荷梗中的细胞毒活性生物碱
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[摘要] 研究植物莲Nelumbo nucifera Gaertn干燥茎的生物碱类成分及其细胞毒活性，为进一步开发利用荷梗提供依据。采用离子交换树脂、硅胶和Sephadex LH-20柱色谱等方法分离纯化，并运用波谱方法对所分离的化合物进行结构鉴定。采用MTT法对所分离得到的化合物进行HL-60癌细胞毒活性实验。从荷梗总生物碱提取物中分离鉴定了15个生物碱类化合物，分别为阿西米洛宾（1）、异乌药碱（2）、N-乙酰基去甲杏黄罂粟碱（3）、厚壳桂素（4）、velucryptine（5）、pycnarrhine（6）、鹅掌楸碱（7）、荷叶碱（8）、降荷叶碱（9）、杏黄罂粟碱（10）、N-甲基阿西米洛宾（11）、乌药碱（12）、N-去甲杏黄罂粟碱（13）、N-甲基乌药碱（14）、观音莲明（15）。化合物1～7，12～15为首次从荷梗中分离得到。化合物2～6为首次从莲科植物中分离得到。在样品溶液浓度为1×10-5 mol・L-1的条件下，化合物7～10，13，14对HL-60癌细胞体外生长的抑制率分别是51.36%，59.09%，52.51%，53.93%，51.43%和64.31%，表明上述化合物对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞具有较明显的体外细胞毒活性。
[关键词]莲；荷梗；生物碱；细胞毒活性
莲属于睡莲科Nymphaeaceae 莲亚科Subfam. Nelumboideae，为多年生水生草本植物，在我国南北各省都有分布。其干燥叶具有清暑化湿、升发清阳、凉血止血之功效，主要用于暑热烦渴、暑湿泄泻、脾虚泄泻、血热吐衄、便血崩漏等[1]。国内外学者已对荷叶的化学成分进行了系统的研究，发现其主要含有生物碱类、黄酮类、有机酸类成分[2-3]。而荷梗的化学成分研究报道较少，作者对其生物碱类成分进行了较深入的研究，发现了一个新的假苄基异喹啉型生物碱[4]。在此基础上，进一步对其生物碱类成分进行了研究，从其总生物碱提取物中分离得到15个化合物。经波谱方法分别鉴定为阿西米洛宾（1）、异乌药碱（2）、N-乙酰基去甲杏黄罂粟碱（3）、厚壳桂素（4）、velucryptine（5）、pycnarrhine（6）、鹅掌楸碱（7）、荷叶碱（8）、降荷叶碱（9）、杏黄罂粟碱（10）、N-甲基阿西米洛宾（11）、乌药碱（12）、N-去甲杏黄罂粟碱（13）、N-甲基乌药碱（14）、观音莲明（15）。其中，化合物1～7，12～15为首次从荷梗中分离得到。化合物2～6为首次从莲科植物中分离得到。采用MTT法对所分离得到的15个化合物进行细胞毒活性的初筛，结果表明：化合物7～10，13，14对HL-60癌细胞具有较明显的体外细胞毒活性。在1×10-5 mol・L-1的条件下，对HL-60癌细胞体外生长的抑制率分别是51.36%，59.09%，52.51%，53.93%，51.43%和64.31%。
1材料
熔点用X-4数字显示显微熔点仪（温度未校正）；电喷雾电离质谱（ESI-MS）使用HP-1100LC/API/MSD系统；Bruker AV-300和AV-500核磁共振仪（TMS内标）；循环水真空泵 DLSB-10L（巩义市英峪仪器厂）；KQ-300 超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；柱色谱用硅胶（100～200，200～300 目，青岛海洋化工厂）；Sephadex LH-20（Pharmacia公司）；IRC-50型离子交换树脂（国药集团化学试剂有限公司）；所用试剂均为分析纯。
实验药材于2005年10月采自福建省建宁市，经建宁市科技局姜景魁工程师鉴定为莲科植物N.nucifera的干燥茎。凭证样品（N200510）保留在中国药科大学天然药物化学教研室。
2提取与分离
荷梗干燥样品30 kg经适当粉碎后，用0.5%稀盐酸溶液浸提3次，每次48 h，浸出液合并，滤过，通过IRC-50型阳离子交换树脂，树脂水洗，阴干后用浓氨水碱化，风干，以氯仿索氏回流至生物碱提尽，提取液合并，减压浓缩，得浸膏55 g。浸膏用少量混合溶剂溶解，加入60 g（200～300 目）硅胶均匀拌样，挥干溶剂后，用600 g硅胶（200～300 目）进行柱色谱分离，以氯仿-甲醇作为洗脱剂进行梯度洗脱（1∶0～0∶1），合并TLC行为大致相同的组分，得到8 个不同极性段组分：A（100∶0），B（50∶1），C（20∶1），D（10∶1），E（5∶1），F（3∶1），G（1∶1），H（0∶1）。对组分A（2.6 g）进一步硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮（3∶1～1∶1）进行梯度洗脱，得到5个流分FrA1～FrA5，FrA1硅胶柱色谱以石油醚-乙酸乙酯（30∶1）洗脱，得化合物1（18 mg），FrA2硅胶柱色谱以二氯甲烷-丙酮（50∶1）洗脱，得化合物11（205 mg），FrA4经Sephadex LH-20 柱色谱（甲醇洗脱）分离纯化，得到化合物3（11 mg），9（35 mg）。对组分B（3.1 g）进一步硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（3∶1）作为洗脱溶剂反复进行柱色谱分离，得到化合物7（130 mg），13（28 mg），14（13 mg）。对组分C（1.5 g）进一步硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮（5∶1）和氯仿-甲醇（15∶1）作为洗脱溶剂反复进行柱色谱分离，再经Sephadex LH-20 柱色谱（甲醇洗脱）分离纯化，得到化合物2（20 mg），12（9 mg）。对组分D（8.7 g）进一步硅胶柱色谱分离，以氯仿-丙酮（4∶1～1∶1）梯度洗脱得到4个流分FrD1～FrD4，FrD1首先经SephadexLH-20柱色谱初步分离，以氯仿-甲醇（1∶1）为洗脱溶剂，然后以石油醚-丙酮（2∶1）作为洗脱溶剂反复进行硅胶柱色谱分离，得到化合物8（1 500 mg），FrD2以氯仿-甲醇（8∶1）作为洗脱溶剂反复进行硅胶柱色谱分离，得到化合物10（6.6 mg），15（9.2 mg）。对组分E（2.3 g）进一步硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇（5∶1～1∶1）梯度洗脱得到3个流分FrE1～FrE3，FrE1首先以氯仿-丙酮（3∶1）为洗脱溶剂反复进行硅胶柱色谱分离，再经SephadexLH-20柱色谱（甲醇洗脱）分离纯化，得到化合物4（16 mg），FrE3以二氯甲烷-甲醇（2∶1）为洗脱溶剂反复进行硅胶柱色谱分离，得到化合物5（10 mg）。组分F（0.8 g）经Sephadex LH-20 柱色谱（甲醇洗脱）分离纯化，反复重结晶后，得到化合物6（8 mg）。