豫西脂尾羊的血清酯酶与体尺性状的关联分析

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摘要：运用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（PAGE）对豫西脂尾羊血清酯酶（Es）的多态性进行检测和分析。结果表明，在豫西脂尾羊上Es基因座有2个等位基因即Es+和Es-，而且Es+和Es-的基因频率别为0.55和0.45，有3种基因型Es+ +、Es+ -、Es- -，其频率分别为0.425、0.250和0.325。不同基因型西清酯酶对体尺的影响结果表明，在荐高方面，Es+ +基因型显著高于Es+-基因型（P0.05）。在胸围方面，Es+ +基因型极显著高于Es--基因型（P0.05）。Es对其他指标都无显著影响（P>0.05）。

关键词：豫西脂尾羊；血清酯酶；多态性

中图分类号：S826.8+9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）11-2846-03

DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2016.11.033

豫西脂尾羊在动物分类学中属牛科山羊亚科（Caprovinae）绵羊属（Ovis）[1]，系蒙系绵羊，源于中亚和远东地区，经过豫西人们长期驯化选育而成，因脂尾呈椭圆形，尾尖紧贴尾沟，将尾分为两瓣，下垂节之上；主要分布在原洛阳地区和原南阳地区北部，以临汝县最多，方城县次之，故定名为“豫西脂尾羊”。血液蛋白及同工酶多态性可用于研究畜禽品种遗传结构，探索品种的起源分化，亲缘关系[2]以及与经济性状的相关性，早期检测选种，缩短世代间隔，是血液生化遗传标记的最常用指标，在动物遗传标记领域一直占有十分重要的地位，对品种资源的保存和利用不但提供了有力的工具、有效的方法和丰富的研究资料等理论指导意义，而且在生产上有现实的使用价值[3]。目前，张才骏等[4，5]、马海明等[6]、杨永新等[7]、臧荣鑫等[8]对优良品种绵羊血液蛋白多态性进行了研究。杨俊年[9]、杨慈清等[10]研究表明，血清酯酶的多态性与绵羊生产性能有一定相关性。本研究主要对豫西脂尾羊血清酯酶的多态性进行分析，这对于揭示豫西脂尾羊的种质特性、亲缘关系、品种起源、进化历程等方面均有重要的学术价值，为豫西脂尾羊的选育提高和保种提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

采集40只纯种豫西脂尾羊的新鲜血样5 mL/只，肝素抗凝，低温带回实验室，室温下以1 500 r/min离心20 min，将上层血浆吸入灭菌小瓶，贴好标签置于-20 ℃的冰柜中保存。体尺测量包括体长、体高、荐高、胸围、胸深、胸宽、管围，测量均参考《家畜育种学》的方法测定[11]。

1.2 方法

按杨广礼[12]的方法制备凝胶，酯酶测定所用凝胶为8%分离胶和3.5%浓缩胶，淀粉酶测定所用凝胶为7.5%分离胶和4%浓缩胶，凝胶的配制成分及用量见表1。以160 V的电压进行15 min的预电泳，然后稳压200 V开始正式电泳，酯酶2.5～3.0 h，淀粉酶4.0～4.5 h。

血清酯酶：将电泳后的凝胶用蒸馏水漂洗后，放入酯酶的染色液（a-乙酸萘酯和β-乙酸萘酯各200 mg分别溶于10 mL丙酮和20 mL 0.15 mol/L的pH 7.5的磷酸缓冲液中，用前各取上清液10 mL再加入100 mg固蓝RR盐，用0.15 mol/L的磷酸缓冲液定容至100 mL），在37 ℃保温20 min，取出凝胶用无离子水冲洗，酶带呈紫色和褐色。置入7%的乙酸中保存。对Es的判型是按文献[13，14]的方法进行。即：在15 min以内出现褐色区带的为Es+ +型，虽然出现褐色区带但较模糊的为Es+ -，出现紫红色活性区带的为Es- -。

2 结果与分析

2.1 血清酯酶（Es）

血清酯酶（Es）在豫西脂尾羊中存在多态性，根据显带颜色将其判定为Es+ +、Es+ -和Es- -。血清酯酶3种基因型Es+ +、Es+ -、Es- -的基因型频率分别为0.425、0.250、0.325；血清酯酶有2个等位基因Es+和Es-，Es+和Es-的基因频率分别为0.55、0.45。豫西脂尾羊Es基因型频率和基因频率见表2，可见Es+基因是豫西脂尾羊的优势基因，其频率为0.55。而Es+ +基因型是豫西脂尾羊的优势基因型，其频率为0.425。

