生鲜乳金黄色葡萄球菌污染来源调查及其耐药性

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摘 要：为考察贵阳市生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染环节及其对药物的敏感性，采集贵阳市周边5个大型奶牛场及一个牛奶加工厂的乳区棉签拭子75份和各生产环节奶样310份，按国家标准（GB 4789.10―2010）分离鉴定金黄色葡萄球菌，并测定其对9种常用抗菌药物的敏感性。结果表明：生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染主要来源于牛内；传统的“弃前三把奶”工艺对降低生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染的作用不明显；规范的乳区消毒可以有效地降低外环境金黄色葡萄球菌对生鲜乳安全的影响；所调查奶牛场的金黄色葡萄球菌对磺胺类、β-内酰胺类和四环素类药物的耐药水平较高。

关键词：金黄色葡萄球菌；污染；检出率；耐药性；多重耐药

中图分类号：S855.1+ 2 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.05.023

金黄色葡萄球菌是奶牛炎最主要的传染性致病菌，也是影响生鲜乳质量的重要因素[1]。近年来， 由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒越来越多，而中毒食品以乳和乳制品为主[2]。我国也常发生金黄色葡萄球菌食物中毒，是卫生防疫部门重点监测项目[3]。我国最新国标规定生鲜乳中不得检出金黄色葡萄球菌。乳源金葡菌耐药性不仅会影响牛炎的治疗而且也影响乳生产企业的效益，其耐药性也会通过乳传递给人，增加人在相关感染时治疗失败的风险。从贵阳市周边5个大型奶牛场和一个牛奶加工厂的各生产环节采集乳样，进行生鲜乳金黄色葡萄球菌的污染来源及其耐药性研究，以期为生鲜乳生产质量控制和被调查奶牛场炎治疗提供帮助。

1 材料和方法

1.1 材 料

1.1.1 试剂 7.5%氯化钠肉汤，金黄色葡萄球菌显色培养基，贝尔德-帕克氏培养基基础，亚碲酸盐卵黄增菌液，60%甘油，16种葡萄菌生化鉴定管，MH肉汤。

1.1.2 药 物 青霉素、红霉素、阿莫西林、头孢噻呋、环丙沙星、恩诺沙星、强力霉素、土霉素、氟苯尼考、磺胺二甲嘧啶。

1.1.3 质控菌株 金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC25923，购买自中国菌种资源保藏中心。

1.1.4 主要设备 超净工作台，高压灭菌锅，恒温培养箱，恒温干燥箱，电子天平等。

1.2 方 法

1.2.1 样品的采集 乳区棉签拭子采集：牛乳区温水洗涤热敷、按摩，聚维酮碘消毒，灭菌后棉签擦拭，置入亚碲酸盐卵黄增菌液内保存；其余为第1把奶、第4把奶、牛场集奶罐、运奶车、加工车间贮奶罐、半成品和成品奶样，共计385份（表1）。

1.2.2 金黄色葡萄球菌的分离鉴定 参照GB4789.10―2010 ，进行分离鉴定。

1.2.3 药物敏感性试验 采用微量肉汤稀释法测定金黄色葡萄球菌对常用10种抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC），按美国临床实验室标准化委员会（CLSI）2009版推荐的判定标准及中国兽医药品监察所标准进行耐药性统计。

2 结果与分析

2.1 金黄色葡萄球菌分离鉴定结果

在总计为385份的样品中，共分离鉴定出金黄色葡萄球菌88株，分离率为22.86%。金黄色葡萄球菌的检出率高低依次为第1把奶、第4把奶、奶牛场的集奶罐、运奶车、加工车间贮奶罐；加工车间的成品和半成品奶均未查到金黄色葡萄球菌，乳区棉签拭子的检出率低于奶样品。

2.2 生鲜乳中金黄色葡萄球菌耐药性检测结果

分离到的88株金黄色葡萄球菌对9种常用抗菌药物都具有不同程度的耐药，其耐药顺序为：磺胺二甲嘧啶、青霉素、强力霉素、土霉素、头孢噻呋、氟苯尼考、恩诺沙星和环丙沙星。这表明分离菌对磺胺类、β-内酰胺类和四环素类药物的敏感性较低。

2.3 金色葡萄球菌的多重耐药情况

本次试验中分离的88株金黄色葡萄球菌均表现为多重耐药，最少的为3重，占总菌株数的11.36%；最高的为7重，占总菌株数的4.55%；多重耐药谱主要集中在4重（39.77%）和5重（34.09%）之间（图1）。

3 结论与讨论

（1）本试验总计385份样品，共分离出金黄色葡萄球菌88株，检出率为22.86%。该菌在不同国家及地区的生鲜乳中检出率为12%～79%[6-7]。我国生鲜乳中金葡菌的检出率主要在15%～38%[8-9]。金黄色葡萄球菌的检出率高低顺序说明：该菌在牛乳腺内定植较为普遍，正常状态下，约3成牛内有金黄色葡萄球菌的存在。随着奶量的不断汇集，牛场集奶罐、运奶车、加工厂贮奶罐的检出率逐渐降低，说明生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染主要来源于牛内。

（2）为降低生鲜乳中细菌污染，传统工艺为弃前三把奶，然后才收集鲜奶，试验结果表明：弃前三把奶对降低生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染作用不明显（10%左右），实际意义不大，却增加了弃奶时人手对污染的机会，故“弃前三把奶”工艺有待进一步研究和评估。

（3）乳区棉签拭子的检出率明显低于其他奶样，说明规范的乳区消毒可以有效地降低外环境致病菌对生鲜乳安全的影响。但是，在使用聚维酮碘消毒时奶牛出现明显的刺激性疼痛反应，此疼痛应激反应对奶牛产量的影响和消毒药在鲜奶中残留的风险有待进一步研究。生鲜乳在经过加工车间加工后，无论成品或半成品中均没有检出金黄色葡萄球菌，说明该加工厂的奶消毒工艺可靠。

（4）本次调查结果中，5种药物的耐药率高于85%，其中磺胺二甲嘧啶耐药率达到100%，青霉素耐药率也高达95.45%，头孢噻呋、强力霉素和土霉素的耐药率也均在85%以上，说明所调查的奶牛场对磺胺类、β-内酰胺类和四环素类药物的耐药水平较高，与王冰等[10]、燕霞等[11]报道的结果相似。建议奶牛场建立细菌药敏动态数据库，根据药物敏感性，实时调整抗感染药物的使用方案，以提高疗效、降低用药成本、减少治疗性弃奶量和减少乳中药物残留的可能。

参考文献：

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[3] 史红. 金黄色葡萄球菌耐药性及肠毒素分型研究[J]. 动物医学进展，2012，33（6）：87-90.

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[10] 王冰，刘明春，吴聪明，等.呼和浩特地区奶牛炎金黄色葡萄球菌的耐药性调查[J].中国兽医杂志，2007， 43 （3）：30-32.

[11] 燕霞，陈俭，张丽佳，等.浙江省主要奶牛养殖区炎致病菌金黄色葡萄球菌的耐药性[J].福建农林大学学报，2012，41（6）：633-636.