HPLC法测定注射用哌拉西林钠舒巴坦钠的含量
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摘 要：本文采用高校液相测定了注射用哌拉西林钠舒巴坦钠中哌拉西林钠和舒巴坦钠的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-磷酸-2%四丁基氢氧化铵溶液（15：15：0.1：70）为流动相，检测波长为230nm；舒巴坦钠在1～8mg・mL-1范围内呈良好的线性关系；哌拉西林钠在0.2～2.8mg・mL-1范围内呈良好的线性关系。舒巴坦钠和哌拉西林钠的平均回收率分别为99.5%、99.6%，RSD为0.91%（n=6）、0.93%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于注射用哌拉西林钠舒巴坦钠中舒巴坦钠和哌拉西林钠的含量测定。
关键词：注射用哌拉西林钠舒巴坦钠；舒巴坦钠；哌拉西林钠
注射用哌拉西林钠舒巴坦钠为复方制剂，其组份为哌拉西林钠和舒巴坦钠，哌拉西林钠和舒巴坦钠按（2：1）的比例组成。注射用哌拉西林钠舒巴坦钠适用于对哌拉西林耐药而对本品敏感的产β-内酰胺酶致病菌引起的急性支气管炎、支气管扩张合并感染、慢性支气管炎急性发作、肺炎和化脓性扁桃体炎、单纯型泌尿系统感染和复杂型泌尿系统感染。本文采用高校液相测定了注射用哌拉西林钠舒巴坦钠中哌拉西林钠和舒巴坦钠的含量。
1 仪器与试药
BL10-250C双频加热型超声波清洗器（北京中科科尔仪器有限公司）；奥豪斯Explorer专业型分析天平（奥豪斯仪器上海有限公司）；SHB-III型台式循环水式多用真空泵（南京易普易达科技发展有限公司）；VERTEX VI500高效液相色谱仪（上海禾工科学仪器有限公司）；Thermo ScientificDIamond TII纯水器（赛默飞世尔科技实验室产品）；HH-601超级恒温水浴（南京先欧仪器制造有限公司）；IKA RV10 数显型旋转蒸仪（东莞市艾伯特仪器设备有限公司）；SP-756PC 紫外-可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；FE20K 梅特勒FE20K酸度计（北京联合科仪科技有限公司）。哌拉西林钠舒巴坦钠对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（深圳华祥化工有限公司）、甲醇（连云港市新浦区海宁化学厂）、磷酸（深圳华祥化工有限公司）、四丁基氢氧化铵（连云港市新浦区海宁化学厂）、磷酸二氢钠（深圳华祥化工有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果[1-9]，确定色谱条件如下：色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-磷酸-2%四丁基氢氧化铵溶液（15：15：0.1：70）为流动相；检测波长为230nm；流速1.0mL・min-1；柱温：30℃。理论板数按哌拉西林钠峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取注射用哌拉西林钠舒巴坦钠适量，精密称取，置50mL量瓶中，加流动相适量，超声处理十分钟使溶解，放置至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.3 对照品溶液的制备
分别精密称取哌拉西林钠和舒巴坦钠对照品约10mg，置5mL容量瓶中，用加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中分别含哌拉西林钠和舒巴坦钠2mg）。
2.4 标准曲线的制备
制备浓度为1mg・mL-1、2mg・mL-1、3mg・mL-1、4mg・mLe、5mg・mLe、6mg・mLe、7mg・mL-1、8mg・mL-1的舒巴坦钠对照品溶液，制备浓度为0.2mg・mL-1、0.4mg・mL-1、0.8mg・mL-1、1.6mg・mL-1、2.0mg・mL-1、2.4mg・mL-1、2.8mg・mL-1的哌拉西林钠对照品溶液。分别按舒巴坦钠、哌拉西林钠的测定参数继续测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，舒巴坦钠在1～8mg・mL-1范围内呈良好的线性关系；哌拉西林钠在0.2～2.8mg・mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取舒巴坦钠和哌拉西林钠对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.76%和0.66%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6 重现性试验
分别称取同批注射用哌拉西林钠舒巴坦钠样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.61%，0.76%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，8，10h进样测定，供试品舒巴坦钠和哌拉西林钠峰面积的RSD分别为0.55%和0.65%。结果表明舒巴坦钠和哌拉西林钠至少在10h内稳定。
2.8 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的舒巴坦钠和哌拉西林钠对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.5和99.6%%，RSD分别为0.68%和0.85%。
2.9 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定注射用哌拉西林钠舒巴坦钠三批样品中舒巴坦钠和哌拉西林钠的含量，结果三批样品的舒巴坦钠和哌拉西林钠含量分别为标示量的99.8%、99.8%、99.9%和99.8%、99.6%、99.5%。
3 讨论
分别考察甲醇-缓冲液（磷酸二氢钠6.0g，加水溶解并稀释至1000ml， 加三乙胺1ml，用浓氢氧化钠溶液调节pH 值至7. 0） （30∶70），乙腈-四氢呋喃-三乙胺磷酸缓冲液（25：15：60），甲醇-乙腈-磷酸-2%四丁基氢氧化铵溶液（15：15：0.1：70），甲醇-乙腈-磷酸-2%四丁基氢氧化铵溶液（25：15：0.1：60），甲醇-缓冲液（磷酸二氢钠6.0g，加水溶解并稀释至1000ml，加三乙胺1ml，用浓氢氧化钠溶液调节pH值至7.0）（25∶75），甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液（每1000mL的缓冲液含0.5mol/L溴化四丁基铵45mL，用磷酸调节pH至3.5）（体积比40∶60）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-磷酸-2%四丁基氢氧化铵溶液（15：15：0.1：70）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-磷酸-2%四丁基氢氧化铵溶液（15：15：0.1：70）为流动相。注射用哌拉西林钠舒巴坦钠中舒巴坦钠和哌拉西林钠的含量为标示量的95%-105%。
参考文献
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