血管抑素对口腔鳞癌移植瘤抑制作用的研究

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【摘要】目的：（1）建立口腔鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型。（2）血管抑素(angiostatin)对口腔鳞癌移植瘤抑制作用的研究。方法：建立口腔鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型：将人Tca8113细胞系培养并接种至20只裸小鼠皮下，1周后移植瘤模型建立。再将裸鼠分为一个对照组和3个治疗组，治疗组用3个不同浓度重组人血管抑素干扰。对照组用PBS液注射。每周测量1次肿瘤大小。35天后取标本并称重。结果： rhAGN处理剂量为50 mg／(kg•d)、100 mg／(kg•d)和200mg／(kg•d)时，肿瘤体积分别为(4945±364)mm3、(2423±258)mm3和(472±48)mm3，与对照组相比，治疗组的体积和重量明显减小(P

【关键词】血管抑素；口腔鳞癌；移植瘤

文章编号：1009-5519（2007）15-2213-02 中图分类号：R73 文献标识码：A

The effect that angiostatin inhibits growth of transplanted tumor of oral squamous-cell carcinoma

JIANG Li-hui1，LIU Zhi-gang1，XIANG Rong2，et al.

(1.Department of Dentofacial Surgery，The Stomatological Hospital Affiliated to Chongqing Universtiy of Medical Sciences，Chongqing 400015，China；2.Huaihua New Hospital，The Secnond People's Hospital of Huaihua,Hunan 418000，China)

【Abstract】Objective：（1）To construct the model of transplanted tumor of oral squamous-cell carcinoma.(2)To study the effect that angiostatin inhibits growth of transplanted tumor of oral squamous-cell carcinoma.Methods:To construct the models of transplanted tumor of oral squamous-cell carcinoma.Tca8113 cells were cultivated and inoculated to twenty nude mice.A week later， the models of transplanted tumor of oral squamous-cell carcinoma were constructed.The twenty nude mice were divided into 4 groups，ie one control group and 3 treatment groups.The treatment groups bearing human Tca8113 were subcutaneously injected with different dose of rhAGN daily for 35 days，the size of tumor was measured every week .At the end of the treatment，all the speciment were dissected and weighed. The volume and weight of tumor were analyzed by statistics.Results:The volume of tumor was(4945±364)mm3，(2423±258)mm3 and(472±48)mm3 at rhAGN dose of 50 mg／(kg•d)，100 mg／(kg•d)and 200 mg／(kg•d) respectively；Compared with the control group，the volume and weight of tumor were significantly decreased(P

【Key words】Angiostatin；OSCC；Transplanted tumor

随着分子肿瘤学的发展，人们认识到肿瘤血管生成是实体瘤恶性转化、生长和转移的生物基础和重要环节[1]。因此，抑制肿瘤血管生成已成为一种新颖抗癌途径。血管抑素（Angiostatin）是血浆纤维蛋白溶酶原的内部片段，它是第一个被发现的肿瘤源性血管生成抑制因子，能特异性地抑制内皮细胞的增殖和迁移，并可进入血液循环对远离肿瘤部位产生作用。本研究即建立口腔鳞癌裸鼠移植瘤模型，用血管抑素治疗观察抑制移植瘤情况。

1 材料与方法

1.1 细胞株：Tca8113从华西医科大学细胞生化室购买。裸小鼠：5～7周龄BALB／C裸小鼠均为雄性，体重(20±2)g，购自北京医科大学实验动物中心，饲养于重庆医科大学实验动物中心。血管抑素：由晶美公司联系购买。

1.2 人舌癌Tca8113裸鼠移植瘤模型的建立：将人舌癌Tca8113细胞系用含体积分数为10％小牛血清的RPMI-1640大培养瓶中培养传代约6~7代历时约3周左右，已经达到20个200 ml大培养瓶铺满瓶底约达80％，细胞处于对数生长期，此时细胞的活力强，容易接种成功。 调整细胞浓度为2×107个/ml，分别用皮试针头接种于裸鼠右侧腋部皮下，每鼠为0．1 ml，l周后肿瘤可长至直径为10～20 mm，即建立人舌癌Tca8113裸鼠移植瘤模型。

1.3 血管抑素抑制肿瘤试验

1.3.1 试验分组：随机分成4组，每组5只为一笼。即1个对照组和3个治疗组。

1.3.2 标记裸鼠：手术用小剪刀，将5只中的4只裸鼠按左耳前、左耳后、右耳前、右耳后的耳缘处分别剪一个长约1 mm，深约2 mm的楔形切口，剩余的1只不剪。这样将同一笼中的5只裸鼠得以标记 。

