复方紫草油的制备工艺与质量标准研究
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[摘要] 目的：验证复方紫草油的制备工艺，提高质量标准控制水平。方法：以左旋紫草素的含量为指标，考察制备工艺的合理性。采用薄层色谱法对白芷、忍冬藤、冰片进行鉴别，用高效液相色谱法测定左旋紫草素的含量。结果：制备工艺过程中左旋紫草素稳定，原制备工艺合理；白芷、忍冬藤、冰片的鉴别斑点清晰，阴性无干扰；左旋紫草素测定方法经方法学验证，结果可行。结论：结果表明，制备工艺合理，新建立的质量标准可行。
[关键词] 复方紫草油；制备工艺；质量研究；左旋紫草素
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）07（b）-041-03
Study on preparation technology and quality standard of Compound Radix Arnebiae Oil
CHEN Pei-wen, LIU Xiang-rong, ZHANG Ying
(Jiangxi People's Hospital, Nanchang 330006,China)
[Abstract] Objective: To study the preparation technology of Compound Radix Arnebiae Oil and its feasibility, and to improve the quality standard level. Methods: The preparation technology was studied by determining the stability of L-shikonin during the time of preparation. Angelica dahurica, Honeysuckle stem, Borneol in Compound Radix Arnebiae Oil were identified by TLC. The content of L-shikonin was determined by HPLC. Results: L-shikonin was stable during the time of preparation. The preparation technology was feasible. The dots of TLC were clear, separation degree was good, and specific attribute was strong. The negative control showed no interference.The HPLC method was able to determine the content of L-shikonin. Conclusion: Preparation technology is feasible, and the quality of Compound Radix Arnebiae Oil can be controlled.
[Key words] Compound Radix Arnebiae Oil;Preparation technology;Quality standard; L-shikonin
复方紫草油（烧伤油）系我院自制制剂，由紫草、忍冬藤、冰片、白芷、石蜡、香油等药材煎制而成，临床应用20多年，本品对各种烧伤疗效果确切。虽然目前有关紫草油的制备工艺和质量研究有很多报道，但本院处方与文献报道又有较大不同[1,2]，而且文献报道的质量研究不全面[3,4]。为确保制剂质量，有必要对本院制剂的制备工艺进行验证，对质量标准进行系统全面研究。现报道如下：
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津系列高效液相色谱仪（包括LC-2010AHT，Solution工作站）；Sartorius BP 211D电子天平（十万分之一）。
1.2 试药
白芷（中检所，120945-200406），忍冬藤（中检所，121069-200502），冰片（中检所，110743-200504 ），左旋紫草素（中检所，110769-200506，鉴别用，经标化含量为99.7%）。其余试剂为分析纯。
2 制备工艺验证
2.1 制备工艺
先取香油，用文火加热至130℃，加入白芷、紫草、忍冬藤，加热到150℃维持0.5 h，待白芷炸成焦黄色为度，趁热用多层纱布过滤，加入切片石蜡搅溶，冷却到50℃，加入冰片搅匀即可分装备用。
2.2 考察指标选择
紫草含色素成分萘醌类化合物。紫草根含紫草素、乙酰紫草醌、紫草烷、异丁酰紫草醌、p-二甲基丙烯酰紫草醌、p-羟基异戊酰紫草醌、3,4-二甲基戊烯-3-酰基紫草醌。具有抗感染、抗菌、解热等作用[5]。由于制备工艺的温度为150℃，为了考察制备工艺的合理性，以其中的主要成分左旋紫草素为考察指标对制备工艺进行验证。
2.3 方法
取处方量药材，分别测定加热前和加热后不同时间的左旋紫草素的含量，比较左旋紫草素的含量变化。
2.4 结果
从表1可以看出，加热前后左旋紫草素的含量基本没有变化，说明左旋紫草素在此温度下加热30 min基本稳定。但加热到1 h含量则显著减少。因此原工艺的加热时间基本合理。
3 质量标准研究
3.1 白芷的薄层鉴别
3.1.1 供试品溶液的制备取本品30 ml，加乙醚30 ml，振摇提取3次，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1 ml 使溶解，作为供试品溶液。
3.1.2 对照药材溶液的制备另取白芷对照药材，取本品粉末0.5 g，加乙醚10 ml，浸泡1 h，时时振摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加乙酸乙酯1 ml 使溶解，作为对照药材溶液。
3.1.3 阴性对照溶液的制备取不含白芷的紫草油，按上述方法操作，滤液作为阴性对照溶液。
