API20E鉴定志贺氏菌和沙门氏菌的体会

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【摘要】目的评价API 20E在肠道致病菌鉴定中的应用。方法应用API 20E、国产细菌微量生化鉴定管对7株阳性菌(3株宋内氏志贺氏菌,3株福氏志贺氏菌,1株伤寒沙门菌)进行鉴定并做比较,利用血清学方法对鉴定结果进行验证。结果api20e鉴定结果比国产微量生化反应管准确、直观。结论API20E系统在志贺氏菌和沙门氏菌鉴定方面使用较为满意,可作为一种适用于常规细菌鉴定的较为可靠的方法。

【关键词】API微量生化鉴定管志贺氏菌沙门氏菌

中国图分类号:R117文献标识码:A 文章编号:1005-0515(2010)08-069-03

Experience of the application of API20E in the identification of Shigella and Salmonella

ZHU XiaohuaCHEN Chunmei,WANG Rongtang GU Xueying

.(Center for Disease Control and Prevention of Yandu in Yancheng,Yancheng 224002,China)

【Abstract】ObjectiveTo evaluate the API 20E in the application of the intestinal bacteria identified. MethodsUse the API 20E and China-made micro-bacteria biochemical test-tube to identify the 7-positive bacteria(three Shigella Sonnei bacteria,three Shigella Flexneri bacteria,one Salmonella Typhi) and do a comparison,confirm the identification results by the serological methods. ResultsThe results of the identification of API20E were absolutely correct,it wasmore accurate and more intuitive than the biochemical test-tube. ConclusionAPI20E system was used to identify Shigella and Salmonella bacteria,it is reliable to be applied as a routine way to the identification of the bacteria.

【Key words】APImicro biochemicaltest-tubeShigellaSalmonella

人类感染的致病性微生物种、属的逐年增加,国内外新的生化鉴定系统不断推出,以传统试验来鉴定微生物已不能适应快速、准确诊断的需要,成套鉴定系统及编码鉴定方法,使细菌鉴定简易化,微量化和快速化。在目前众多的细菌鉴定系统中,API细菌鉴定系统在世界范围内应用较广,已被国际微生物学家所公认。我们就国产细菌微量生化鉴定管与API微生物鉴定系统进行比较,现报告如下:

1材料与方法

1.1材料API20E生化反应试条(法国海里埃公司生产);API-Plus鉴定软件(法国梅里埃公

司生产);国产细菌微量生化鉴定管(杭州天和公司);志贺氏菌属诊断血清22种(宁波天润生

物药业有限公司);沙门氏菌属诊断血清60种(宁波天润生物药业有限公司),。

1.2对象7株阳性菌株

1.3 检验过程 将7株阳性菌种单个分离纯培养后,制备菌悬液用 API方法进行生化实验,同时直接挑取分离后的菌种用国产生化鉴定管GYZ-15e进行试验比对,培养18～24h后观察结果,同时进行血清学凝集验证。

2实验结果

2.1国产生化鉴定管GYZ-15e对7株菌种鉴定结果 见表1

2.3血清学验证结果见表3

表3血清学验证实验结果

编号血清凝集结果鉴定结果

1志贺氏多价++ 宋内氏I相++宋内氏志贺菌

2志贺氏多价++ 宋内氏I相++宋内氏志贺菌

3志贺氏多价++ 福氏Ⅱ型++ 群3,4++福氏Ⅱa志贺氏菌

4A-F多价++ Hd因子血清+ vi因子++ O9因子++ 生理盐水对照-伤寒沙门氏菌

5志贺氏多价++ 福氏Ⅳ型++ 群3,4+福氏Ⅳa志贺氏菌

6志贺氏多价++ 福氏Ⅳ型++ 群3,4+福氏Ⅳa志贺氏菌

7志贺氏多价++ 宋内氏I相++宋内氏志贺菌

3讨论

微生物检验质量水平判断的重要标准是准确性,质控菌株鉴定是验证试验方法准确性的有效手段[1]。微生物在新陈代谢、生长繁殖过程中,某些形状会发生变异,造成我们鉴定上的困难,国产细菌生化微量鉴定管因其使用方便,价格便宜,深受微生物检验工作者尤其是基层微生物检验人员的欢迎。但是传统的手工鉴定方法接种量大,各生化指标需要一一接种,手续繁琐,而且由于微量管本身质量或接种技术的关系,接种不能定量,对反应结果的判定常常因人而异,特别是对于微生物学检验经验不足者,更是难以适应。

随着被微生物学家的广泛使用,操作简便,高效的API系列很快成为全球性的鉴定标准。做为细菌鉴定的国际金标准,API系列在细菌学领域对传统的技术进行了一次标准化、微量化的彻底变革,使用操作简单,判断结果容易,鉴定更加简单,快速和可靠。

API 20 E是第一个由生化试验条和细菌鉴定数据库组合而成的鉴定系列, API还建立了一种独特的计算方法,即数值鉴定法,根据这种方法设计出相辅的计算机软件,使鉴定更加容易和准确。在进行生化实验时,容易操作和控制质量,便于观察生化反应结果,可实现微量化、标准化、商品化。

因为其操作简便,只要分离出单个菌落后,染色涂片,再做氧化酶试验或触酶试验等简单的鉴定方法,就可选定鉴定试条,再按说明书要求制备悬液,用滴管加样,基本保证定量化,经培养18～24h后,阅读并判定结果即可,大大提高了工作效率。对于该方法鉴定结果的可靠性,从本试验可观察到,除了需要用血清学试验分型的菌株外,对细菌可鉴定至“种”的水平,其准确率达100%,故结果是十分可靠的。但是,在使用时,必须了解和注意以下事项,才能得到准确的鉴定结果:①制备菌悬液的细菌必须是纯种的。这就要求严格掌握好无菌操作和平板划线等基本功,否则,既影响鉴定结果也影响工作效率。②认真进行结果的分析。API判别系统对判定出的结果具有专家系统功能,当某个鉴定结果未能确定时,其会提示该做何种补充试验。依照本研究的结果,对于该系统鉴定细菌的结果,如Id%>90%,且T>0.60,则鉴定结果准确,可直接报告;如Id%90%且T>0.60,则怀疑菌种不纯,需重新分纯鉴定才能得到准确结果。③为了能良好掌握系统所用的软件,国内用户必须要提高工作人员的外语水平,才能灵活应用该系统的功能,充分发挥其功能作用。

参考文献

[1]张秀珍.当代细菌检验与临床[M].北京:人民卫生出版社,1999:62.