菠萝蛋白酶软膏对豚鼠三度烧伤酶溶痂作用的观察

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摘要：目的观察菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度实验性烧伤的酶溶痂作用。方法用豚鼠造成三度烧伤模型，以湿润烧伤膏为阳性对照，菠萝蛋白酶软膏基质为阴性对照，观察菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤的平均脱痂时间，并对脱痂组织进行病理学检查。结果菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤的平均脱痂时间同阳性对照组，明显少于阴性对照组（P＜0.01）。光镜下显示菠萝蛋白酶软膏组的病理结果与阳性对照组相同。结论菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤具有良好的酶溶痂作用。

关键词：菠萝蛋白酶软膏；三度烧伤；酶溶痂

中图分类号：R644文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)11-0027-03

Observation of Enzymatic Debridement Effect of Bromelain Ointment on Guinea Pigs with Third-Degree Burns

SU Huai1, LI Nai-cheng1, HE Yan-li1, ZHANG Tian-min2

(1. Shandong Bausch & Lomb Freda Phar. Co., Ltd., Jinan 250014, China; 2. School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University, Jinan 250012, China)

Abstract：Objective To investigate the enzymatic debridement effect of bromelain ointment on guinea pigs with third-degree burns. Methods The time for debridement of bromelain ointment on guinea pigs with third-degree burns was recorded with ointment base as negative control and moist exposed burn ointment as positive control. The pathological examination of tissue suffering from enzymatic debridement was also conducted. Results The average time for debridement of bromelain ointment on guinea pigs with third-degree burns was consistent with that of moist exposed burn ointment. Both of them were more effective than negative control（P＜0.01）. The pathological sections showed that there was no difference in tissue morphology for bromelain ointment and moist exposed burn ointment. Conclusion Bromelain ointment has a satisfactory enzymatic debridement effect on guinea pigs with third-degree burns.

Key words：bromelain ointment; third-degree burns; enzymatic debridement

菠萝蛋白酶（bromelain）是从凤梨属菠萝中提取的一组巯基蛋白水解酶，商品化菠萝蛋白酶来源于菠萝茎中。此酶对三度烧伤动物模型具有良好的酶溶痂作用，可去除坏死组织，对周围正常组织无影响，无全身毒性。此酶的制剂已在日本等国开发成药品，用于烧伤、褥疮、浅表性溃疡、多种外伤及手术后坏死组织的分解、去除等，目前国内尚无相关产品。我们通过豚鼠三度烧伤模型，观察了自制菠萝蛋白酶软膏的酶溶痂作用。

1材料与仪器

1.1材料

短毛豚鼠40只，普通级，纯白色，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2007-0001，体重290～350 g，雌雄兼用。

菠萝蛋白酶软膏（自制，批号070801，63 000酪蛋白单位/g）；软膏基质：按软膏处方配制，不加药物；湿润烧伤膏（批号20070226，汕头市美宝制药公司）；硫化钠脱毛剂（硫化钠8 g溶入配好的4 %淀粉糊，加至100 mL至8 %）。

自制直径3 cm圆形铜柱，重约1 kg，中心镂空直径5 mm的空洞，一端表面光滑作为烧伤面。

1.2仪器

Olympus BX50显微镜（Olympus公司）。

1.3统计学处理

数据以均数±标准差（ ）表示，使用SPSS 12.0软件，组间差异采用Student t检验。

2方法

2.1动物疾病模型制作

用8 %硫化钠为豚鼠背部脱毛，数分钟后轻轻刮去，清水洗净，使背部脱毛面积达6 cm×6 cm。饲养24 h后开始实验。用3 %戊巴比妥钠麻醉豚鼠，将自制铜柱置入100 ℃沸水中15 min，取出后迅速用纱布擦干烧烫面，无外界压力下置于豚鼠背部一侧，持续12 s，造成三度烧伤。

2.2脱痂试验

造模后随机将豚鼠分为3组，即实验组（自制软膏组）、阳性对照组（湿润烧伤膏组）和阴性对照组（软膏基质组），每组10只。

豚鼠烧伤后用纱布轻轻擦干水渍，先用0.1 %苯扎溴铵液擦洗，再用0.05 %醋酸氯己定液消毒创面，分笼饲养。造模后次日将软膏或基质用棉棒均匀涂抹于烧伤部位结痂的创面，每只豚鼠给药量约300 mg，见新生肉芽组织时停用。每日给药1次并观察烧伤面脱痂及愈合情况，记录每只豚鼠脱痂时间。第15日3组各取豚鼠1只颈椎脱臼处死，取背部烧伤皮肤组织用10 %中尔马林固定，石蜡包埋，苏木精-伊红（HE）染色，镜下观察病理检查结果。

