腺垂体不同细胞染色法的改良和应用
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【摘要】 目的 探讨腺垂体不同细胞的染色方法，提高显示效果。方法 选择不同动物的脑垂体，进行染色比较，确定最佳动物供体和染色方法。结果 六种细胞以不同的颜色清晰地显示在一张切片上，色彩艳丽。结论 该染色方法稳定可靠，有利于对不同细胞的鉴别，适用于教学和科学研究。
【关键词】 腺垂体 特殊染色 改良
Improvement and application of the histological stain method in adenohypophysis
Abstract：Objective: To study the special stain method of different cells in the adenohypophysis. Methods: The hypophysis from several kinds animals was used in the experiment. In order to determine suitable animal sample and the best stain method, the slices of the hypophysises were stained with the special stain method that was improved. Results: Six kinds of cells within the adenohypophysis were demonstrated in different colors in the same slice. Conclusion: The good method is reliable and can easily distinguishing various kinds cells.
Key words：adenohypophysis; special stain；improve
脑垂体是人体内重要的内分泌器官，其结构复杂，特别是腺垂体的细胞种类多，用常规染色方法不能显示各种细胞的形态，故很难对各种细胞的组织学结构和病理变化进行观察和研究，为教学和科研带来很大困难。虽然免疫组织化学的方法能区别某种细胞，但不能做到六种细胞同时显示，且操作复杂，要求条件高，试剂昂贵，限制了应用。为此，我们经过反复试验改进，成功地使六种细胞在同一张切片上清晰的显示出来，色彩艳丽，对比明显，为教学和科研提供了有效的方法，现将此法介绍如下。
1 材料和方法
1.1 材料
取健康成年猪的脑垂体（由山东农业大学畜牧专业实验室提供），雌雄不限，将猪处死后放血，立即开颅，找到颅底的垂体窝后将垂体取出，取材时操作轻柔，共取材6个；同时取大白鼠和兔子的脑垂体各六个，取材方法同上。取材后立即10%福尔马林固定12h。
1.2 方法
1.2.1 切片 脑垂体固定后常规处理，石蜡包埋切片，切片厚5μm，顺利做连续切片，无断裂破碎现象。将切片贴裱到载玻片上，40℃温箱内烘干备用。
1.2.2 染色 切片常规脱蜡到水，蒸馏水洗入过甲酸液5min：88%甲酸40ml、双氧水4ml、浓硫酸0.5ml。自来水冲洗10 min。蒸馏水洗入阿利新兰液，室温下过夜：阿利新兰2g、2N硫酸100ml，加热溶解过滤。自来水冲洗10 min，蒸馏水洗。PAS染色，入1%过碘酸（新配）5 min，蒸馏水洗数次，Schiff试剂10 min，（Schiff试剂配法：蒸馏水200ml煮沸，停火后加碱性品红1g，不停搅拌溶解，溶液冷却至50℃时，加入1N盐酸20ml，冷却至室温，加偏重亚硫酸钾1g溶解混匀，置暗处过夜，再加活性炭2g，充分摇荡混匀过滤，滤液呈无色或淡黄色，装入有色瓶中，放4℃冰箱内保存备用。）自来水冲洗20 min，蒸馏水洗。0.5%偶氮卡红液30s，（56-60℃）：偶氮卡红0.5g、蒸馏水100ml，蒸馏水洗。2%橘黄G染液30～40 min：橘黄G 2g、磷钨酸1g、蒸馏水100ml。0.1%苯胺酒精分化数秒钟，蒸馏水洗。常规脱水、二甲苯透明，中性树胶封固。
2 结果
HE染色的脑垂体切片把腺垂体的细胞分为三种，嗜酸性细胞被染成桃红色，嗜碱性细胞被染成紫红色，嫌色细胞被染成浅灰色（图1）。
图1 HE染色：嗜碱性细胞紫红色，嗜酸性细胞桃红色，嫌色细胞浅灰色。（略）
上述染色方法将腺垂体的腺细胞根据功能不同染成不同的六种颜色：催乳激素细胞（LTH）呈橘红色，生长激素细胞（STH）呈黄色，促性腺激素细胞［卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素（LH）］呈紫红色，促甲状腺激素细胞（TSH）呈紫蓝色，促肾上腺皮质激素细胞（ACTH）呈灰蓝色，嫌色细胞浅灰色。六种细胞各具特色，色彩艳丽，细胞边界清晰；核染色淡，核仁明显（图2）。
图2 特殊染色： LTH细胞橘红色， STH细胞黄色， FSH细胞和LH细胞紫红色，TSH细胞紫蓝色， ACTH细胞灰蓝色，嫌色细胞浅灰色。（略）
3 讨论
组织学切片质量的优劣直接影响实验教学效果和科学研究的成败。俗话说“工欲善其事，必先利其器”。脑垂体分为腺垂体和神经垂体两部分，腺垂体是由两类内分泌细胞组成，即嗜色细胞和嫌色细胞。嗜色细胞根据其HE染色结果分为嗜酸性细胞和嗜碱性细胞。嗜酸性细胞根据其分泌物性质的不同分为两种：催乳激素细胞和生长激素细胞;嗜碱性细胞根据其分泌物性质的不同又分为三种：促性腺激素细胞(卵泡刺激素、黄体生成素)、促甲状腺激素细胞、促肾上腺皮质激素细胞，加上嫌色细胞共六种细胞，而HE染色只能分出嗜酸性、嗜碱性和嫌色细胞三种细胞。采用改良的六色染色法，各种细胞跃然于同一视野，不但容易观其形而且能测其数，为教学和科研提供了极大的方便。
我们参考由杜卓民主编［1］的《实用组织学技术》中Adams-Swettenham染色法和Paget-Eccleston染色法，使这两种染色方法结合在一起，在腺垂体的染色中试染，在染液和染色时间上进行了部分调整，经过多次对比染色，得到满意的效果。同时比较三种动物的染色结果，其HE染色均可，但以猪的脑垂体染色效果最佳。特殊染色中，三种动物的染色结果区别不大，但每种动物之间有一定的差距，有的如图所示，六种细胞能清晰辨认，有的不能完全显示，笔者认为可能与腺垂体的各种细胞处于不同的功能状态，或与切片部位有关。腺垂体的六种细胞的染色结果未见报道，本研究所涉及的染色方法，适用于形态学实验教学及实验研究。我们将采集的图片集成到组织胚胎学实验教学课件中，由于图片色彩艳丽，能把观察者带入一个奇妙的微观世界，具很强的观性和实用价值，因此学生对此图片印象深刻，也因此对相应的功能记忆起到促进作用。
【参考文献】
［1］ 杜卓民.实用组织学技术 ［M］.北京：人民卫生出版社，1982.234－237.