刺五加水溶性成分研究

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[摘要] 目的 研究刺五加的水溶性成分。方法 利用大孔吸附树脂、凝胶、反相硅胶柱和制备型HPLC等色谱技术对刺五加水提取物进行化学成分分离，并运用质谱、核磁等波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。 结果 从中分离得到5个化合物，经鉴定分别为：4-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、5-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-阿魏酰基奎宁酸、3-O-阿魏酰基奎宁酸。结论 刺五加水提物中含有大量的奎宁酸系列衍生物。

[关键词] 刺五加；水溶性；化学成分

[中图分类号] R28 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）06（c）-0071-02

Water soluble constituents of Acanthopanax senticosus

LI Yong MA Shuanggang

State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines， Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College， Beijing 100050， China

[Abstract] Objective To study the water soluble constituents of Acanthopanax senticosus. Methods The chemical constituents were studied by means of macroporous resin， SOL-GEL， reverse phase silica gel column and PHPLC. The compounds were elucidated by magnetic resonance spectroscopy， which included ESI-MS，NMR， and so on. Results Five compounds were isolated from this plant and were determined as 4-O-caffeoylquinic acid， 3-O-caffeoylquinic acid， 5-O-caffeoylquinic acid， 4-O-feruloylquinic acid， 3-O-feruloylquinic acid respectively. Conclusion The water-extract of acanthopanax senticosus is rich in quinic acid derivative.

[Key words] Acanthopanax senticosus； Water soluble； Chemical constituents

刺五加[Acanthopanax senticosus（Rupr.et Maxim.）Harms]，又名五加参，为五加科五加属植物，分布于我国华中、华东、华南和西南等地。主治风寒湿痹、腰膝疼痛、筋骨痿软等症。现代研究发现刺五加水提取物还具有扩张血管、抗血小板凝聚、改善血液流变特性和改善微循环等作用[1-3]。因此，本研究对刺五加水溶性化学成分进行了分析，分离得到5个水溶性的奎宁酸衍生物，经鉴定分别为：4-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、5-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-阿魏酰基奎宁酸、3-O-阿魏酰基奎宁酸。

1 仪器与试药

Inova 500M型磁共振仪；Agilent 1100 Series LC-MSD-Trap-SL型质谱仪；液相色谱仪，Shimadazu LC-6AD，SPD-6A紫外检测器；YMC-Pack ODS-A制备型反相色谱柱（20 mm×250 mm，10 μm）；大孔树脂，D101型，天津南开大学化工厂；反相硅胶，Rp-C18（40～75 μm），日本Fuji Silysia公司生产。刺五加药材购自北京同仁堂，经中国医学科学院马林教授鉴定为刺五加，标本现存于中国医学科学院药物研究所植物标本室，标本号：ID-s-2520。

2 方法与结果

2.1 提取分离

取干燥生药刺五加10 kg，粉碎，用蒸馏水煮沸提取3次，每次2 h，提取液减压浓缩至2 L。经过滤，滤液上D101大孔吸附树脂，依次以水、45%和95%乙醇洗脱。45%乙醇洗脱部位经LH-20凝胶柱纯化后，采用中压反相色谱分为6个组分（Fr.1～6）。组分Fr.3经制备型HPLC分离，采用乙腈∶水（10∶90）作为流动相，最终得到5个单体化合物：化合物1（65 mg）、化合物2（47 mg）、化合物3（28 mg）、化合物4（35 mg）、化合物5（23 mg）。

2.2 结构鉴定

通过实验得到化合物1～5的质谱和磁共振数据，对其综合分析并与参考文献进行比对，最终确定结构如图1所示。化合物1～5的主要波谱数据归属如下。

2.2.1 化合物1 性状：白色无定形粉末。

ESI-MS，m/z：353[M-Na]-；1H-NMR（CD3OD，500 MHz），δ：7.58（1H，d，J = 15.5 Hz，H-7′），7.01（1H，d，J = 2.0 Hz，H-2′），6.91（1H，dd，J = 8.0，2.0 Hz，H-6′），6.73（1H，d，J = 8.0 Hz，H-5′），6.31（1H，d，J = 15.5 Hz，H-8′），4.74（1H，dd， J = 9.0，2.5 Hz，H-4），4.22（2H， m，H-3/5），2.15（1H，m，H-6a），2.12（1H，m，H-2a），2.00（1H，m，H-2b），1.95（1H，m，H-6b）。

13C-NMR（CD3OD，125 MHz），δ：177.6（C-7），169.3（C-9′），149.8（C-4′），147.4（C-7′），147.1（C-3′），128.2（C-1′），123.3（C-6′），116.8（C-5′），115.7（C-8′），115.5（C-2′），79.6（C-4），76.9（C-1），70.0（C-3），65.8（C-5），43.0（C-6），38.7（C-2）。

