固相萃取超高效液相色谱串联质谱法同时检测禽畜粪便中多种抗生素残留

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摘要：建立了固相萃取超高效液相色谱串联质谱（SPEUPLC/MS/MS）同时测定禽畜粪便中6种磺胺类（SAs）、4种四环素类（TCs）、3种氟喹诺酮类（FQs）、3种大环内酯类（MACs）以及1种硝基呋喃类（NFs）抗生素残留的方法。样品分别由McIlvaineNa2EDTA缓冲液和有机混合提取液逐次超声提取，合并提取液，以正己烷去脂，过SAXHLB固相萃取系统富集净化，经氮吹、定容后，以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行UPLC/MS分离检测，内标法定量。在0.1～1000 μg/kg （Dry weight）浓度范围内，所有目标物标准曲线R2均大于0.99，样品加标回收率在42.3%～79.6%之间，相对标准偏差为1.4%～5.4%。方法检出限为0.1～2.0 μg/kg，定量下限为0.3～6.6 μg/kg。应用本方法检测华北地区多个禽畜养殖基地粪便样品32份，所有抗生素均有不同程度的检出，最高检出浓度为金霉素125 μg/kg。

关键词：粪便； 抗生素； 残留； 固相萃取超高效液相色谱串联质谱（SPEUPLC/MS/MS）

1引言

抗生素被广泛应用于畜牧养殖业中，主要用于治疗疾病，促进生长。近年来畜牧业抗生素滥用现象十分严重[1]，进入动物体内的药物约有30%～90%以原形或初级代谢产物的形式随粪便排出体外[2]，相当一部分的兽药抗生素进入环境中，造成环境抗生素残留以及耐药细菌的传播扩散，最终危害人体健康[3，4]。当前，发展灵敏、可靠的分析技术是研究抗生素环境残留的基础。高效液相色谱法（HPLC）不仅耗时，且无法克服较高含量的基质干扰效应，尤其针对粪便中抗生素的检测干扰更严重。近年有实验者采用超声提取，HPLC测定中国多省份畜禽粪便中抗生素残留[5]，选择分类，分别提取检测多种抗生素的方法，除增加了实验时间和强度外，方法定量限高达23～182 μg/kg。液相色谱串联质谱（LCMS）法具有更高的灵敏度和选择性[6，7]，而超高效液相色谱串联多级质谱（UPLCMS/MS）具有更高的检测效率[8，9]。粪便样品基质相当复杂[10]，需建立有效的前处理方法以减少干扰[11]。本研究采用SPEUPLC/MS/MS法提取检测了粪便中5大类共计17种抗生素，并进行方法优化，通过考察提取过程中提取剂种类及pH值对目标物分离纯化的影响，对仪器条件进行了优化选择，建立并完善了复杂环境样品中多种抗生素残留同时检测的方法，为监测环境中抗生素残留提供技术保证。

2实验部分

2.1仪器与试剂

WATERS ACQUITY UPLC 超高效液相色谱，WATERS XEVO TQ串联四级杆质谱 （美国Waters公司）； ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm，美国Waters公司）；SAX阴离子交换柱（3 mL/200 mg，美国Thermo公司）；HLB小柱 （6 mL/500 mg，美国Waters公司）；十二孔固相萃取装置（天津恒奥公司）；TDL5A离心机（上海安亭公司）；PGC01D氮吹仪（天津艾维欧公司）。

目标物磺胺嘧啶（SD）、磺胺甲恶唑（SMX）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺间甲氧嘧啶（SMN）、磺胺氯哒嗪（SCP）、恩诺沙星（ENR）、环丙沙星（CIP）、氧氟沙星（OFL）、强力霉素（DOXY）、金霉素（CTC）、泰乐菌素（TYL）、呋喃唑酮（FUR）标准品（美国SigmaAldrich公司）；四环素（TC）、土霉素（OTC）、红霉素（ERY）、罗红霉素（ROX）、甲氧苄啶（TMP）购于中国药品生物制品检定所。替代物13C3咖啡因（J&K百灵威试剂公司），13C6 磺胺嘧啶（剑桥同位素实验室），洛美沙星（LOMX）及甲氯环素（MECL）购于SigmaAldrich公司。内标物西玛通（Simetone，Accustandards公司）。甲醇、乙腈（色谱纯）；柠檬酸、甲酸、丙酮、Na2EDTA、NaH2PO4、HCl、NaOH等均为分析纯；超纯水经MilliQ水净化系统 （Millipore公司）处理。