between 94.3% and 101.3%. Conclusion: the method was simple，reliable and reproducible，which could be used as quality control for the determination of Compound Danshen Dripping Pill.
Key words Compound Danshen Dripping Pill；HPLC；content determination
中药成分的含量测定是中药现代化研究的重要组成部分之一，而中药复方多成分含量的同时测定研究还可为中药复方的质量控制提供必要的基础和方法。复方丹参滴丸系根据1995年版中国药典一部中复方丹参片的处方、经在现代高科技条件下提取丹参和三七的有效成分、再加入适量的冰片制成的新型纯中药制剂，具有活血化瘀、理气止痛的功效，临床上广泛用于治疗胸中憋闷、心绞痛等心血管疾病。与传统的片剂相比，该滴丸剂具有起效快、用量低、不良反应小等优点，现已被定为全国中医医院急诊必备成药[1]。有关研究表明，丹参的活性成分主要为脂溶性的二萜醌类和水溶性的丹参酚酸类物质：脂溶性的二萜醌类物质具有扩张冠状动脉、提高冠脉血流、保护心肌及广谱抑菌作用；丹参酚酸类物质则具有抑制血小板聚集、抗血栓形成、抗氧化和保护心脏微血管内皮细胞等作用[2,3]。三七的主要活性成分是皂苷类物质，后者具有抗血栓形成、扩张血管和保护心肌等作用[4]。因此，对丹参和三七中的多种活性成分进行同时含量测定才可全面控制复方丹参滴丸的质量[5～7]。
1 仪器和试药
1.1 仪器
Agilent 1200系列高效液相色谱仪（美国Agilent有限公司），含G1379B自动脱气机、G1376A四元高效液相泵和G1365B多波长检测器。
1.2 试药
原儿茶醛、丹参素、丹酚酸B、丹参酮IIA、三七皂苷R1以及人参皂苷Rg1和Rb1（均由中国药品生物制品检定所提供）；复方丹参滴丸（购自天津天士力联合制药有限公司，批号100721、100722和100723）；乙腈、甲醇（均为色谱纯，购自Merck公司）；超纯水（由实验室Milli Q自制，美国Millipore有限公司)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特公司）。流动相A为乙腈、B为甲醇、C为0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0～10 min，3% A，6% B；11～15 min，3%～7% A，6%～12% B；16～30 min，7%～9% A，12%～15% B；31～50 min，9%～32% A，15%～25% B；51～70 min，32%～35% A，25%～50% B。柱温35 ℃；检测波长为205、270和285 nm。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液制备
精密称定各对照品适量，以75%甲醇溶液定容，制成对照品储备液。精密量取各储备液适量，置25 mL容量瓶中，以含0.5%醋酸的75%甲醇溶液（v/v）定容即得（各对照品最终浓度分别为：丹参素，11.50 μg/mL；原儿茶醛，1.561 μg/mL；三七皂苷R1，12.27 μg/mL；人参皂苷Rg1，11.01 μg/mL；丹酚酸B，9.770 μg/mL；人参皂苷Rb1，25.61 μg/mL；丹参酮IIA，0.017 01 μg/mL）。
2.2.2 供试品溶液制备
取复方丹参滴丸50丸，研细后精密称取适量（约合10丸），置50 mL容量瓶中，加入甲醇20 mL，超声波处理30 min，放冷至室温，以甲醇定容。12 000 r/min离心机离心处理10 min后，取上清液即得。
2.3 线性范围
按照上述色谱条件，以自动进样器分别进样对照品溶液1、2、4、8、25和50 μL，记录色谱图（图1）。分别以各对照品的含量为横坐标、相应的峰面积为纵坐标，计算线性回归方程（表1）。
2.4 精密度、重现性和稳定性实验
按照上述色谱条件，取供试品溶液连续进样6针，以峰面积计算7个成分日内精密度和重现性。连续分析7 d，以峰面积计算7个成分的日间精密度；分别于0、1、2、4、8、12和24 h进行测定，计算7个成分的稳定性（表2）。
2.5 回收率实验
准确称取已知含量的复方丹参滴丸6份，分别加入7个对照品适量，按照上述色谱条件分析，得7个成分的加样回收率（表3）。
2.6 样品测定
取3个批号的复方丹参滴丸，按照上述色谱条件，进样20 μL分析，结果如下（表4）。
3 讨论
丹参素和原儿茶醛的结构中都含有邻二酚羟基，易被氧化而造成测定含量偏低，查阅文献[8, 9]发现不同浓度的甲醇-水溶液也会使这两者的测定含量有所降低。作者通过实验发现，加入适量的酸能抑制丹参素和原儿茶醛氧化，故在对照品溶液配制时采用了含0.5%醋酸的75%甲醇溶液（v/v）。
复方丹参滴丸为薄膜包衣，单纯利用甲醇超声提取时，甲醇难以进入滴丸。所以，应事先对滴丸进行研磨，以保证甲醇能将其中的目标成分充分提取。
本文测定的7个活性成分，由于各自的结构特点不同，故特征紫外吸收波长有一定的区别，如使用单一波长测定将会造成较大的误差。因此，本文采用了多波长检测器，能同时进行多个波长的含量测定。该方法简单，精密度、重现性和稳定性较好，且同时测定了复方丹参滴丸中的多个活性成分，适于全面评价复方丹参滴丸的质量。
参考文献
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（收稿日期：2011-06-07）