依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究
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[摘要] 目的 探讨依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将36只SD大鼠随机分为假手术组、NS组及依达拉奉组，制备SD脑缺血再灌注模型，依达拉奉组在造模后即刻和12h分别给予依达拉奉腹腔注射，假手术组和NS组分别给予生理盐水腹腔注射，比较3组神经功能缺损评分及SOD、MDA含量。结果 与假手术组比较，NS组与依达拉奉组神经功能缺损评分分别为（2.74±0.56）、（1.38±0.22）分均明显升高（P
[关键词] 依达拉奉；大鼠；脑缺血再灌注损伤；保护作用
[中图分类号] R96 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）05（c）-0114-02
[Abstract] Objective To investigate the protective effect of edaravone on cerebral ischemia reperfusion injury in rats. Methods 36 SD rats were randomly divided into sham operation group， NS group and edaravone group， preparation of SD in cerebral ischemia reperfusion model group， edaravone immediately after modeling and 12 h were given intraperitoneal injection of edaravone， sham operation group and NS group were given intraperitoneal injection of normal saline， neural function defect score and SOD， the content of MDA of 3 groups. Results The Compared with the sham operation group， NS group and edaravone group， the score of neural function defect were （2.74±0.56）， （1.38±0.22） were significantly increased （P
[Key words] Edaravone； Rat； Cerebral ischemia reperfusion injury； Protective effect
近年来的研究表明自由基的连锁反应是脑缺血的核心病理环节，过多的自由基在脑缺血再灌注损伤中占据极其重要地位，可加重脑缺血损伤而导致神经功能损害[1]。依达拉奉是一种由日本Mitsubishi-Tokyo公司研制开发的新型自由基清除剂，其血脑屏障通透性高，可通过清除自由基、抑制脂质过氧化反应等来发挥强大的脑缺血保护作用，目前认为依达拉奉的作用机制极为复杂，很多机制仍未完全阐明[2]。该研究选取2012年6月―2013年2月间健康雄性SD大鼠为研究对象，主要从抗自由基损伤方面来初步探讨依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护作用，为该药物在脑缺血治疗上提供参考，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取健康雄性SD大鼠共36只，体重250～300 g。将大鼠随机分为3组，每组12只，分别为假手术组、NS组及依达拉奉组。依达拉奉注射液由江苏先声药业有限公司提供，超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒均由上海杰美基因医药科技有限公司提供。
1.2 脑缺血再灌注模型的制备
采用Longa线栓法[3]制备大鼠局灶性脑缺血模型。先以10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉，再参照Longa的大鼠中动脉内栓线阻断法，阻塞大脑中动脉，2 h后拔出线栓实现再灌注。假手术组除了不插入线栓外，其他操作均相同。依达拉奉组分别在再灌注即刻以及再灌注后12 h给予依达拉奉（3 mg/kg）腹腔内注射，假手术组与NS组均在相同时间给予等量0.9%生理盐水腹腔内注射。
1.3 观察项目
再灌注后24 h对大鼠神经行为进行观察，参照Longa等[3]制定的标准进行神经功能缺损评分：无神经功能缺失为0分；不能完全伸展对侧前爪为1分；爬行时出现对侧转圈为2分；行走时出现对侧倾倒为3分；意识丧失，无法自行行走为4分。
神经功能缺损评分后断头取脑，将脑组织剪碎后匀浆，匀浆液离心去上清液，根据试剂盒说明书严格操作，分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定SOD与MDA含量。
1.4 统计方法
采用SPSS 15.0统计学软件处理数据，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验或者单因素方差分析，检验水准α=0.05，P
2 结果
2.1 神经功能缺损评分
与假手术组比较，NS组与依达拉奉组神经功能缺损评分均明显升高（P
2.2 SOD与MDA含量比较
与假手术组比较，NS组与依达拉奉组SOD活性明显下降，比较差异有统计学意义（P
3 讨论
急性脑缺血时在局部血管闭塞后，在周围缺血半暗带区由于存在侧枝循环，因此仍有大量可存活的神经元存在，因此需尽快恢复血供以保护和促进这些认可存活的神经元，但同时闭塞的脑血管再通后可能会进一步加重缺血所致的损伤，临床称之为脑缺血再灌注损伤现象[4]。大量的的研究显示脑缺血再灌注时可产生大量的有毒自由基，导致生物膜结构脂质过氧化，引起膜结构破坏、膜通透性改变，从而进一步加重神经细胞、血管细胞的损伤[5]。SOD是一种能够在细胞内对抗氧自由基的金属蛋白酶，能通过歧化方式来清除生物体内氧自由基，减少或避免生物体受到氧自由基损伤，目前认为SOD的活力能在一定程度上反映体积清除氧自由基的能力及脑损伤情况[6]。MDA则是氧自由基与不饱和脂肪酸脂质过氧化反应的最终代谢产物，其含量能间接反应组织中氧自由基含量及脂质过氧化程度[7]。本研究中发现NS组MDA含量明显高于假手术组，SOD活性则明显降低，提示在缺血再灌注发生后氧自由基大量产生，机体无法完全清除引起脂质过氧化而导致神经细胞损伤、凋亡。
依达拉奉是一种以阴离子形式存在且具有捕获自由基能力的活性氧化剂，其提供脑保护的机制的多方面的，一方面可将一个电子转移至自由基后形成依达拉奉基团而破坏脂质过氧化反应；另一方面其作为一种自由基清除剂能有效抑制黄嘌呤与次黄嘌呤氧化酶活性，提高SOD活性和细胞抗氧化能力，抑制和减少缺血再灌注后自由基的产生[9]；此外，依达拉奉还能减少白三烯、TNF-α等炎症介质的产生，提高细胞膜稳定性，缓解炎症反应所致的脑损伤，从而有效保护神经细胞损伤[9]。本研究结果显示依达拉奉组SOD活性虽然仍未达到假手术组的水平，但与NS组相比较已明显增高，而MDA水平则明显下降，同时神经功能缺损评分也明显降低，提示依达拉奉能有效对抗氧自由基和脂质过氧化损伤，从而有效缓解脑缺血再灌注损伤、保护脑神经细胞。
本研究中，与假手术组比较，NS组与依达拉奉组神经功能缺损评分分别为（2.74±0.56）、（1.38±0.22）分均明显升高（P
综上所述，依达拉奉作为一种新型的自由基清除剂，在神经保护以及减少脑缺血-再灌注后SOD与MDA异常表达的改善方面具有显著作用，值得临床推广应用。
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（收稿日期：2015-02-26）