2.2 血清酯酶多态与体尺性状的关系

豫西脂尾羊的不同基因型血清酯酶对体尺指标（体长、体高、荐高、胸围、胸深、胸宽、管围）的影响结果见表3，不同基因型血清酯酶除了对荐高和胸围有显著影响外，对其他指标都无显著影响（P>0.05）。在荐高方面，Es+ +基因型显著高于Es+ -基因型，而两者均与Es- -基因型的荐高（61.00）没有显著差异。在胸围方面，Es+ +基因型极显著高于Es- -基因型，而两者均与Es+ -基因型没有显著差异。

3 讨论

酯酶有羧基酯酶、胆碱酯酶和芳基酯酶3种酯酶，但只有芳基酯酶（Arylesterase，Es）存在多态性[10]，因此，豫西脂尾羊血清酯酶指芳基酯酶。按照张才俊等[4]的研究结果，根据Es的基因频率可将绵羊分为两大类：一类是Es-占有绝对优势，其Es-基因频率在0.8～1.0之间；另一类的Es+和Es-基因频率大致相等，豫西脂尾羊的Es-基因频率是0.45，故应属于后一类绵羊。杨广礼[12]研究发现，Es在甘肃藏羊和小尾寒羊中的表型均为Es+ +、Es+ -、Es- -，该位点受一对共显性等位基因Es+、Es-控制，在甘肃藏羊中Es- -为优势基因型，频率为0.370 4，小尾寒羊中以Es- -为优势基因型，其频率为0.459 2。甘肃高山细毛羊、青海细毛羊、青海藏羊以Es+ -为优势基因型，而滩羊以Es+ +为优势基因型。如果以优势基因计算的话，小尾寒羊、青海细毛羊以Es-为优势基因；而甘肃高山细毛羊、青海藏羊、甘肃藏羊、滩羊以Es+为优势基因。在本研究中，Es在豫西脂尾羊中以Es+为优势基因，因此作为一个群体与其他群体不同的特殊蛋白位点，这与张慧茹等[15]的研究结果相一致。

杨俊年[9]和杨慈清等[10]研究表明，小尾寒羊Es+ +型的产羔数显著（P0.05）。不同基因型血清酯酶除了对荐高和胸围有显著影响（P0.05）。Es+ +基因型的荐高显著高于Es+ -基因型的荐高（P0.05）。Es+ +基因型的胸围显著高于Es- -基因型的胸围（P0.05）。

参考文献：

[1] 涂友仁，蒋 英，冯维棋，等.中国羊品种志[M].上海：上海科学出版社，1988.

[2] 陈周田，尹君亮，朱桂芝，等.阿垦肉用细毛羊血红蛋白多型性研究[J].新疆农业科学，1993（4）：171-173.

[3] 曹杯森，李金林，王辉暖，等.洼地绵羊血液蛋白HB和TF多胎性研究[J].畜牧兽医杂志，2001（4）：8-10.

[4] 张才骏，张武学，刘从明.引入青海的新疆细毛羊生化遗传多态性的研究[J].青海畜牧兽医学院学报，1995，12（1）：10-13.

[5] 张才骏，王 勇，卢 福.拉羊血清酯酶多态性及其与血液指标的联系[J].青海畜牧兽医杂志，2009，39（1）：1-3.

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[8] 臧荣鑫，杨具田，徐红伟，等.兰州大尾羊血液蛋白（酶）多态性的研究[J].中兽医医药杂志，2010（2）：21-23.

[9] 杨俊年.小尾寒羊血液蛋白（酶）位点上多胎性的比较研究[J].安徽农业科学，2007，35（33）：10626-10627.

[10] 杨慈清，李小英.小尾寒羊血清酯酶多态性及其与产羔性能关系的研究[J].安徽农业科学，2009，37（9）：4149-4150.

[11] 张 沅.家畜育种学[M].北京：中国农业出版社，2001.

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[13] 铃木正三.比较血型学[M].程光潮，韩建林，杨华林，等，译.北京：中国科学技术出版社，1991.

[14] 杨广礼，罗玉柱.小尾寒羊血液蛋白多态性与多羔性研究[J].甘肃农业大学学报，2004，39（4）：381-385.

[15] 张慧茹，魏智清，于洪川，等.宁夏滩羊血清酯酶同工酶与双羔性能的研究[J].甘肃畜牧兽医，1999，29（5）：9-10.