3结果

实验组及阳性对照组平均脱痂时间与阴性对照组有显著性差异（P＜0.01），见表1。

*P＜0.01 vs 阴性对照组

3组烧伤部位脱痂后镜下病理检查显示，实验组与阳性对照组未见明显异常，创面愈合良好，皮肤再生组织已较明显，未见炎细胞浸润；阴性对照组创面无愈合，皮肤角质层消失，颗粒层变薄，充血、出血和大量炎细胞浸润，表明开始感染。见图1。

A：实验组（HE×100）；B：阳性对照组（HE×100）；C：阴性对照组（HE×100）

图1豚鼠脱痂后病理检查镜下所示

4讨论

Rosenberg等[1]临床上应用菠萝蛋白酶治疗烧伤脱痂的结果表明，它是一种安全有效的脱痂药物。Stanley [2]认为脱痂作用包括溶解痂皮，溶解痂皮与下面正常组织的中层组织。Ahle等[3]将菠萝蛋白酶用于冻伤的痂皮，但痂皮却没有明显的变化。皮肤干重的70 ％～80 ％是胶原蛋白，胶原蛋白加热后变性成明胶。菠萝蛋白酶对明胶有较好的酶解活性，因此，菠萝蛋白酶的脱痂作用主要是酶解明胶。菠萝蛋白酶活性受浓度、温度及pH值的影响，用药时将药物涂抹于痂皮内侧边缘并用纱布覆盖，更有利于药效的发挥，无纱布固定可影响脱痂速度。

观察脱痂药物的作用与创面愈合，常选用与人皮肤组织结构相似的猪、狗和豚鼠的皮肤。我们用豚鼠形成三度烧伤模型，烧伤面积和深度较易控制，重复性高，是标准的烧伤模型制作方法[4]。实验动物烧伤后当日皮肤外观与正常皮肤无明显差别，第3日才见痂皮明显形成。Stanley[2]用大鼠进行脱痂实验，证明大鼠脱痂时间受年龄及体重影响较大，故宜选择年龄及体重相近的动物。

陈世铭等[5]将菠萝蛋白酶用凡士林配成20 %软膏用于脱痂治疗芥子气损伤的深二度烧伤家兔，平均脱痂时间21.3 h，5 %软膏的平均脱痂时间为49.3 h。Levine等[6]以猪为动物模型做了类似实验，结果表明，2.5 %菠萝蛋白酶软膏为烧伤模型脱痂的时间平均为11.6 d，基质为20 d，高含量的菠萝蛋白酶（50 %软膏）可迅速脱痂，达到1 d内完全脱痂，且对正常组织无影响，无其它不良反应。我们制备的菠萝蛋白酶软膏含量6.25 ％，是参考日本菠萝蛋白酶软膏含量设计的。高含量的药物可加速脱痂，且未发现不良反应，因此有必要研究较高含量的制剂。

参考文献

[1]Rosenberg L, Lapid O, Bogdanov-Berezovsky A, et al. Safety and efficacy of a proteolytic enzyme for enzymatic burn debridement: a preliminary report[J]. Burns, 2004, 30(8): 843-850.

[2]Stanley M L. Chemical debridement of burns[J]. Ann Surg, 1974, 180(4): 670-704.

[3]Ahle N W, Hamlet M P. Enzymatic frostbite eschar debridement by bromelain[J]. Ann Emerg Med, 1987, 16(9):199-201.

[4]刘毅，陈璧. 烧（烫）伤动物模型的建立[J]. 西北国防医学杂志，1999，20（2）：126-128.

[5]世铭，邢善田，李文江. 菠萝蛋白酶脱痂作用的研究[J]. 医药工业，1985，16（9）：405-408.

[6]Levine N, Seifter E, Connerton C, et al. Debridement of experimental skin burns of pigs with bromelain, a pineapple-stem enzyme[J]. Plast Reconstr Surg, 1973, 52(4): 413-424.

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