枳壳健胃颗粒的质量控制研究

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摘要：目的 建立枳壳健胃颗粒的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对枳壳健胃颗粒中枳壳、延胡索、连翘进行定性鉴别，采用薄层色谱扫描法测定君药延胡索有效成分延胡索乙素含量。结果 薄层色谱鉴别方法简便，专属性强。延胡索乙素在0.055～0.330 ?g范围内呈良好的线性关系，r=0.996 92，平均回收率为98.02%，RSD=1.85%（n=5）。结论 所建立的方法可准确地进行定量检测，可用于该制剂的质量控制。

关键词：枳壳健胃颗粒；延胡索乙素；薄层色谱；含量测定

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）01-0054-03

枳壳健胃颗粒为安徽中医学院第一附属医院消化内科的经验方，由延胡索、枳壳、连翘等9味中药组成，具有疏肝清热、理气止痛的作用，主要用于治疗肝胃郁热、胃脘疼痛，已在临床使用20年。延胡索乙素为君药延胡索的主要有效成分之一，具有较强的镇痛、解痉等作用[1-2]。为有效控制该制剂质量，本试验对方中枳壳、延胡索、连翘进行薄层鉴别研究，并采用薄层色谱扫描法对延胡索乙素的含量进行测定，现报道如下。

1 仪器与试药

CAMAGⅢ型薄层色谱扫描仪（瑞士CAMAG公司），CAMAG层析缸（瑞士CAMAG公司），CAMAG紫外光灯（瑞士CAMAG公司），NANOMAT4点样仪（瑞士CAMAG公司），CAMAG TLC PLATE HEATER Ⅲ型加热板（瑞士CAMAG公司），定量毛细管（瑞士CAMAG公司），SK8200H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），硅胶G薄层板（青岛海洋化工集团），SARTORIUS BP211电子天平，CANON数码照相机。

延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110726-200409）；延胡索、连翘、枳壳对照药材（中国药品生物制品检定所，批号分别为120928-200604、120908-200711、120981-200803）；枳壳健胃颗粒（安徽中医学院第一附属医院生产，批号20110417、20110712、20111125）；所用试剂均为

分析纯。

2 定性鉴别

2.1 枳壳

取本品5 g，加甲醇10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取枳壳药材2 g，同法制得对照药材溶液。按处方量自制成缺枳壳的成药，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB），吸取上述溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氧化铝乙醇溶液，105 ℃加热5 min，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。

2.2 延胡索

取本品5 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。按处方量自制成缺延胡索的成药，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB），吸取上述溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸内3 min，取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。

2.3 连翘

取本品5 g，加乙醇50 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。按处方量自制成缺连翘的成药，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB），吸取上述溶液各4 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸（17∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。

3 含量测定

3.1 对照品溶液的制备

精密称取置P2O5干燥器中24 h的延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.11 mg的溶液，作为对照品溶液[3]。

3.2 供试品的制备

取本品10 g，置具塞锥形瓶中，加甲醇100 mL，超声处理30 min（频率53 kHz，功率150 W），再称定质量，补重，摇匀，滤过，精密吸取续滤液50 mL，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加浓氨试液调至碱性，置分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，转移至容量瓶中，作为供试品溶液[4]。

3.3 波长扫描

供试品溶液、对照品溶液经点样展开后，参考相关文献资料[5]，首先在330 nm下对延胡索乙素进行扫描，然后对其斑点进行定位，在200～700 nm内对延胡索乙素进行波长扫描，在343 nm延胡索乙素有最大吸收，在650 nm延胡索乙素几乎无吸收，故选用λS=343 nm，λR=650 nm。见图1。

3.4 阴性对照溶液的制备

根据处方组成，取除延胡索外的其余药材，按工艺要求制成缺延胡索的阴性制剂，按“3.2”项下方法制得阴性对照溶液。

3.5 色谱条件

薄层板为硅胶G板；展开剂为甲苯-丙酮（9∶2），预饱和30 min，碘缸。λS=343 nm，λR=650 nm。

3.6 薄层专属性扫描

吸取上述供试品溶液2 ?L、对照品溶液1 ?L及阴性对照品溶液2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，按“3.5”项下色谱条件操作显色后，置薄层色谱仪中进行扫描。分别对对照品、供试品和阴性对照色谱从原点到溶剂前沿进行色谱扫描，结果供试品色谱图中在与延胡索乙素色谱相应的位置上，出现相应的吸收峰，而阴性对照在与延胡索乙素相应的位置上无相应的吸收峰。

3.7 线性范围考察

精密吸取延胡索乙素对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，按“3.5”项下色谱条件展开后进行扫描，以对照品量为横坐标，吸收峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，试验数据经直线回归，得回归方程Y=29.826X+1 162.669（r=0.996 92）。结果表明，延胡索乙素在0.055～0.330 ?g范围内峰面积与对照品量呈良好的线性关系。

3.8 稳定性试验

吸取供试品溶液，点于硅胶G薄层板上，依法展开，显色后，依法测定峰面积值，并每隔1 h测定一次峰面积，结果表明：供试品峰面积值在6 h内基本稳定，RSD=1.85%（n=7）。

3.9 精密度试验

吸取同一对照品溶液1 ?L，点于同一硅胶G薄层板上，依法测定峰面积值，结果平均峰面积为5 406.83，RSD=1.32%（n=6）。

3.10 重复性试验

取同一批号样品6份（批号20110417），分别依法制成供试品溶液，测定延胡索乙素的含量，结果平均含量为0.011 9 mg/g， RSD=0.75%（n=6）。

3.11 加样回收率试验

取已知延胡索乙素含量0.012 mg/g的样品（批号20110417）5份，每份精密称取5 g，分别精密加入延胡索乙素对照品溶液（0.11 mg/mL）0.6 mL，按“3.2”项下方法制成供试品溶液，测定其延胡索乙素的的含量，计算回收率。结果平均回收率为98.02%，RSD=1.85%（n=5）。见表1。

3.12 样品含量测定

取本品样品3批，批号分别为20110417、20110712、20111125，依法测得延胡索乙素的含量为0.012、0.011、0.011 mg/g。

4 讨论

为了考察提取溶媒、提取方法及提取时间在本制剂中对延胡索乙素提取率的影响，本试验选用甲醇、乙醇（95%、70%）、水为提取溶媒进行比较，结果表明，以甲醇为提取溶媒时所测定的延胡索乙素含量值最大，故确定延胡索乙素的提取溶媒为甲醇；

提取方法采用超声15、30、45 min及回流1、2 h提取进行比较，结果回流2 h和超声30 min提取所得延胡索乙素含量较高，故综合各因素，选择超声处理30 min为供试品的提取方法。

2010年版《中华人民共和国药典》（一部）延胡索乙素的含量测定方法为高效液相色谱法，然而实际工作中，我们发现延胡索乙素含量测定的薄层扫描法操作更为简单、准确，且重复性好，故制定本品质量标准时，采用了薄层色谱扫描法，结果提示可作为本制剂的质量控制方法。

参考文献：

[1] 张晓丽，曲扬，侯家鸣，等.延胡索的化学成分[J].沈阳药科大学学报， 2008，25（7）：537-540.

[2] 贺凯，高建莉，赵光树.延胡索化学成分、药理作用及质量控制研究进展[J].中草药，2007，38（12）：1909-1912.

[3] 魏良兵，孟楣，程，等.不同醋炙延胡索中延胡索乙素的含量变化[J].