特发性血小板减少性紫癜患者的血小板研究进展
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇特发性血小板减少性紫癜患者的血小板研究进展范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
摘要：特发性血小板减少性紫癜是一组免疫介导的血小板过度破坏的出血性疾病,是临床上最常见的出血性疾病,目前其发病机制和实验室诊断方法仍是国内外研究重点，本文就其现有的特殊实验室诊断技术作出综述。
关键词：ITP；实验室诊断；自身抗体；蛋白组学特发性血小板减少性紫癜(Idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP)是一组免疫介导的血小板过度破坏的出血性疾病，以广泛皮肤出血及内脏出血、血小板减少、骨髓巨核发育障碍、血小板生存时间缩短及血小板膜糖蛋白特异性自身抗体出现为特征[1]。由于ITP早期并无特征性表现，且缺乏特异性的实验室诊断方法，当前, ITP的诊断主要依据临床表现和骨髓检查 [2]。因此，ITP的早期诊断一直是医学界的难题。近年来，国内外学者试图通过检测ITP患者的血小板来研究建立ITP的实验室诊断方法，而血小板蛋白组学方法更是近年来的研究热点。本文拟就近几年针对ITP患者血小板的最新研究作一综述。
1ITP概述
ITP是临床最为常见的出血性疾病, 欧美国家统计年发病率为(5～20)/10万[2],而我国目前尚缺乏准确流行病学资料，其诊断依据（ICD-10）是：①广泛出血累及皮肤、黏膜及内脏；②多次化验血常规血小板计数减少；③脾脏不大或轻度增大；④骨髓巨核细胞数量增多或正常，伴有成熟障碍；⑤具备以下五项之中一项者：⑴泼尼松治疗有效；⑵脾切除治疗有效；⑶PAIg阳性；⑷PAC3阳性；⑸血小板生存时间缩短；⑥排除继发性血小板减少症。ITP的病因及发病机制迄今未明，目前研究多认为其与体液免疫[2-4]、细胞免疫[5,6]有关。
2ITP患者的血小板抗体
50%~70%的 ITP患者血浆和血小板表面都可以检测到血小板膜糖蛋白特异性的自身抗体。目前认为自身抗体致敏的血小板被单核巨噬细胞系统过度吞噬破坏是ITP发病的主要机制。正常血小板平均寿命为7~11d，而ITP患者血小板的寿命仅40~230min。因为脾脏含有大量的巨噬细胞，可产生高浓度的抗血小板抗体，且血流缓慢可阻留抗体被覆的血小板，因此脾脏成为血小板破坏的主要场所。肝脏和骨髓也是血小板破坏的场所。慢性ITP血小板破坏是由于抗血小板抗体与其相关抗原结合后，被巨噬细胞吞噬所致。急性ITP血小板破坏是由于病毒抗原吸附于血小板表面，并与相应的抗病毒抗体结合，导致血小板被破坏。
2.1 ITP患者的血小板特异性自身抗体ITP被公认为自身免疫性疾病，其患者体内存在着针对血小板的特异性抗原的自身抗体，发现这些特异性抗体必然有助于ITP的诊断。但是，由于血小板自身固有的特性，血小板表达IgG的Fc受体(FcrR 1I型)在每个血小板上大约有1000~2000个，相对较大数量的非特异性结合抗体干扰血小板特异性抗体水平的检测，使得特异性抗体的实验室检测的特异性低[8]。
近年来国内外发展了一系列关于ITP血小板自身特异性抗体检测的方法，其中以单克隆抗特异性俘获血小板抗原试验（Monoclonal antibody immobilization ofplatelet antigen assay，MAIPA）为主要代表。MAIPA的原理是固相化的抗血小板单抗与血小板上相应的抗原决定簇结合后能将后者固相化，然后加入酶标记的另一种抗血小板抗体与固相化的血小板上相应为点结合并显色，显色的深浅与血小板抗体的浓度呈正比[10]。MAIPA法检测血小板特异性抗原特异性的自身抗体特异性较高,对于免疫性与非免疫性血小板减少的鉴别具有较大的意义，有助于ITP的诊断。王述文[11]等利用MAIPA法检测了70例血小板减少性紫癜患者的自身抗体，结果发现免疫性血小板减少患者显著高于非免疫性血小板减少患者。王谦[12]等应用改良MAIPA试验双盲法检测患者血小板膜糖蛋白特异性自身抗体，发现ITP患者血小板特异性抗体阳性率显著高于非免疫性血小板减少患者，血小板特异性抗体水平与血小板数量呈负相关。
