全自动毛细管血红蛋白电泳在地中海贫血诊断筛查中的应用

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摘要：目的 评估全自动毛细管血红蛋白电泳在地中海贫血诊断筛查的应用价值。方法 应用全自动毛细管血红蛋白电泳仪， 对2177 例在我院住院和门诊的患者进行血红蛋白分析；同时应用单管多重PCR 法和RDB/ PCR技术分别检测其α，β-地中海贫血基因诊断。结果 2177例血红蛋白分析中HbA23.5%的230例，占10.56%。抽取其中HbA23.5%的115例进行α，β地中海贫血基因诊断。HbA23.5%的115例α缺失型、中国人常见的三种α突变和中国人常见的17种β-地中海贫血基因诊断，检测出98例β-地贫，16例α并β复合地贫，符合率为99.13%。结论 采用毛细管电泳技术的血红蛋白分析与基因分析有良好的符合性， 可用于地中海贫血诊断的筛查。

关键词：毛细管血红蛋白电泳； 地中海贫血； 基因诊断

Abstract：Objective In order to access the application value of Automated Capillary zone Hemoglobin Electrophoresis in Thalassemia screening.Methods Implement the automated capillary Hb electrophoresis apparatus to do Hemoglobin analysis for 2177 specimens in our hospital， which patient age range is from one year old to adult. Besides， implement the single-tube multiplex PCR and RDB/PCR technical to detect and diagnose α&βThalassemia genetic respectively in these specimens.Results In 2177 specimens， there are 653 cases of HbA23.5% is 230 cases， proportion is 10.56%. Select 116 case of HbA23.5% to α&βThalassemia genetic diagnosis. For 116 case of HbA23.5%， also conduct the same types Thalassemia genetic analysis and detection. The detect result is 98 cases β- Thalassemia and 16 cases α&βcomposite Thalassemia， coincidence rate is 99.13%.Conclusion The Hemoglobin analysis and Genetic detect analysis have good coincidence by capillary electrophoresis technique， which can be implement for Thalassemia screening.

Key words：Capillary electrophoresis； Mediterranean anemia；Gene diagnosis

地中海贫血是由于编码珠蛋白的α或β类珠蛋白基因发生缺失或点突变，使α或β类珠蛋白链缺如或不足所致的贫血，我国南方地区高发[1]。目前尚无有效的治疗方法，对携者做出诊断及产前进行筛查，是防止地贫患儿出生，减少本病发生的唯一有效措施。本研究通过对比血红蛋白分析与基因分析检测结果，评估采用全自动毛细管电泳法血红蛋白分析对地中海贫血的诊断应用价值。

1资料与方法

1.1一般资料 受检对象年龄1岁～48岁，其中男871例，女1306例，全部为2012年6 月～2013年7月在本院住院或门诊就诊患者共2177例，进行毛细管血红蛋白电泳，对其中HbA23.5%的115例进行α缺失型、中国人常见的三种α非缺失型和中国人常见的17种β-地中海贫血基因诊断。

1.2仪器和试剂 ①血红蛋白分析：2907全自动毛细管血红蛋白电泳仪及配套试剂、校标品、质控品（Sebia 公司提供）；②基因分析：地贫基因诊断试剂盒（深圳亚能生物技术有限公司提供）。

1.3方法

1.3.1血红蛋白分析 将EDTA -K2 抗凝静脉血混匀后直接上机， 按2907全自动毛细管血红蛋白电泳仪的要求定标、质控并完成检测。

1.3.2基因分析 α珠蛋白基因的检测：采用单管多重PCR（gap-PCR）法检测东南亚缺失（--SEA）、右缺失（-α3.7） 和左缺失（-α4.2）3 种缺失型[2]。β-地贫基因的检测：采用 RDB /PCR技术检测17种突变类型。

1.3.3评估内容 以基因诊断作为参考方法，评估血红蛋白分析在特定阈值下对地中海贫血诊断的灵敏度与特异度，分析血红蛋白含量变化与突变类型的相关性。

2结果

对2177例进行全自动毛细管血红蛋白电泳，见表1。对其中HbA23.5%的115例进行α，β地中海贫血基因诊断，HbA23.5%的115例检出β-地贫98例，α并β复合地贫16例，符合率为99.13%，见表2。

3讨论

地中海贫血是华南地区高发的单基因遗传性溶血性疾病，人群携带率高，1999年广西柳州α地贫检出率为11.19%，β地贫检出率为6.78%[3]。地贫的实验室诊断以往主要采用MCV、红细胞渗透脆性试验等方法进行筛查，影响因素较多，敏感度和特异性均较低，且部分地贫患（特别是α地贫）MCV和（或）红细胞脆性可以正常，是造成地贫基因携带者漏诊的主要原因， 漏诊率达13.23%[4]。基因分析是地中海贫血诊断的金标准， RDB-PCR 技术可检测17种β-地贫基因突变和三种α-非缺失型，采用单管多重PCR（gap-PCR）法检测东南亚缺失（--SEA）、右缺失（-α3.7）和左缺失（-α4.2）3 种α-缺失型。但检测条件要求较高， 价格昂贵， 耗时繁琐， 不适用于常规筛查。而毛细管电泳技术是诊断和分离异常血红蛋白的有效方法，是临床诊断血红蛋白分子病，特别是地中海贫血不可缺少的手段[5]。全自动毛细管血红蛋白电泳技术综合了经典电泳技术与现代微柱分离技术两者的优点，具有快速、简便、高效、通量大和自动化的特点[5，6]。应用全自动电泳分析系统对临床标本进行血红蛋白电泳， 发现其对HbA2和HbF 分辨率较高。本法既能直接用肉眼观察比较，得出HbA2是否增高的判断，又能扫描出HbA2含量，电泳区带清晰，扫描定量准确，可以为地中海贫血的诊断提供重要依据[7]。

本研究中，以地贫基因诊断作为参考方法，评价毛细管血红蛋白电泳对地中海贫血的诊断价值。临床上α-地中海贫血常表现为HbA2 含量偏低或正常，轻型β-地中海贫血表现为HbA2 增高、HbF 含量正常， 中间型及重型β-地中海贫血表现为HbF 明显增高、HbA 2正常或增高[8]。因此本实验选取毛细管血红蛋白电泳后HbA23.5%的115例测出98例β-地贫，16例α并β复合地贫，符合率为99.13%，具有较高的符合率。

综上所述，应用全自动毛细管血红蛋白电泳技术是一种灵敏度、特异性高、重复好的分析工具，具有操作简便，通量大的优点。全自动毛细管血红蛋白电泳分析系统的引进将为我国地中海贫血诊断提供更精确的筛查。

参考文献：

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[2]曹文静，陈丽，陈魏怡，等.多重PCR 及PCR反向点杂交法在诊断珠蛋白生成障碍性贫血中的临床应用[J].内科急危重症杂志，2006，12（6）：270-272.

[3]蔡稔，李莉艳，梁昕，等.柳州市城镇人群α和β地中海贫血的发生率调查和基因鉴定[J].中华流行病学杂志，2002，23：281.

[4]朱学海，魏代奎.地中海贫血的基因诊断分析[J].中国实用医药，2008（13）：126-127.

[5]康熙雄.临床电泳[M].北京：人民卫生出版社，2006：292-311，122-140.

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[7]蒙天生，莫鸿健.全自动血红蛋白电泳在诊断地中海贫血中的应用[J].实用医学杂志，2009，25（10）：1694-1695.

[8]胡翊群.临床血液学检验[M].北京：中国医药科技出版社，2004：260-277.