结核分枝杆菌金胺O荧光和萋―尼染色显微镜镜检结果比较

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萋一尼染色法和金胺O荧光染色法[1]是痰涂片镜检常用的二种染色方法。萋一尼染色法结果较为准确且因为其操作简单、费用低、速度快，1 h可以报告结果而一直延用至今，但阳性检出率较低，无法满足临床需求。金胺O荧光染色法需要荧光显微镜，但传统的荧光显微镜的检测成本过高，一直没有普及，发光二极管荧光显微镜很好解决了这一问题，近几年逐渐广泛应用于结核分枝杆菌的痰涂片镜检。为了解二种检验方法对痰标本结核分枝杆菌的检出情况，我们对就诊的可疑肺结核患者的痰标本进行了二种方法的对比分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1试剂和器材 金胺O荧光染色液和萋-尼染色液均按《结核病诊断实验室检验规程》[1]进行配制；使用德国蔡司CX-21发光二极管全冷光源荧光显微镜及奥林巴斯CH30生物显微镜。

1.2检测标本 痰标本来自2014年1月～2015年12月丹阳市人民医院结核病门诊就诊的可疑肺结核患者，全部为初诊患者。本实验共收集432例患者的痰标本1296份。每位患者收集3份深咯痰标本，分别为清晨痰、夜间痰和即时痰。标本量为3～5 ml，每份痰标本涂抹2张玻片，分别进行萋-尼染色和金胺O荧光染色。

1.3涂片 用竹签挑取痰标本的脓样、血样或干酪样部分约0.05～0.1 ml于玻片正面的右侧2/3中央处，均匀涂抹成宽1.0 cm，长2.0 cm的椭圆形痰膜，厚薄适中，室温下自然干燥。按照《结核病诊断实验室检验规程》[1]进行初染、脱色、复染。

1.4镜检及结果判定 萋-尼染色用普通光学显微镜镜检，10倍目镜、100倍油镜观察。在淡蓝色背景下，结核分枝杆菌呈红色，其他细菌和细胞呈蓝色。金胺O荧光染色用发光二极管显微镜，10倍目镜、40倍物镜观察痰涂片，在暗视野背景下，结核分枝杆菌呈现橘黄色荧光，呈杆状或短棒状。萋-尼染色镜检结果报告标准为：抗酸杆菌阴性：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌；报告抗酸杆菌菌数：1～8条/300视野；抗酸杆菌阳性（1+）：3～9条/100视野；抗酸杆菌阳性（2+）：1～9条/10视野；抗酸杆菌阳性（3+）：1～9条/视野；抗酸杆菌阳性（4+）：≥10条/每视野。金胺O荧光染色镜检结果报告标准为：金胺O荧光染色抗酸杆菌阴性：0条/50视野；金胺O荧光染色报告抗酸杆菌菌数：1～9条/50视野；金胺O荧光染色抗酸杆菌阳性（1+）：10～99条/50视野；荧光染色抗酸杆菌阳性（2+）：1～9条/视野；金胺O荧光染色抗酸杆菌阳性（3+）：10～99条/视野；金胺O荧光染色抗酸杆菌阳性（4+）：≥100条/每视野。

1.5统计学方法 采用STATA 10.0统计软件对数据进行χ2检验，P

2 结果

金胺O荧光染色组432例可疑结核病患者的痰标本中检出138例阳性，阳性率为31.9%；萋-尼组检出80例阳性，阳性率为18.5%；χ2=7.21，P

3 讨论

金胺O荧光染色方法染色镜检时抗酸杆菌在暗视野背景下发出橘黄色荧光，黑色背景与抗酸杆菌对比鲜明，非常明显容易发现，金胺O荧光染色染色读片放大倍数为400倍（40倍物镜，10倍目镜），所观察的视野面积大，故它的灵敏度比萋-尼染色方法普通显微镜镜检高[2]。本研究结果显示，金胺O荧光染色组检出阳性率为31.9%，萋-尼组为18.5%，χ2=7.21，P

参考文献：

[1]中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检验规程[M].北京：中国教育文化出版社，2006：13-29.

[2]尚美.刘冠，赵立平，等.发光二极管荧光显微镜实验室诊断效果评价[J].中国防痨杂志，2010，32（5）：275-278.

[3]陈燕梅，钱明，江勇，等.荧光染色发光二极管显微镜检测结核分枝杆菌的效果分析[J].中国防痨杂志，2011，33（9）：585-587.

[4]申长海.荧光染色在结核病细菌学检验中的应用[J].河南预防医学杂志，2002，13（1）：7-8.

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