RP-HPLC法测定藏成药智托洁白丸中没食子酸的含量
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摘 要:目的:研究建立藏成药智托洁白丸中没食子酸的含量测定方法,以更好地控制该药品质量,保证人民用药安全、有效。方法:采用PhenomenexC18色谱柱,以甲醇-冰醋酸-N,N二甲基甲酰胺-水(2:0.5:20:90)为流动相,在波长275nm下对药品中没食子酸进行含量测定。结果:回收率为97.0%,RSD为1.3% 结论:HPLC法测定没食子酸含量可以更好地控制该药品的内在质量。
关键词:HPLC;没食子酸;智托洁白丸
智托洁白丸是一个藏药验方,主要用于慢性胃炎,“培根木布”,胃痛,呕吐酸水,咳嗽,音哑,胃部壅寒,呼吸不畅。资料显示没食子酸多用弱酸性流动相,然而,经试验效果不是很好。此次笔者改用离子对试剂测定该产品中没食子酸含量,方法简便、快捷、准确度高,专属性好。方法学研究及分析研究数据如下:
1仪器与试药
Waters2487型高效液相色谱仪;WatersC18色谱柱;Millennium32色谱工作站。超声波清洗机(功率:220V,50kHz)没石子酸对照品:中国药品生物制品检定所提供(批号:110822-200406)甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯;水为重蒸水。
2方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验
WatersC18柱(250×4.6mm)色谱柱;甲醇-冰醋酸-N,N二甲基甲酰胺-水(2:0.5:20:90)为流动相;检测波长为275nm;柱温为30℃;流速为1ml/min。灵敏度为0.4AU。结果表明没食子酸对照品和样品中其它组分可基线分离,没食子酸与其它色谱峰的分离度大于1.5,按没石子酸峰计算,理论板数为5000。拖尾因子为1.0。
2.2对照品溶液和供试品溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备
取没食子酸对照品适量,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。
2.2.2供试品溶液的制备
取本品装量差异项下的内容物,混匀,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,称定重量,超声处理20分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3方法学考察
2.3.1提取方法考察
对样品分别以回流提取、超声进行提取,结果以超声提取效果最好,可消除对所有待测组分的干扰并且含量(以没食子酸计)较高(结果见表1)。
2.3.2 测定波长的选择
取对照品溶液和供试品溶液分别在190nm～400nm的波长内测吸光度,结果在275nm处有最大吸收,故选此波长为测定波长。
2.3.3线性关系的考察
精密称取没食子酸对照品6.35mg,置25ml量瓶中,用50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。(没食子酸含量为0.254mg/ml),分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10μl注入液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标(Y),进样量为横坐标(X),绘制坐标曲线。即得。结果见表1。没食子酸在:0.508～2.54μg,范围内呈良好的线形关系。
回归方程为:Y=762481X-36273.1 r=0.999 (n=5)。
2.3.4 精密度试验
精密吸取没食子酸对照品溶液10?l,重复进样5次,测得没食子酸峰面积RSD为0.56%。表明仪器进样精密度良好(结果见表3)。
2.3.5稳定性试验
精密吸取样品(批号20051224)溶液10?L,分别于2,6,8,10,12小时进样测定,测定没食子酸的含量,结果RSD为1.3%,即样品溶液在12小时内稳定(结果见表4)。
2.3.6重现性试验
取同批样品(批号20051008)5份,按【含量测定】项下色谱条件测定,测定含量RSD为0.89%,表明该方法的重现性良好(结果见表5)。
2.3.7回收率试验
取已知含量的样品5份,精密加入没石子酸对照品溶液10ml,按样品制备方法和测试条件进行测定,计算得平均回收率为97.0%,RSD为1.3%(实验结果见表6)。
2.3.8阴性干扰实验
按照处方比例,称取除去诃子的阴性样品,按样品制备方法和测试条件进行测定,结果阴性样品在与对照品色谱峰相应的位置上无吸收峰。说明处方中其它成分对测定结果无影响,即阴性无干扰,专属性好。
2.4样品测定
取本品装量差异项下的内容物,混匀,取1.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,称定重量,超声处理20分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
吸取10?l进样,测定,结果3批样品中没食子酸的平均含量2.1mg/丸,RSD=1.5%(结果见表7)。
参考资料
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准[S].藏药第一册.1995.140.
[2] 郑俊华.生药学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,1999.279.