1.3.3 血管抑素试验：治疗组每个裸鼠分别在远离肿瘤部位腹腔注射0．2 ml的rhAGN，剂量分别为50 mg/(kg•d)(T1)、100 mg/(kg•d)(T2)和200 mg/(kg•d)(T3)，对照组注射等量的PBS液。治疗期为35天，给药期间每1周用游标卡尺测量1次肿瘤最长径、最短径。

1.3.4 手术切除标本:断颈法失活裸鼠，取下肿瘤后测量长短径并称重。取每个肿瘤的一部分放入10%中性甲醛溶液中，以备后续的免疫组化，一部分放入RNA组织保存液以备后续的RT-PCR检测。

1.3.5 实验结果的判定方法[2]：口腔鳞癌移植瘤组织抑制结果判定按公式V=π／6[(A+B)/2]3(V为肿瘤近似体积，A为瘤体的最短径，B为瘤体的最长径)计算瘤体的近似体积。处死裸鼠后，称取体重和瘤重(mg)，计算抑瘤率(％)=(1-实验组平均瘤重／对照组平均瘤重)×100％。所有口腔鳞癌移植瘤组织形态变化结果数据均用x±s表示，采用t、r检验。应用SPSS(8.0)统计软件包进行统计分析。

2 实验结果

2.1 成功建立口腔鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型。

2.2 血管抑素对肿瘤体积及重量影响：见表1、2。

从表1可看出，对照组肿瘤生长迅速，增大明显，35天后瘤体积增加到(7932±541)mm3。T1、T2、T3治疗组肿瘤生长缓慢，体积明显缩小，与对照组相比，差异均有显著性(P＜0.01)，其中T2和T3治疗组效果更明显，且生长速度与rhAGN剂量呈负相关(r=-0.926，P＜0.01)。

rhAGN对人Tca8113移植瘤生长的抑制作用：从表2中可看出，各治疗组的肿瘤重量均显著低于对照组(P

3 讨论

口腔鳞状细胞癌(Oral squamous-cell carcinoma)占口腔颌面部恶性肿瘤的80%以上。ＯＳＣＣ具有局部侵袭、区域淋巴结转移、远隔转移的特性。尽管采用手术、放疗、化疗或综合治疗的手段，但其5年的生存率尚未能得到明显地提高。而抗肿瘤血管生成治疗为其提供一个好的治疗手段，作为最早发现抗肿瘤血管生成剂的血管抑素(angiostatin，AGN)是1994年美国哈佛大学医学院的0’Reilly等学者从荷瘤小鼠的血清和尿液中首次提纯出来的一种血管生成抑制剂。在血管抑素作用机制的研究中[3]，体外实验证实了血管抑素抗血管生成作用与其诱导的内皮细胞凋亡有关；血管抑素能特异性抑制内皮细胞增殖和迁移，并可进入血液循环，对远离肿瘤的部位作用，从而使肿瘤原发灶萎缩，并防止转移灶的生长。

血管抑素能明显抑制原发瘤和转移瘤的生长，是迄今为止最有效的内源性血管生成抑制剂。然而目前对rhAGN的最佳给药浓度、剂量与途径研究报道不多，应用于口腔颌面部的肿瘤治疗研究更少，为此，我们采用不同剂量的rhAGN治疗人Tca8113荷瘤裸小鼠，以探讨有效剂量。本实验结果证明rhAGN有抑瘤作用，小剂量即可抑制肿瘤的生长，并随着剂量的增加抑制效果更明显，其作用呈剂量依赖性。与对照组相比，治疗组的体积和重量明显减小(P

参考文献：

[1] 飞虎．肿瘤血管生成抑制因子及Endostatin研究进展[J]．安徽医药，2003，7(1)：5．

[2] 永芳，戴丽军，叶炳飞.重组人血管抑素对荷人CNE-l鼻咽癌裸鼠抑制作用的初步研究[J].广州医学院学报，2004，32（2）：8.

[3] amhan D，Folkman J．Pattems and emc，si mechanisms 0fthemlg switch dIlriIlgturaorigenesis[J]．Cel，1996，86：353．

[4] 蒋立辉 陈芳育 王涛 血管抑素的研究进展[J]．重庆医科大学学报，2006，31：33（增刊）.

收稿日期：2007-05-17