奥扎格雷钠对肢体缺血再灌注骨骼肌的影响
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【摘要】 目的 探讨奥扎格雷钠对肢体缺血再灌注骨骼肌的保护作用。方法 健康成年家兔20只， 随机分为实验组和对照组， 每组10只。建立兔肢体缺血再灌注损伤动物模型。在即将恢复血流灌注时， 对照组自耳缘静脉注射生理盐水， 实验组奥扎格雷钠注射液。分别在缺血前、缺血后2 h、再灌注后1 h、再灌注后3 h采集术侧股静脉血样。测定血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）的含量。结果 实验组再灌注后LDH、CK明显低于对照组（P
【关键词】 奥扎格雷钠；骨骼肌；再灌注损伤
临床护理中止血带应用时间过长、血管损伤、骨折和骨骼肌的挤压伤都不可避免的会引起骨骼肌的缺血再灌注损伤。骨骼肌的缺血再灌注损伤轻者会影响患肢骨骼肌的收缩功能， 重者可致肢体功能丧失、截肢甚至导致患者死亡[1， 2]。奥扎格雷钠是一种特异性血栓A2（TXA2）合成酶抑制剂， 能降低TXA2， 促进前列环素I2（PGI2）的生成， 并维持二者间的平衡， 还能选择性地扩张血管， 改善微循环和能量代谢， 抗血小板聚集[3-5]。奥扎格雷钠目前已广泛用于治疗缺血性心脑血管病， 但至今有关奥扎格雷钠对骨骼肌缺血再灌注损伤的防治作用的相关研究鲜有报道。因此， 本研究拟用家兔肢体缺血再灌注损伤模型， 观察奥扎格雷钠对肢体缺血再灌注骨骼肌损伤的防护作用。现报告如下。
1 材料与方法
1. 1 材料 实验选用健康雄性大耳白兔20只， 体重2.5～3.0 kg （由西安交通大学医学院实验动物中心提供）， 随机分为实验组和对照组， 每组10只。
采用改良的孙瑞芝等[6]的方法建立家兔骨骼肌缺血再灌注损伤动物模型。术前12 h禁食， 实验动物用3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射（1 ml/kg）， 麻醉后固定于实验台。在左后肢股三角处沿股血管走行切开皮肤， 暴露股血管鞘， 游离股动脉、静脉及神经， 于腹股沟韧带处用微血管夹夹闭股动脉， 在阻断处以下用张力带环扎后肢以阻断侧枝循环。缺血2 h后取下橡皮带和血管夹， 恢复肢体血供。实验组于再灌注开始即刻从耳缘静脉注射奥扎格雷钠注射液（2 mg/kg）， 对照组从耳缘静脉注射等容生理盐水。
1. 2 检测项目及方法
1. 2. 1 血清LDH、CK的测定 每组动物分别于缺血前、缺血后2 h、再灌注后1 h和再灌注后3 h， 从左侧股静脉取血样2 ml， 离心、全自动生化分析仪（美国贝克曼CX-4型）测定血清中LDH、CK的含量（U/L）[7]。
1. 2. 2 骨骼肌组织湿/干重比值的测定 分别于上述各时间点， 取左侧小块胫前肌， 迅速称其湿重， 放置60℃恒温箱60 h， 称其干重， 计算 湿/干重比值。
1. 2. 3 形态结构观察 ①石蜡切片制备及光镜观察：每组任选2只动物， 分离胫前肌， 切成2 cm×1 cm×0.5 cm大小的组织块， 置于包埋盒， 然后置于4%多聚甲醛液中固定6 h以上。常规乙醇梯度脱水、透明， 石蜡包埋， 切片， HE染色， 显微镜下观察， 拍照。②电镜观察超微结构：将上述经多聚甲醛固定的胫前肌切成1 mm3大小的组织块， 置于3%戊二醛固定液中， 4℃过夜。0.1 M 磷酸缓冲液浸洗， 1%锇酸4℃后固定， 常规乙醇梯度脱水；Epon812包埋剂浸透、包埋、聚合；超薄切片（LKB-NOVA超薄切片机）， 透射电镜下观察并摄片（H-7500型透射电镜）。
1. 3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。计量资料用均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料用率（%）表示， 采用χ2检验。P
