肠道致病菌分离鉴定的实验教学质量评价
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中图分类号：R378.2
文献标志码：B
文章编号：1008-2409(2012)03-0376-03
肠道致病菌的分离与鉴定是临床检验专业学生必须掌握的一项技术，是教学大纲要求熟练掌握的重要内容。该实验技术程序较为复杂，学生不容易掌握。因此，在实验教学时必须充分准备，科学设计，严格操作，客观评价。为此，本教研室建立了一套实验与考核方法，并尝试制定考核标准，促进肠道致病菌实验教学质量的不断提高。
1 实验材料与试剂
1.1实验材料
正常粪便+伤寒沙门氏菌为1号标本；正常粪便+志贺氏菌为2号标本。
1.2培养基
SS琼脂、麦康凯琼脂、KIA培养基、MIU培养基、赖氨酸与鸟氨酸脱羧基培养基、甘露醇微量发酵管。
1.3试剂
革兰氏染液，生理盐水，靛基质试剂，AFO多价O2因子，O7、O9、Ha、Hb因子血清，VP试剂，志贺氏多价诊断血清。
1.4器材
无菌操作台，显微镜，酒精灯，接种环，载玻片，培养箱，试管。
2 实验设计与操作步骤
2.1实验流程
制定考核标准－实验用品的准备－标本编号－实验分组－实验实施－实验结果与现象记录－实验小结及分析－考核与评价。
2.2实验分组
2010年全班总人数48人，分6小组，每组8人。
2.3实验与操作
分离培养：1～3组取1号标本，4～6组取2号标本。每人取SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板和血平板进行细菌划线接种，置37℃温箱，孵育18～24h后观察结果。
生化反应与形态观察：从SS琼脂平板或MAC平板上挑取可疑菌落一无色半透明菌落，涂片、染色，油镜下观察染色细菌(正常情况下为G-杆菌)。
血清学鉴定：从SS琼脂平板或麦康凯琼脂平板上挑取无色半透明中等大小菌落，接种在KIA培养基、MIU培养基和甘露醇鸟氨酸培养基中，置37℃温箱孵育，次日观察结果。
2.4实验结果记录
(1)准确记录①②号标本在SS琼脂平板和血平板上的菌落特征。(2)客观如实记录①②号标本在KIA培养基中(斜面、底层、产气、H2S、动力等)现象及特征；记录①②号标本对MIU氨酸、赖氨酸、甘露醇的微量管中的生化反应特征。(3)记录单一菌落的血清学鉴定结果(包括标准诊断AHO多价志贺氏多价血清和O2、O7、O9、Ha、Hb因子血清检测结果等)。
3 结果分析与评价
3.1致病菌分离的结果
2010年学生分离致病菌结果见表1。
3.2实验考核标准与评价
实验考核标准见表2。
对2006～2010年对253名学生在实验与考核标准制定前、后的成绩进行统计分析，平均成绩用(x±s)，采用t检验；考核成绩在85分以上为优良，优良率采用X2检验。采用PEMS 3.1统计软件进行统计分析，检验水准a=0.05。结果见表3和4。
4 讨论
肠道致病菌是引起腹泻、呕吐的主要原因，也是危害食品安全的主要因素。因此，快速、有效肠道致病菌感染的实验室检测方法是肠道致病菌早期诊断、控制的关键。目前，常规的致病菌分离、鉴定方法是基于多种致病菌间的形态、代谢和生化指标的不同，利用细菌的产酸、产气以及细菌代谢方面等特性进行选择性培养，再在选择性培养的基础上，根据血清学进行鉴定。肠道致病菌一般为G-无芽孢的短杆菌，在麦康凯琼脂上，菌落形态与普通大肠杆菌相似。在含山梨醇的麦康凯琼脂上，菌落无色、网整、稍混、湿润、不溶血，直径约为0.5mm。在绵羊血琼脂上，菌落呈灰白色、网形、稍凸、湿润、不溶血。掌握肠道致病菌的分离、鉴定技术对腹泻、呕吐等症状的疾病诊断非常重要，也是临床检验专业教学的重点。实验教学中，少数学生没有分离出致病菌，主要有如下原因：①平板划线不过关，在平板上无单个菌落。②不能准确挑取可凝菌落。③挑取了混有2个以上菌落，没有挑取单个菌落，生化反应不典型。④不能正确使用诊断血清。
肠道致病菌的分离、鉴定是分步进行的，哪一环节出了问题都不能检出致病菌。因此，必须制定实验和考核标准，对学生实验和操作的基本功进行强化，如平板分区划线、生化反应、血清学诊断的血清使用原则。培养学生实事求是，求真务实的科学态度，提高学生的实验技能。