3.1.4 实验方法照薄层色谱法（《中国药典》2005 年版一部附录ⅠB）试验，吸取上述两种溶液各4 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以石油醚（30~60℃）-乙醚(3∶2) 为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm) 下检视。
3.1.5 实验结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点（图1）。
图1 白芷薄层色谱图
（1为阴性溶液，2为对照药材或对照品溶液，3为供试品溶液）
3.2 忍冬藤的薄层色谱鉴别
3.2.1 供试品溶液的制备取本品30 ml，加乙酸乙酯30 ml，振摇提取3次，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至约2 ml，作为供试品溶液。
3.2.2 对照药材溶液的制备另忍冬藤对照药材，加乙酸乙酯30 ml，超声，滤过，滤液浓缩至约2 ml，作为供试品溶液。
3.2.3 阴性对照溶液的制备取不含忍冬藤的紫草油，按上述方法操作，作为阴性对照溶液。
3.2.4 实验方法照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅠB） 试验，吸取上述两种溶液各2~4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。
3.2.5实验结果供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点 （图2）。
3.3 冰片的薄层色谱鉴别
3.3.1 供试品溶液的制备取紫草油100 ml，加乙醇50 ml，超声处理10 min，于分液漏斗中静置分层，取乙醇层滤过，蒸干，加乙醇溶解至2 ml，作为供试品溶液。
3.3.2 对照品溶液的制备取冰片对照品，加乙醇制成每1毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。
3.3.3 阴性对照溶液的制备取不含冰片的紫草油，按上述方法操作，作为阴性对照溶液。
3.3.4 实验方法照薄层色谱法（《中国药典》2005 年版一部附录ⅠB）试验，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各5 ml，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(17∶3) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5% 香草醛硫酸溶液。
3.3.5 实验结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液无此特征(图3)。
4 含量测定
4.1 色谱条件与系统适用性
Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；甲醇-0.3%磷酸溶液(85∶15)为流动相；流速：1.0 ml/min；检测波长为516 nm；柱温为25℃。
4.2 对照品溶液的配制
精密称取左旋紫草素对照品，加甲醇适量溶解并稀释成20 μg/ml的溶液。
4.3 供试品溶液的制备
精密移取紫草油膏10 ml，置分液漏斗中，加0.25 mol/L氢氧化钠溶液提取3 次，每次20 ml，至萃取液呈无色。合并碱液，加0.5 mol/L硫酸溶液调pH 值至5.0，加氯仿提取4次(30，30，20，20 ml)，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度。
4.4 方法学验证
4.4.1 线性关系精密吸取浓度为208.4 μg/ml左旋紫草素对照品溶液1，2，3，4，5 ml分别置于25 ml 的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别吸取上述溶液20 μl，注入液相色谱中，测定色谱峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得回归方程：Y=27 856.68 X+256.22(r=0.999 8)。进样量在0.166~0.834 μg 间线性关系良好。
4.4.2 回收率试验采用加样回收试验，取已知含量的紫草油（左旋紫草素含量为64.3 μg/ml）5 ml精密吸取左旋紫草素对照品溶液(68.1 μg/ml)5 ml，按“4.2”项下方法处理，依法测定。结果见表2。
4.4.3 精密度考察吸取浓度为25.008 μg/ml的对照品溶液20 μl，连续测定6 次，结果6次峰面积的RSD为0.52%。
4.4.4 稳定性考察取制备好的供试品溶液，分别于1、3、6、9、12 h进样，结果供试品溶液12 h内稳定。RSD为0.67%。
5 讨论
本文通过对加热过程左旋紫草素的含量考察，结果表明，其在制备工艺过程中稳定，但受热时间不宜过长。
虽然对紫草油的制备工艺和质量研究有很多报道，但本文首次对制备工艺过程中的左旋紫草素的含量变化进行了研究，同时也首次对质量进行了系统研究。
本文所建立的白芷、忍冬藤、冰片的鉴别斑点清晰，阴性无干扰；左旋紫草素测定方法经方法学验证，结果表明线性关系、回收率、精密度、稳定性好，方法可行。
[参考文献]
[1]陈秀琳.紫草油的薄层色谱鉴别[J].海峡药学，2005，17（3)：47-48.
[2]刘芳，王小平.薄层扫描法测定烧伤膏中左旋紫草素的含量[J].基层中药杂志,2001,15(2):21-22.
[3]伍毅.HPLC法测定紫草油中左旋紫草素的含量[J].中药新药与临床药理,2005,16(1):66-68.
[4]程东升，唐启令，姜霁芳.复方紫草油的制备与质量控制[J].中国药业,2004,13(7):50-51.
[5]严松柏,谈献和,胡玉涛. 紫草的研究进展[J].时珍国医国药, 2003, 14(2):103-105.
（收稿日期：2008-02-18）
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