2 结果
2. 1 血清中LDH、CK变化
2. 1. 1 血清LDH变化 与缺血2 h相比， 再灌注1 h后LDH即明显增高（P
2. 1. 2 血清CK变化 再灌注1 h后LDH与缺血2 h相比明显增高（P
2. 2 骨骼肌组织湿/干重比值 在缺血前和缺血2 h后， 胫前肌湿/干重比值差异无统计学意义（P>0.05）；再灌注1 h、3 h后骨骼肌组织湿/干重比值较同组缺血后2 h明显升高（P
2. 3 结构的变化
2. 3. 1 光镜观察 缺血2 h后， 光镜下可见骨骼肌纤维轻度肿胀， 横纹可见， 肌核存在。对照组， 再灌注1 h后， 肌纤维出现明显水肿， 横纹消失；再灌注3 h后， 部分区域肌核消失见图1。实验组， 再灌注1 h和再灌注3 h后， 仅部分肌纤维轻度肿胀， 肌核接近正常， 见图2。
2. 3. 2 透射电镜观察 对照组再灌注3 h后， 肌原纤维排列紊乱， 线粒体出现空泡样变、嵴断裂、糖原颗粒减少， 肌浆网扩张双侧终池电子密度增高， 见图3。实验组， 再灌注3 h后， 肌原纤维排列整齐， 三联体、糖原颗粒较对照组增多， 三联体基本完整， 见图4。
3 讨论
骨骼肌是人体含量最多的组织， 其对缺血损伤异常敏感。正常骨骼肌细胞内含有丰富的LDH、CK等酶类， 缺血、缺氧等损伤可致细胞膜通透性增高， 细胞内所含的酶即释放入血， 其含量的高低可反映细胞损伤的程度。因而血清中此类酶的含量通常作为反映肌细胞损伤的敏感指标。
本研究结果表明， 缺血再灌注1 h后血清LDH和CK即明显升高， 表明再灌注引起骨骼肌细胞膜的通透性增加， 这与以往的大量研究结果相一致。形态学结果也证实， 再灌注组后骨骼肌组织细胞损伤非常明显。静脉注射奥扎格雷钠后再灌注， 可抑制再灌注后骨骼肌纤维LDH、CK的释放；同时， 形态学结果表明， 奥扎格雷钠注射组肌细胞损伤程度较同期对照组明显减轻， 几乎近于正常。
综上所述， 奥扎格雷钠能够保护缺血再灌注损伤引起的LDH和CK的释放， 保护细胞膜结构和功能的完整。但奥扎格雷钠发挥作用的具体机制还不清楚， 有待于进一步的研究。
参考文献
[1] Blaisdell FW. The pathophysiology of skeletal muscle ischemia and the reperfusion syndrome： a review. Cardiovasc Surg， 2002， 10（6）： 620-630.
[2] Gillani S， Cao J， Suzuki T， et al. The effect of ischemia reperfusion injury on skeletal muscle. Injury， 2012， 43（6）：670-675.
[3] Zhang J， Yang J， Chang X， et al. Ozagrel for acute ischemic stroke： a meta-analysis of data from randomized controlled trials. Neurol Res， 2012， 34（4）：346-353.
[4] 王一沙， 刘菲， 郭婉姝.奥扎格雷钠对急性脑梗死患者神经功能及血清脂联素水平的影响.实用药物与临床， 2012， 15（5）：79-80.
[5] 马瑛， 靳学婷， 方艳秋， 等.奥扎格雷钠对缺血再灌注大鼠脑海马区细胞保护作用的研究.中国老年学杂志， 2009， 29（17）： 2207-2209.
[6] 孙瑞芝， 王瑞琴. 当归、川芎嗪对家兔骨骼肌缺血再灌注损伤作用的研究. 中国中医药信息杂志， 2002， 9（7）：30-31.
[7] 姜德华， 金男革， 玄云汉， 等.大鼠急性局灶脑缺血再灌注脑组织MDA含量和NOS活性的变化.临床神经病学杂志， 2000 （13）：201.
[收稿日期：2014-10-22]