研究当归对血虚小鼠的抗疲劳作用
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疲劳属中医“虚损”范畴,中医认为精(津)血为体力产生的物质基础,它的生化和运行与中医脾、肾、肝、心有密切关系,人的耐力亦由此而生。尽快消除疲劳,提高机体体质,中医药有很大优势。当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels的干燥根具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠等功效。本文采用化学药物损伤法造成小鼠血虚模型,研究当归对血虚模型小鼠的影响。
1 器材
1.1 药品与试剂
当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels,生品,购于北京崇光饮片厂,产地甘肃,取当归500 g,加10倍量的水,开始煎煮。第1次1 h,第2次30 min,第3次30 min。合并煎液,过滤蒸发浓缩,然后放入烘箱烘干成粉末。 最终1 g当归粉末相当于原药材3.50 g。
全血乳酸试剂盒,南京建成生物工程研究所产品,批号20050615;尿素氮试剂盒,南京建成生物工程研究所产品,批号20050615;环磷酰胺,上海华联制药有限公司产品,批号031205。
1.2 仪器
SWELAB血球计数仪,Boule Medical AB 公司产品;瑞典stockholmUV757CRT紫外可见分光光度计,上海精密科学仪器有限公司产品。
1.3 动物KM种小鼠,雌雄各半,体重(22±2)g,由中国医学科学院动物中心提供,合格证号:SCXK (京) 2004-0001。
2 方法
小鼠自然饲养3~4 d,随机分成5组:正常对照组、血虚模型组、当归水煎液低剂量组1.5 g/kg(按生药量计)、当归水煎液中剂量组3 g/kg、当归水煎液高剂量组6 g/kg,每组12只。给药组按给药剂量连续灌胃14 d,1次/d,对照组和模型组则灌胃给予相等体积的生理盐水。除正常对照组外,其余4组小鼠于第5 d开始给药1 h后,分别经腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg,连续注射3 d[1]。正常对照组同时注射等量的生理盐水。
2.1 外周血象测定
于末次给药后30 min,眼眶取血,测定小鼠红细胞总数(RBC)、白细胞总数(WBC)和血红蛋白含量(HGB)。
2.2 小鼠负重游泳实验
末次给药后30 min后,鼠尾根部负荷6% 体重的铅丝,置于游泳箱中游泳(水深35 cm, 水温25℃),记录小鼠自游泳开始至死亡的时间。以小鼠10 s内无法再浮出水面为依据,来判断动物死亡[2,3]。
2.3 血乳酸(LAC)的测定
末次给药30 min后小鼠尾部负重(体重4%), 然后将其放入水深35 cm, 水温(30±0.5)℃游泳箱中游泳10 min。休息15 min后,用毛细玻璃管眼球采血20 μl,用全血乳酸测定试剂盒进行血乳酸测定。
2.4 血尿素氮(BUN)的测定
末次给药30 min后, 将小鼠放入水深35 cm, 水温(30.0±0.5)℃游泳箱中不负重游泳90 min,休息60 min后,拔眼球采血0.5 ml(不加抗凝剂),依照血清尿氮素试剂盒说明书操作。于520 nm下,30 min内测定各管吸收度,换算为血尿素氮含量,依照试剂盒说明书操作测定BUN含量。
3 结果
3.1 体征与体重造模小鼠非常行动迟缓,眼睛暗淡无光、血色暗红。正常对照组和给药组小鼠活动灵活, 皮毛光泽, 鼠尾粉红。
当归水煎液对血虚小鼠体重的影响表1所示,给药7 d后,各组间体重仍无差异。但第14天,与正常组比较,模型组小鼠体重明显下降(P
3.2 当归水煎液对血虚小鼠RBC,WBC和HGB的影响
血象的改变是血虚最明显的症状。当归活血补血,能明显改善血虚小鼠的外周血象。结果见表2。表2 当归水煎液对血虚小鼠血象的影响(略)
从表2可看出,与正常对照组比较,模型组小鼠血象显着降低(P
3.3 当归水煎液对血虚小鼠游泳时间的影响
实验结果如表3所示,血虚小鼠体力下降, 与正常组比较,游泳时间明显缩短。当归水煎液高剂量组能显着延长血虚小鼠游泳时间, 且与模型组比较, 有非常显着性差异(P< 0.01)。表3 当归水煎液对血虚小鼠游泳时间的影响(略)
3.4 当归水煎液对血虚小鼠LAC的影响
LAC是评价剧烈运动时机体疲劳程度最常用的生化指标。当归水煎液对小鼠负重4%游泳10 min,休息15 min后LAC的影响如表4所示,与正常组对比,血虚小鼠在游泳后LAC显着性增加(P< 0.01)。与模型组比较,当归水煎液高剂量组能明显降低血虚小鼠运动后的LAC(P< 0.05)。表4 当归水煎液对血虚小鼠LAC的影响(略)
3.5 当归水煎液对血虚小鼠BUN的影响
BUN与机体机能、疲劳程度以及负荷量的大小呈密切正相关,因此可作评定运动量的指标[4]。当归水煎液对小鼠不负重游泳90 min,休息60 min后BUN的影响如表5所示,与正常组对比,血虚小鼠在游泳后BUN显着性增加(P< 0.01)。与模型组比较,当归水煎液高剂量组能明显降低运动后的BUN (P< 0.05)。表5 当归水煎液对血虚小鼠BUN的影响(略)