分析注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中有关物质HPLC检测方法的提高

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[摘 要]目的：建立有效的注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质检测方法。方法：采用HPLC梯度洗脱法，色谱柱为PhenomenexC18（2）型Luna色谱柱，以0.02mol/L磷酸二氢钠溶液pH（4.0±0.1）为流动相A、乙腈为流动相B；流速为1.0ml/min；检测波长为230nm和254nm，采用双波长检测分区域计算。结果：采用梯度洗脱方式能有效检测出氨苄西林二聚物、舒巴坦青霉胺等杂质；不同来源的杂质具有明显分区，与氨苄西林有关的杂质主要集中在舒巴坦主峰后，而与舒巴坦有关的杂质则集中在舒巴坦主峰前；采用双波长分区域检测杂质含量，可以将复方制剂中的有关物质含量同其原料氨苄西林钠和舒巴坦钠中的有关物质含量相联系。各杂质在不同波长下响应值不同。结论：改进后的方法可较好的分离氨苄西林钠和舒巴坦钠来源的各主要杂质。

[关键词]注射用氨苄西林钠舒巴坦钠 有关物质 HPLC检测方法 提高

中图分类号：P251.3 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）16-0390-01

注射用氨苄西林钠舒巴坦钠也就是大家熟知的复方制剂，其主要有两部分构成，一部分是氨苄西林钠，另一部分是β-内酰胺酶抑制剂-舒巴坦钠。这两种物质在合成注射用氨苄西林钠舒巴坦钠时，都会残留一些物质，这对其质量有极大的消极影响。因此需要选择合理的检测方法来对其中的有关物质进行检测，以此保证复方制剂的质量。目前国内很少有相关医药文献提及到HPLC方法，通常只是将其作为药物含量测定方面，并没有将其应用到物质检查中。按照注射用氨苄西林钠舒巴坦钠自身具备的特点，其含有的有关物质应该来自于两原料药，典型的有关物质有两种，一种是氨苄西林二聚物，另一种是舒巴坦青霉胺，这两种影响药品质量的物质，在其他药剂中也被严格控制。我国新世纪之初出版的药典中已经明确规定了需要对注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中的上述物质含量进行有效的控制，但是该药典中并没有其检测限度，另外，该药典中所例举的检测方法，对上述两种有关物质不能进行定位。

相关的研究实践已经表明，注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中存在的有关物质能够引起患者的过敏反应，并且有关物质的含量越高，其引发的过敏反应的次数也就越多，所以需要对其进行监测，而且还必须保证检测方法对有效控制这些有关物质的含量具有一定的积极作用，进而确保产品安全应用。本文主要是以国家颁布的药典为基础，在此基础上，利用HPLCF方法，将已经明确的有关物质进行归属，而且对来自于8家企业的产品进行了严格的测定，计算出注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中各种有关物质的含量，最终确定了新的检测注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中有关物质的方法，即为新HPLC检测方法。

一、材料与方法

1、仪器

高效液相色谱系统、色谱柱。

2、药品与试剂

8批注射用氨苄西林钠舒巴坦钠（2∶1）为8个企业的产品，规格分别为0.75g、1.5g、2.25g和3.0g，全部样品的水分、含量和有关物质等均符合2005年版中国药典的规定。氨苄西林对照品（批号：130410-200405、含量：86.0%）和舒巴坦对照品（批号：130430-200305、含量：89.2%），为中国药品生物制品检定所提供，用于含量测定和杂质归属研究。乙腈为色谱纯、其他试剂均为分析纯。

3、色谱条件

复方制剂等度洗脱法：中国药典2005年版二部收载的注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质检查方法（检测波长：230nm）[4]；氨苄西林梯度洗脱法：中国药典2005年版二部收载的氨苄西林钠有关物质检查方法（检测波长：254nm）。

