基因多态性与急性白血病的相关性研究
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0 引言
p2x7基因位于12号染色体，有13个外显子，其编码产物是一种选择性离子通道型嘌呤能受体，在造血细胞及免疫细胞中介导atp诱导的细胞凋亡。发生在p2x7基因外显子13的单核苷酸多态性可以导致p2x7受体功能明显改变，其杂合性改变可使p2x7受体功能下降50%，而纯合性改变可使其功能完全丧失[1]。为探讨p2x7基因1513 ac多态性在急性白血病中的意义，我们对24例急性白血病患者及42例正常对照进行了检测及分析。
1 材料与方法
1.1 病例 急性白血病患者24例，其中aml 15例，all 9例；男14例，女10例，中位年龄31岁。正常对照42例，男23例，女19例，中位年龄33岁。患者标本取自骨髓2毫升，对照者标本取自外周血5毫升。
1．2 方法
1．2．1 dna提取 常规酚/氯仿法提取基因组dna。
1．2．2 pcr扩增基因组dna
引物序列为：上游引物5’?actcctagatccagggatagcc?3’，下游引物5’ ?tcactcttcggaaactcttt
cc?3’。每份样本反应体系为25μl，组成如下：10×缓冲液2.5μl，4×dntp (20mm) 0.25μl，上游引物及下游引物各0.5μm，mgcl2(50mm) 0.75μl，ampli taq gold dna聚合酶（applied biosystem）1.25u, dna 25ng。pcr条件为：预变性95℃ 5分钟； 变性94℃ 1分钟，退火62℃ 1分钟，延伸72℃ 1分钟，33个循环；最后72℃延伸10分钟。
1．2．3 测序
应用bigdye terminator sequencing kit（abi，usa）及abi 3100型dna测序仪进行双向dna测序。
1．3 统计学分析 fisher’s exact test。
2 结果
测序结果见图1所示。3例白血病患者基因型为a/c，其中aml 2例，all 1例。患者与正常对照c等位基因频率的差异有显著性（p=0.046), 见表1。
图1 dna测序结果：从上至下分别
为a/a、a/c及c/c基因型
3 讨论
p2x7基因的外显子12及13编码一个长达240个氨基酸的细胞内c末端，这一结构与其功能密切相关。一般认为p2x7受体可介导细胞凋亡，但也有学者发现该受体同时具有诱导凋亡及促进增殖两种作用[1,2]。adinolfi等[3]报道p2x7受体在进展性cll（chronic lymphocytic leukemia, 慢性淋巴细胞白血病）的表达明显高于惰性cll，提示p2x7在高表达时有促进细胞增殖的作用。wiley等[4]报道p2x7基因1513ac多态性在cll患者中的阳性率是正常对照的3倍，提示c等位基因可能与cll的发生有密切关系。但thunberg等[5]发现cll患者该snp阳性率低于正常对照，且阳性者的生存期较阴性者显著延长，提示c等位基因是预后良好的因素。我们的研究结果显示在这一组急性白血病患者中p2x7基因1513ac阳性率明显低于正常对照，与thunberg的研究结果相似。本研究结果提示在急性白血病中p2x7受体可能主要发挥促进细胞增殖作用，而p2x7基因1513ac多态性可能与急性白血病的发生呈负相关。
【参考文献】
［1］ gu bj，zhang w，worthington ra，et al. a glu?496 to ala polymorphism leads to loss of function of the human p2x7 receptor［j］. j biol chem，2001，276（14）：11135?11142.
［2］ baricordi or，melchiorri l，adinolfi e，et al. increased proliferation rate of lymphoid cells transfected with the p2x(7) atp receptor［j］. j biol chem，1999，274（47）：33206?33208.
［3］ adinolfi e，melchiorri l，falzoni s，et al. p2x7 receptor expression in evolutive and indolent forms of chronic b lymphocytic leukemia［j］. blood，2002，99（2）：706?708.
［4］ wiley js，dao-ung lp，gu bj，et al. a loss-of-function polymorphic mutation in the cytolytic p2x7 receptor gene and chronic lymphocytic leukaemia: a molecular study［j］. lancet，2002，359（9312），1114?1119.
［5］ thunberg u，tobin g，johnson，et al. polymorphism in the p2x7 receptor gene and survival in chronic lymphocytic leukaemia［j］. lancet，2002，360（9349）：1935?1939.