HPLC法测定龟苓膏中绿原酸的含量
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【摘 要】龟苓膏是一种非常常见的中药，其主要是由多种中草药组成，主要的功效是降火清热，由于其口味较佳，因此自古就备受人们喜爱。目前龟苓膏的生产已经逐渐实现规模化和产业化，为了保证大批量生产的龟苓膏质量和其功效，就必须要对其相应的成分进行有效鉴定。而绿原酸作为龟苓膏中的重要成分，其含量多少会对龟苓膏的功效产生直接影响作用。现本文就主要研究了通过hplc法来鉴定龟苓膏中绿原酸含量的具体方法，希望能够为龟苓膏质量控制部门提供一些帮助。
【关键词】HPLC法；龟苓膏；绿原酸；含量；测定
作为一种由多种中药药材，经过特殊加工工艺所形成的中药药物，龟苓膏不但味道更易被人们接受，且去去火清热的功效也十分显著，因此备受人们的喜爱。这是因为龟苓膏的主要原材料分别是地黄、金银花、龟、甘草以及火麻仁等多种清热药材组成，目前在中医临床中，龟苓膏仍然是一种主要的药物，在治疗虚火、燥热、皮肤瘙痒等多种疾病中有着良好疗效。但是当前市场中所出售的龟苓膏多是由厂家大批量生产的，其质量必须要得到有效控制，以保证消费者的权益。为此加强龟苓膏的质量检验就显得很有必要。以下本文就来介绍一种可以在龟苓膏生产和质量检验过程中使用检验方法，――HPLC法。实践证明，这种检测方法不但实用，而且更为快速方便，检测结果精度较高，非常适合在龟苓膏绿原酸含量检测中使用。
1.仪器与试药
1.1药材
龟购自当地市场；地黄、土获等、绵茵陈、金银花、甘草、火麻仁、蜂蜜购自当地药材市场。
1.2对照品
绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：110753-200413。
1.3试剂
甲醇、乙睛为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
1.4仪器
液相色谱仪（VOITS）Alltech426HPLCPump；All-tech530Column Heater；LinearUvis200Detector。
2.实验条件
C18色谱柱：250mmx4.6mm，5um，Alltima。流动相：乙睛-0.4%磷酸溶液（13：87）；流速：1.0mL/min；检测波长：327nm。
3.实验方法与结果
3.1阴性干扰试验
照处方配制不含金银花和茵陈的阴性样品，制备供试品溶液进行测定，结果在绿原酸对照品色谱峰相应的保留时问内，阴性样品无色谱峰出现。
3.2定量限与检测限
分别精密吸取绿原酸对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，观察信号为噪音水平10倍时，进样量为3.408ng，即定量限为3.408ng，；观察信号为噪音水平3倍时，进样量为0.852ng，即检测限为0.852ng。
3.3线性与范围
分别精密量取对照品贮备液（22.25ug/mL）0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4mL于10mL量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，得相应浓度的对照品溶液，依法测定并记录峰面积，结果表明，进样量在0.0440-2.8186ug范围内，峰面积与进样量有良好线性关系（r=0.9999）。
3.4精密度试验
吸取对照品溶液20uL，注入液相色谱仪，重复进样6次。平均峰面积为892850，RSD%=1.35，试验结果表明本方法具有良好的精密度。
3.5重复性试验
精密称取龟等膏样品6份，进行绿原酸的含量测定，平均含量为0.04093，RSD%=1.62，结果表明本方法具有良好的重复性。
3.6稳定性试验
精密吸取龟等膏供试品溶液各20uL，于0.2.4.6.8h测定绿原酸的峰面积，结果为1285157}RSD%=1.23%，结果表明供试品溶液在8h内稳定。
3.7加样回收率试验
精密称取已测定含量的同一批号样品9份，分别加入绿原酸对照品，依法测定，试验结果表明，本法回收率在95.26%-99.36%之间（平均回收率为96.94%）。
3.8样品测定
对3批龟等膏中绿原酸的含量进行测定，结果表明：3批样品中绿原酸的含量均不少于0.015%，符合规定。
4.讨论
中药学是我国的国粹，已经发展了商洽年的历史，制药技术已经相对较为成熟。但是关于大规模的工厂化生产模式来讲，中成药的制药标准和质量检测要求还相对较弱，给一些不法商家带来了可乘之机，在很大程度上影响了我国中成药市场的健康稳定发展。为此我国今年来加强了对中成药质量检测的管理，并要求采取有效的检测手段来对药物中的主要成分含量进行检测。在此情况下，一些新的含量检测技术逐渐被研发并应用在中成药药物含量检测中，HPLC法就是其中较为典型的一种。在龟苓膏的生产中，绿原酸的含量是否达标对于其疗效有着很大影响，为此非常有必要对其进行含量测定，而HPLC法正是一种非常有效的含量测定方法。
4.2不选用梓醇作为测定含量标准的原因
在对龟苓膏的质量进行检测时，之所以选择对其绿原酸含量进行测定，而不选择对其梓醇含量进行测定，是因为梓醇作为地黄的重要成分，在加工的过程中很容易受温度的影响而发生分解和破坏，含量的成分变化程度较大，若对梓醇含量进行测定，无法保证药品质量检测的精度。为此本研究中决定以绿原酸作为含量检测成分。
4.3有待改进与思考的问题
土茯苓为百合科光叶菝葜的干燥根茎，具有清热解毒、除湿止痒、利关节之功效，传统用于治疗梅毒、淋浊，现代多用于治疗牛皮癣、泌尿系统感染。其化学成分主要为黄酮、皂甙、多糖等。其中脂溶性部分的有效成分主要是β-谷甾醇、柚皮素、白藜芦醇、落新妇甙、异落新妇甙、异黄杞甙等。水溶性成分主要是多糖和皂甙。落新妇甙具有抗炎、镇痛的药理作用，是处方有的。由于土茯苓为处方中的君药，故应选落新妇甙作为含量测定的指标。但由于土茯苓中提取的落新妇甙并不稳定存在于土茯苓中，且因产地！药材的不同而有差异，因此，选用落新妇甙作含量测定存在较大困难，具体的研究工作有待今后再作详细探讨。
另外，地黄是处方中的君药，虽然梓醇的稳定性较差，作为质量控制指标不很理想，但可否将地黄甙D作为含量测定指标之一，也是今后的研究课题。
4.4本文研究结果
通过本文的试验研究可以发现，在对龟苓膏的绿原酸含量进行检测时，采取HPLC法是非常可行的。其无论是在精密度试验、重复性试验、稳定性试验或是加样回收率试验中，都表现出非常好的重现性，并且操作方便易行，结果显示较为迅速，非常适合在龟苓膏的生产与质量检测中使用。
5.结束语
绿原酸含量测定方法的实验研究结果显示：通过对该测定方法的精密性、稳定性、重复性、加样回收率、样品测定以及金银花药材中绿原酸的含量测定等项目研究，表明该含量测定方法可作为龟等膏质量控制指标之一。
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