浅谈卫生微生物检验培养基的质量控制
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【中图分类号】R117【文献标识码】A【文章编号】1005-2720(2010)08 - 129 - 01
培养基是卫生微生物检验的必须材料。培养基质量的好坏、配制使用和保存是否正确,直接影响结果的准确性。笔者对卫生微生物检验培养基的质量控制方法,报告如下。
1 干粉培养基的储存
干粉培养基应保存在阴凉干燥处,避免阳光直射。开瓶后的干粉培养基易吸湿,应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查,如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查,如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。
2 培养基的制备
称量时要用专用的角匙,避免交叉污染。复水时不得用铜锅或铁锅,以防有离子混入培养基中,影响微生物的生长。含有琼脂粉的培养基,在加热溶解之前可以浸泡数分钟,加热培养基时一定要进行搅拌。为避免烧焦和沸腾溢出,对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热。一般培养基采用湿热灭菌,即高压蒸汽灭菌,通常是121℃ 15min;含糖或特殊培养基,按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH值,应在25℃温度下采用精密酸度计进行测量,固体琼脂培养基应以特殊的胶体表面测量电极进行测量。使用过程中,如果需要调整培养基的pH,应用lmol/L NaOH或lmol/L HCL调整,注意不可反复调pH,否则会影响培养基的渗透压[1]。灭菌以后的培养基应该迅速冷却至所需温度并妥善保存。
3 培养基的质量测试
3.1 外观控制制备好的培养基应有相应的颜色,一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化,是否蒸发/脱水。
3.2 污染控制从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验),确定无微生物生长方可使用。
3.3 性能测试(1)测试菌株:测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株,应来自国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株,菌株的选择方法可参考卫生行业标准WS/T232-2002《商业性微生物培养基质量检验规程》。(2)定量测试方法:常用改良Miles-Misra法。测试菌株、过夜培养物10倍递增稀释;测试平板和参照平板划分为4个区域并标记;从最高稀释度开始,分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域;将稀释液涂满整个1/4区域,37℃培养18小时;对易计数的区域计数,按公式计算生长率(生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数/参考培养基平板上获得的菌落总数)。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7,选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1。(3)半定量测试方法:常用改进的划线接种法。将平板分ABCD四区,共划16条线,平行线大概相隔0.5cm,每条有菌落生长的划线记作1分,每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分,没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分,分数加起来得到生长指数G。目标菌在培养基上应呈现典型的生长,而非目标菌的生长应部分或完全被抑制,目标菌的生长指数G大于6时,培养基可接受。④定性测试方法:常用平板接种观察法。用接种环取测试菌培养物,在测试培养基表面划平行直线。按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养,目标菌应呈现良好生长,并有典型的菌落外观、大小和形态,非目标菌应是微弱生长或无生长。
总之,做好培养基的储存、制备和质量测试等方面的质量控制是保证卫生微生物检验结果准确的关键。
【参考文献】
[1] 刘春梅,蔡芷荷,吴清平.食品卫生微生物检验中培养基的质量控制.中国卫生检验杂志,2007,17(4):700-701.