香菇母种复壮及保存技术要点分析

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摘 要：利用组织分离培养菌种技术科学，规范地对香菇优良品种进行复壮、保藏，简单易行，取材简便，成功率高，可延长优良品种的使用年限，发挥品种优势，保障食用菌生产的顺利进行。

关键词：香菇；母种；培养基

中图分类号：S646 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20150501027

在香菇的日常生产中，菌种经过多次传代转接，优良的种性极易产生退化甚至丧失，常会出现菇体变小、产量降低、抗性下降等现象，菌种的优劣不仅影响产品的质量，还会直接影响香菇的产量。为了解决生产中菌种退化的问题，有效地提高香菇生产水平，本实验采用组织分离法复壮、保藏菌种，能够有效防止菌种退化、老化、减少变异。

1 培养基的制作

1.1 PDA配方

马铃薯200g，琼脂18～20g，葡萄糖20g，水1000mL，

pH值自然。

1.2 配制方法

将去皮马铃薯，挖除芽眼后洗净称200g，切成5mm

×5mm的小丁（不要切得过小，否则煮的过程中容易破碎），加入1000mL水，煮沸20min，不要搅动过多，避免薯块粉碎，待薯块酥而不烂时停火，用4～6层纱布过滤。将滤液用水定容至1000mL，加入18～20g琼脂，文火加热，用玻璃棒搅拌至琼脂溶化；再加入20g葡萄糖搅拌，使其充分溶解，混合均匀，最后定容为1000mL。

1.3 装管、灭菌

用20mL的注射器将培养基趁热分装于试管中，约占试管总长的1/5～1/4，一般18mm×180mm的试管约装8mL左右，注意不要使培养基粘到试管口的壁上。装管后，用干净的沙布将试管口擦抹干净，塞上棉塞，棉塞松紧适当。

7～10支为一捆，用牛皮纸或双层报纸包好试管棉塞端，防止在高压过程中潮湿棉塞。将包好的试管竖直放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌。按照高压蒸汽灭菌锅的操作规程进行灭菌，一般123℃灭菌30min。灭菌后，待压力降到“0”时打开锅盖。锅内温度降到50℃左右，竖直取出试管。

1.4 摆斜面

在水平的台面或桌面上摆放一些厚度适合的方木条，将取出的试管逐捆口向上斜放在方木条上，使试管内培养基形成斜面，长度约为试管长的1/2～2/3，待冷却凝固后即成斜面培养基。

1.5 灭菌效果测定

将斜面培养基放在28～30℃环境下，空白培养24～48h，检查没有杂菌污染后再接种使用，进行培养基灭菌效果测定，可以避免造成损失。

2 选取种菇

在栽培菇房，选择高产、稳产、适应性强的优良品种，从第1批出菇8分成熟的菇体中筛选，选生长发育良好、形态圆正、颜色正常、菌盖肥厚、菌柄短粗、无病虫害侵染的优质的单朵菇，置于无菌塑料袋内备用。

3 组织分离

将刚采集的种菇切除根部菇柄，用清水冲洗干净，放入经过消毒灭菌的接种箱或超净工作台中，浸泡于75%的酒中1～2min，同时上下翻动。取出后再用无菌水冲洗2～3次，用无菌纱布或脱脂棉吸干表面水分。

在酒精灯无菌区内，用消过毒的镊子和解剖刀将菇体沿菌柄迅速掰开，在菇柄与菌盖交界处的菌肉上间隔 0.5～1.0cm横向切两刀，再纵向切几刀，用无菌镊子夹取火柴头大小的菌肉块，移植到准备好的PDA斜面培养基上，略嵌入培养基质内，迅速塞好棉塞。全部完成之后，贴好标签。

4 母种的培养

将分离接种好的母种试管7～10支1捆，将棉塞端用报纸包好，置于25℃的恒温箱内培养，每天检查菌种的萌发与生长情况，3～5d左右组织块周围长出白色菌丝，选择洁白粗壮、整齐一致的菌丝体移接到新的培养基上，再经过15d左右的恒温培养，菌丝体长满试管后即为纯菌种，留作母种。可以进一步扩繁原种、栽培种及进行出菇试验。

5 母种的保藏

将子粒饱满、新鲜、无病虫害的小麦粒，用清水浸泡12h，漂洗干净，稍滤干后装入接种瓶，装至瓶肩处即可，用双层封口膜封口，

放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，一般126℃灭菌2h。在无菌接种箱或超净工作台中，将母种接入冷却的麦粒培养基内，在25℃的恒温箱内培养，菌丝长满培养基后放入干燥器干燥1个月，放入4℃的冰箱内保藏，可保藏1a以上。使用时，在无菌条件下，向每个PDA培养基上接种1粒麦粒，培养至菌丝长满斜面即可进行正常的生产。

6 结 语

利用组织分离培养技术对香菇优良品种进行复壮、提纯，方法简单易行，取材简便，成功率高，可延长优良品种的使用年限，发挥品种优势，保障食用菌生产的顺利进行。

作者简介：谢丽（1969-）女，白族，本科，高级农艺师，研究方向：农学。