但是MAIPA仍存在不足之处，首先不能鉴别特发性血小板减少与继发性免疫性血小板减少，如ITP与系统性红斑狼疮、干燥综合症等的鉴别诊断；其次国内外各实验室的方法有差异，未制定统一标准。因此MAIPA在临床上的应用仍受限制。
2.2 ITP患者的血小板相关抗体上世纪70年代，血小板相关免疫球蛋白（platelet associated immunoglobulin，PAIg）被认为是ITP诊断和预后判断的重要指标。PAIg是病理性免疫反应所产生的针对血小板膜糖蛋白II b/Ilia、Ib/IX、Ia/II a等抗原的自身抗体，其中以PAIgG最为常见。PAIgG的检测分为直接法和间接法，直接法测定血小板PAIgG（包括血小板表面及血小板溶解液），间接法检测血清中的PAIgG。PAIgG检测方法繁多，如血小板悬浮免疫荧光试验、；125F葡萄球菌蛋白A试验等，其中发展较为成熟的是酶联免疫吸附试验（ELISA）及流式细胞技术，也是使用最多的PAIgG检测技术。ELISA法运用直接法测定PAIgG，血小板内免疫球蛋白和血浆中免疫球蛋白浓度均对其产生影响，可检出较多的非特异性抗体。近年来流式细胞术对于PAIgG的检测阳性率虽高，但特异性太低，因此对ITP的诊断无实质性意义[9]。
3ITP的血清蛋白组学
国内外已将蛋白组学用于血小板减少性紫癜疾病中，血栓性血小板减少性紫癜的血清蛋白组学研究发现其发病与血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS-13）活性有关。Jin M[18]等采用SELDI-TOF-MS技术分析了16例患者，发现ADAMTS-13活性为（1.73±3.62）%，而39例健康者的ADAMTS-13活性为（92.5%±16.6）%，从而为血栓性血小板减少性紫癜的快速诊断提供了一种可借鉴的检测方法。刘春燕等[19]也曾利用SELDI技术寻找到是质荷比为4121.27 5327.56 5890.56的ITP的血清差异蛋白，但由于血清中高表达蛋白如白蛋白、球蛋白可能使其中低丰度表达蛋白受到抑制，使得其差异性蛋白运用于ITP诊断的影响因素较多，为其诊断模型的建立带来困难。
4ITP的血小板蛋白组学研究
在ITP的发病过程中，血小板膜抗原性发生改变是疾病的根本所在，而且血小板无细胞核，比其他有核细胞及血清的蛋白成分简单。所以，ITP的血小板差异蛋白组学研究必将为ITP的实验室诊断研究掀开崭新的一页。Maguire PB 等[20]认为蛋白组学作为基因组学的补充，血小板蛋白组学对于无核细胞-血小板生理病理功能的了解具有极其重要的作用。Ofer Eidelman 等[21]运用质谱在血小板蛋白裂解液中找到一组具有性别差别的低丰度信号肽，而这组性别差异的低丰度信号肽差异与女性和男性之间心血管疾病患病正相关。E. maurer-spurej等[22]运用质谱法分析血小板蛋白组学，发现灰色血小板综合症-Quebec血小板疾病患者血小板存在15种正常人没有的蛋白质，而正常人则有23种Quebec血小板疾病患者缺乏的蛋白质，从而建立了第一个运用血小板蛋白组学来诊断疾病的方法。
5展望
正如其它细胞一样，血小板中蛋白质的变化能为我们提供疾病的新的诊断和治疗途径。多年来ITP无确切的实验室诊断方法,导致其在临床上早期诊断存在困难,我国卫生部曾就ITP的诊断问题在官网上公开招标(500万)课题以建立ITP的实验室诊断方法,但至今仍无实质性进展。ITP作为一种自身免疫性疾病，其血小板蛋白质成分及数量必然存在一定的改变，但是现目前国内外相关研究较少。因此，如何发现这些蛋白质的改变就成了我们今后的研究重点。血小板蛋白组学作为一门新兴的蓬勃发展的学科必将为ITP的诊断掀开崭新的一页。表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS）可直接对血液、尿液、脑脊液、细胞裂解液等样品进行检测，可发现和捕获新的特异性疾病相关蛋白，从而探索疾病早期最微小的指征和征兆。因此，通过比较不同疾患者群血小板裂解液蛋白质，可能筛选出ITP相关蛋白标志物。
参考文献：
[1]陆再英,等. 内科学[M].北京:人民卫生出版社,2008:648-651.
