HPLC法测定羌黄祛痹颗粒中异欧前胡素的含量

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摘要：目的 建立羌黄祛痹颗粒中异欧前胡素含量测定的方法。方法 采用超声处理，高效液相色谱法，C18柱，以乙腈-水（60∶40）为流动相，检测波长为315 nm。结果 异欧前胡素在1.19～9.51 μg/ml范围内，呈良好线性（r=0.99995），加样回收率平均为97.00%，重复性RSD%为0.70%。结论 采用超声处理hplc法测定羌黄祛痹颗粒中异欧前胡素方法可行。

关键词：羌黄祛痹颗粒；异欧前胡素；高效液相色谱法

Determination of the Content of HPLC in the Granules of Qiang Huang Huang Jie Tong Granules by HPLC

CHEN Mei-ling，LIU Qin，WU Cui，ZHANG Juan，YAO Qing，XU Gui-hong

（Jiangsu Kangyuan Pharmaceutical Co.，Ltd.，Lianyungang 222047，Jiangsu，China）

Abstract：Objective To establish a method for the determination of the content of different components in the granules of Qiang Huang Huang Jie Tong.Methods Ultrasonic treatment，HPLC，C18 column，acetonitrile water（60：40）as mobile phase，detection wavelength of 315 nm.Results Isoimperatorin in 1.19～9.51 μg/ml range in a good linear（r=0.99995），the average recovery rate was 97.00%，the repeatability RSD% is 0.70%.Conclusion By ultrasonic treatment HPLC method for the determination of the Yellow Qubi granule isoimperatorin method is feasible.

Key words：Qianghuang Qushu Granule；Isoimperatorin；High performance liquid chromatography

羌黄祛痹颗粒由片姜黄、羌活、当归、赤芍、海桐皮、白术、甘草等七味药材组成，具有祛风除湿，散寒化瘀，通络止痛的作用。适用于肩痹（肩周炎）属风寒湿痹证者，症见肩部疼痛，肩不能举，肩部怕冷，得暖痛减等症，舌质淡，苔白，脉弦或弦细。异欧前胡素是方中羌活药材中有效成分之一，具有抗炎、抗菌和镇痛等活性[1-2]，许多制剂把异欧前胡素作为质量控制标准之一，所以本文采用高效液相法羌黄祛痹颗粒中异欧前胡素的含量进行研究。

1 仪器与试药

1.1仪器 高效液相色谱仪（Agilent 1100），Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），KQ-250DV超声波清洗仪。

1.2试药 羌黄祛痹颗粒由江苏康缘药业股份有限公司提供，异欧前胡素对照品为中国食品药品检定研究院所提供（批号：110827-201611），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法学考察[3]与结果

2.1色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（60∶40）[4]；柱温：30℃；检测波长：315 nm；流速：1.0 ml/min。

2.2对照品溶液的制备 精密称取异欧前胡素对照品适量，加入乙醇制成每1 ml含2 μg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备[3] 取装量差异项下的本品，研细，取0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入乙醇25 ml，超声处理（250 W，40 kHz）30 min，放冷，称重，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

3 方法学试验

3.1加样回收率试验 取已知含量的样品（异欧前胡素含量：0.594 mg/g）约0.1 g，精密称定，平行称取9份，3份一组，置锥形瓶中，各组分别精密加入异欧前胡素对照品溶液（每1 ml含异欧前胡素0.0594 mg）各1.5 ml、1.0 ml和0.5 ml，加入乙醇25 ml，超声处理（250 W，40 kHz）30 min，放冷，称重，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，测定，计算异欧前胡素的平均回收率为97.00%，RSD为0.60%，该方法回收率良好。

3.2重复性试验 取同一样品，按制备供试品溶液方法制备，平行制备6份，测定其结果分别为0.590 mg/g、0.590 mg/g、0.598 mg/g、0.588 mg/g、0.595 mg/g、0.590 mg/g，算6个测定结果的RSD为0.70%，表明该方法重复性良好。

3.3精密度试验 精密吸取异欧前胡素对照品溶液重复进样6次，计算其峰面积RSD为0.40%，结果表明了仪器精密度良好。

3.4专属性验证 阴性溶液的制备：取按处方及制备工艺制成不含羌活的阴性供试品。再按供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液，精密吸取对照品溶液、阴性供试品溶液、供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1。结果表明，阴性供试品溶液对异欧前胡素测定无干扰。

图1 色谱图

3.5线性关系考察 精密称取异欧前胡素对照品适量，制得一定浓度的标准品储备液（浓度为59.44 μg/ml）。取储备液0.5 ml，1 ml，2 ml，3 ml，4 ml分别加甲醇定容至25 ml，得浓度为1.19 μg/ml、2.38 μg/ml、4.76 μg/ml、7.13 μg/ml、9.51 μg/ml的溶液，分别进样10 μl，以进样浓度为横坐标（X），异欧前胡素峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线。结果表明，异欧前胡素在1.19～9.51 μg/ml范围内呈良好线性关系，线性回归方程为y =30.233x+0.7099，r=0.99995。

3.6稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h进样，记录峰面积。RSD为0.4%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

4 讨论

4.1通过参考文献及采用二极管阵列检测器对照品溶液的进行全波长扫描，对检测波长进行了选择，实验表明，异欧前胡素在315 nm处吸收峰灵敏度高，其他色谱峰均不干扰测定，故选择315 nm作为检测波长[5]。

4.2提取方法的考察 采用不同提取溶剂（甲醇、乙醇、乙酸乙酯）、不同的提取方法（回流、超声）和不同提取时间（15 min、30 min、60 min）等因素对提取结果的影响。最终确定提取方案为：乙醇超声处理30 min。本法简便，结果准确，适用其质量标准。

参考文献：

[1]鱼江，封家福，曾邦国.HPLC法测定羌活药材中羌活醇和异欧前胡素含量的效果分析[J].重庆医学，2014（35）.

[2]王婧.HPLC法同时测定祛喘胶囊中木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素的含量[J].中国药师，2015，18（10）：1832-1834.

[3]代磊.HPLC法同时测定川芎茶调散中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].安徽医药，2013，17（9）：1502-1503.

[4]曹恒涛，赵江红.HPLC 法测定天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].中民族民间医药，2015（12）：5-6.

[5]谭润雅，雷鹏，周政，等.HPLC法同时测定枸橘中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].中药新药与临床药理，2016（2）：255-258.