4、降解溶液的制备

（1）氨苄西林热降解溶液：取氨苄西林对照品约200mg，加pH7.0磷酸盐缓冲液1ml，置60℃水浴加热1h，取0.5ml，用流动相稀释至50ml，摇匀。（2）舒巴坦热降解溶液：取舒巴坦对照品约100mg，加水1ml，置60℃水浴加热1h，取0.1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀。（3）样品热降解溶液：取复方制剂供试品约300mg，加水1ml，置60℃水浴加热1h，取0.1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀。（4）舒巴坦碱热降解溶液：取舒巴坦对照品约40mg，置100ml量瓶中，加水2ml与1mol/L氢氧化钠溶液0.5ml，室温放置10min，使产生舒巴坦青霉胺；再加1mol/L盐酸溶液0.5ml，用流动相稀释至刻度，摇匀；量取5ml，置50ml量瓶中，加入舒巴坦对照品20mg，用流动相稀释至刻度，摇匀。

二、结果

利用复方制度等度洗脱的方法来进行检测，结果发现8家企业中提供的样品其检测出来的有关物质都比较少，并且氨苄西林出现主峰之后，其他有关物质并没有出现任何的峰值；而如果选择使用氨苄西林梯度洗脱法来进行检测，每种样品中都检测出有关物质，而且其有关物质含量都明显高于前一种方法，但是利用这种方法，有一些样品并没有检测出除了氨苄西林二聚物之外的第二大峰值，但是这种杂质，在230nm的位置上产生的相应与254nm相比，明显较低，从这一点可以看出，前一种检测方法效果不佳，对控制注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中有关物质的作用并不大。

三、检测方法的提高

鉴于氨苄西林和舒巴坦在230nm和254nm的响应值不同，因此采用不同的检测波长，有关物质的表征含量不同；且按目前的杂质表征方式，无论采用何种单一波长检测，均不能将复方制剂中的有关物质含量同其原料氨苄西林钠和舒巴坦钠中的有关物质含量相联系。由于在对氨苄西林钠和舒巴坦钠的诸降解杂质在复方制剂梯度洗脱法色谱图中的位置分别进行定位时发现，源于氨苄西林的降解杂质和源于舒巴坦的降解杂质在复方制剂梯度洗脱系统中的保留值具有明显的分区：与氨苄西林有关的杂质主要集中在舒巴坦主峰后，而与舒巴坦有关的杂质则集中在舒巴坦主峰前；因此测定中如果采用双波长检测分区域计算的方法，对舒巴坦主峰前的杂质峰，采用230nm的峰面积值按舒巴坦计算其含量，对舒巴坦主峰后的杂质峰，采用254nm的峰面积值按氨苄西林计算其含量，则可较好的解决上述矛盾。按所述方法重新对上述8批样品的相关物质含量进行表征，根据氨苄西林钠和舒巴坦钠的实际质量比计算出特定杂质和杂质总量，并依据中国药典舒巴坦钠各论中给出的舒巴坦青霉胺的校正因子对杂质含量进行校正，显然改进后的杂质表征方法更能真实反映复方制剂中的有关物质含量。

四、讨论

注射用注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中有关物质的检测是现阶段我国重点研究的内容，之所以对其投入大量的人力物力，主要是药物中的有关物质含量直接关系到药物的质量，尤其是过敏原物质存在的含量直接危及到使用该药物的患者的生命健康。通常情况下，检测药物中的有关物质，一般都会选择使用hplc方法，这种方法尽管得到了大面积的普遍应用，但是如果HPLC系统没有达到最佳合理状态，其检测结果也无法保证真实可靠，甚至会出现比较大的差距，所以注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中有关物质的检测，如果确定使用HPLC方法，必须确保其系统合理，正是检测的前提条件。另外，药品质量的优劣还与该药物中含有的有关物质表征对错有直接的关系，所以在试验中也需要考虑其中。本文既对注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中的有关物质进行有效的分析，同时也对其控制方法进行研究，既利用率色谱条件，同时也对质控限度进行了控制，将两者有效结合，有利于检测出注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中的各个物质，进而对产品质量的提高提供了条件。

参考文献

[1] 童立年.注射用氨苄西林钠舒巴坦钠在常见配伍液中的稳定性考察[J].中国药业.2007（10）.

[2] 霍秀敏.β-内酰胺类抗生素高分子杂质的研究[J].药品评价.2005（05）.

[3] 蔡姗英，胡昌勤.β-内酰胺类抗生素中高分子聚合物的分离分析方法研究进展[J].广东药学院学报.2002（02）.

[4] 刘浩，仇仕林.注射用氨苄西林钠舒巴坦钠含量测定方法的改进[J].中国药品标准.2002（03）.