[2]Cines DB, Liebman HA. The Immune Thrombocytopenia Syndrome: A Disorder of Diverse Pathogenesisi and Clinicial Presentation[J]. Hematol Oncol Clin North Am,2009, 23(6): 1155-1161.
[3]Cines DB, Liebman HA，Stasi R. Pathobiology of secondary immune thrombocytopenic purpura[J]. Semin Hematol,2009,46(1 Suppl 2):S2-14.
[4]Zhou Z, Yang R. Rituximab treatment for chronic refractory idiopathic thrombocytopenicpurpura[J]. Crit Rev Oncol Hematol,2008,65(1):21-31.
[5]Zhou B, Zhou H, Yang RC, et al. Multi-dysfunctional pathophysiology in ITP[J]. Crit Rev Oncol Hematol,2005,54(2):107-116.
[6]赵春红，侯明.特发性血小板减少性紫癜的细胞免疫异常的研究新进展[J].中国实验血液学杂志，2006，14 （5）：1045-1048.
[7]侯明.成人ITP诊断和治疗专家共识[J].中华血液学杂志, 2009, 30 (9):574-575.
[8]Warner M，Kelton JG．Laboratory investigation of immune thrombocytopenia[J]．Clin Pathol，1997，50(5)：5-12．
[9]Chong BH，Ho sJ．Autoimmune thrombocytopenia[J]．J Thromb Haemost，2005，3(10)：1763-1772．
[10]Gerard Cagney ,James McRedmond. A Central Resource for Platelet Proteomics [J]. 2009-11-25, .
[11]王述文，等.血小板特异性抗体检测对血小板减少性紫癜鉴别的诊断意义[J].海南医学，2009，20(9):115-117.
[12]王谦.前瞻性评价单克隆抗体俘获血小板抗原技术对免疫性血小板减少症的诊断价值
[J].中华血液学杂志，2010，31(9):581-585.
[13]McGuire JN,Overgaard J,Pociot F.Mass spectrometry is only One piece of the puzzle in clinical proteomics[J].Brief Funct Genomic Proteomic, 2008,7(1):74-83
[14]张洋,李永哲.蛋白组学在自身免疫性疾病中的应用[J].基础与临床，2007，27（12）：1401-1403.
[15]Seny D，Fillet M.Discovery of new rheumatoid arthristis biomarkers using the surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry ProteinChip approach[J].Arthritis Rheum,2005,52(12):3801-3821
[16]Tomosugi N,Kitagawa K.Diagnostic potential of tear proteomic pattern in Sjogren's Syndrome[J].J Proteome Res,2005,4(3):820-825.
[17]Huber W,William H.Proteomic biomarkers for autoimmune disease[J]. Protemics, 2006, 6: 4100-4105.
[18]Jin M. A rapid test for the diagnosis of thrombotic thrombocytopenic purpura using surface
enhanced laser desorption/ionization time-of-flight (SELDI-TOF)-mass spectrometry [J].J Thromb Haemost,2006,4(2):333-338
[19]刘春燕.特发性血小板减少性紫癜患儿血清生物标志物的蛋白质组学研究[D].万方医学网，泸州医学院，儿科学，2008.
[20]Maguire PB, Fitzgerald DJ .Platelet proteomics[J]. Thromb Haemost,2003,1: 1593-1601.
[21]Ofer Eidelman,Catherine Jozwik,Wei Huang. Gender Dependence for a Subset of the Low-Abundance Signaling Proteome in Human Platelets[J]. Human Genomics and Proteomics 2010,1:1-14
[22]E. maurer-spurej, W. H. Kahr, C. J. Carter. The value of proteomics for the diagnosis of a platelet-related bleeding disorder[J]. Platelet disorder and proteomics,2008, 19(5): 342-351.