以上数据与文献[4]对照，1H-NMR和13C-NMR数据一致，鉴定化合物1为4-O-咖啡酰基奎宁酸。

2.2.2 化合物2 性状：白色无定形粉末。

ESI-MS，m/z：353 [M-Na]-；1H-NMR（CD3OD，500 MHz），δ：7.54（1H，d，J = 16.0 Hz，H-7′），6.98（1H，d，J = 1.5 Hz，H-2′），6.89（1H，brd，J = 8.0 Hz，H-6′），6.72（1H，d，J = 8.0 Hz，H-5′），6.25（1H，d，J = 16.0 Hz，H-8′），5.29（1H，brd，J = 3.5 Hz，H-3），4.09（1H，ddd，J = 9.5，9.5，4.0 Hz，H-5），3.58（1H，dd，J = 8.5，3.0 Hz，H-4），2.14（1H，m，H-2a），2.10（2H，m，H-2b/H-6a），1.90（1H，dd，J = 13.5，10.0 Hz，H-6b）。

13C-NMR（CD3OD，125 MHz），δ：178.6（C-7），169.3（C-9′），149.7（C-4′），147.1（C-7′），147.1（C-3′）， 128.3（C-1′），123.2（C-6′），116.8（C-5′），116.2（C-8′），115.4 （C-2′），75.7（C-1），75.1（C-4），73.3（C-3），68.6（C-5），41.9（C-6），37.0（C-2）。

以上数据与文献[4]对照，1H-NMR和13C-NMR数据一致，鉴定化合物2为3-O-咖啡酰基奎宁酸。

2.2.3 化合物3 性状：白色无定形粉末。

ESI-MS，m/z：353 [M-Na]-；1H-NMR（CD3OD，500 MHz），δ：7.50（1H，d，J = 16.0 Hz，H-7′），6.99（1H，d，J = 2.0 Hz，H-2′），6.89（1H，dd，J = 8.0，2.0 Hz，H-6′），6.71（1H，d，J = 8.0 Hz，H-5′），6.20（1H，d，J = 16.0 Hz，H-8′），5.27（1H，m，H-5），4.11（1H，m，H-3），3.67（1H，dd，J = 8.5，3.0 Hz，H-4），1.97-2.19（4H，m， H2-2/6）。

13C-NMR（CD3OD，125 MHz），δ：177.3（C-7），169.0（C-9′），149.9（C-4′），147.4（C-7′），147.1（C-3′），128.1（C-1′），123.3（C-6′），116.8（C-5′），115.6（C-8′），115.5（C-2′），75.7（C-1），75.1（C-4）， 73.3（C-3），68.6（C-5），41.9（C-6），37.0（C-2）。

以上数据与文献[5]对照，1H-NMR和13C-NMR数据一致，鉴定化合物3为5-O-咖啡酰基奎宁酸。

2.2.4 化合物4 性状：白色无定形粉末。

ESI-MS，m/z：367 [M-H]-；1H-NMR（CD3OD，500 MHz），δ：7.57（1H，d，J = 16.0 Hz，H-7′），7.00（1H， brs，H-2′），6.90（1H，brd，J = 7.5 Hz，H-6′），6.72（1H，brd，J = 7.5 Hz，H-5′），6.31（1H，d，J = 16.0 Hz，H-8′），4.75（1H，m，H-4），4.21（2H，m，H-3/5），3.69（3H，s，3′-OCH3），1.93-2.15（4H，m，H2-2/6）。

以上数据与文献[6]对照，1H-NMR数据一致，鉴定化合物4为4-O-阿魏酰基奎宁酸。

2.2.5 化合物5 性状：白色无定形粉末。

ESI-MS，m/z：367[M-H]-；1H-NMR（CD3OD，500 MHz），δ：7.47（1H，d，J = 16.0 Hz，H-7′），6.98（1H，brs，H-2′），6.89（1H，brd，J = 8.0 Hz，H-6′），6.72（1H，d，J = 8.0 Hz，H-5′），6.15（1H，d，J = 16.0 Hz，H-8′），5.22（1H，brd，J = 3.5 Hz，H-3），4.08（1H，m，H-5），3.68（1H，m，H-4），3.64（3H，s，3′-OCH3），2.06-2.16（3H，m，H2-2/H-6a），1.95（1H，dd，J = 13.5，6.5 Hz，H-6b）。以上数据与文献[7]对照，1H-NMR数据一致，鉴定化合物5为3-O-阿魏酰基奎宁酸。

3 讨论

本课题对刺五加水提物的化学成分进行了研究，发现其中含有大量的奎宁酸衍生物，此类化合物在抗感染、抗心血管疾病和降糖等方面具有显著的活性[8]，与刺五加的功效、临床应用比较一致。因此，此类化合物可能是刺五加的药效成分之一，对此类化合物的深入研究将有助于人类更深入地理解刺五加的药效物质基础。

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（收稿日期：2013-06-04 本文编辑：袁 成）