儿童呼吸道非典型病原体检测方法及评价

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摘要：目的 运用多种检测方法对儿童患者常见呼吸道非典型病原体进行检测与分析，为提高临床儿童呼吸道感染患者预后，提供相关疾病病因诊断依据。方法 应用间接免疫荧光法（IFA法）以及聚合酶链式反应（PCR法）对儿童常见9种呼吸道病原体的IgM抗体，同时应用胶体金免疫层析法（GICA法）对流感病毒抗原、快速培养法对肺炎支原体（MP）进行检测，并分析比较检测结果。结果 448例样本中，9种IgM抗体共检测出89例，阳性率达19.9%。其中应用GICA法检测Flu A和Flu B抗原与IFA法检测抗体总体一致率分别达99.1%和99.6%（Kappa值>0.75，一致性满意），培养法检测MP与PCR法总体一致率达98.2%（Kappa值>0.75，一致性满意）。结论 非典型病原体是儿童呼吸道感染的重要病原体，应用IFA抗体检测、流感病毒GICA抗原检测、MP快速培养法能够为临床提供早期诊断和正确治疗的依据。

关键词：儿童；呼吸道感染；非典型病原体；肺炎支原体

现今呼吸道感染是儿童的常见疾病[1]，引起呼吸道感染的这些病原体有着变异快，传播广，由于不易形成长期免疫力而难以防治与控制[2]。笔者采用IFA法以及PCR法对儿童常见9种呼吸道病原体的IgM抗体，GICA法对流感病毒抗原、快速培养法对MP进行检测，并分析比较检测结果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集我院自2010年3月～2012年12月收治的患有呼吸道疾病的儿童患者450例子为研究对象。其中男236例，女214例。年龄6d～13岁。病种包括：急性上呼吸道感染、急性支气管炎、肺炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、胸膜炎、发热待查等。

1.2检测方法 采用无菌静脉采血，血清样本采集后应及时冷藏，在血清收集好的8h内对嗜肺军团菌血清1型（LP1）、MP、QP、CP、腺病毒（ADP）、呼吸道合胞病毒（RSV）、Flu A、Flu B和副流感病毒1、2、3型（PIVs）9种病原体的IgM检测。用无菌棉签或者8号橡胶管将鼻咽部分分泌物收集[3]，并应立即对其进行MP、Flu A、Flu B进行检测。

间接免疫荧光法（IFA法）。应用间接免疫荧光法检测9种呼吸道感染病原体IgM抗体，试剂是由西班牙Vircell公司生产，从郑州安图生物公司购得。检测过程应严格按照说明书进行，并在荧光显微镜下观察，每次试验都应设有阴阳对照。

胶体金免疫层析法（GICA法）。所用流感病毒快速检测试剂盒（胶体金法）均购自北京阿斯可来生物工程有限公司，Flu A型（国药准字S20063095），Flu B型（国药准字S20063135），有效期内依据说明书使用。

聚合酶链式反应（PCR法）。选购北京师范大学生物研究院的诊断试剂盒。首先选取MP中相对保守的基因设计引物，然后将血清、PCR混合液、引物混合放入PCR管中。经历了DNA变性、退火、延伸后，将扩增产物于2%琼脂糖凝胶中电泳，紫外灯下观察结果，并设置阴阳对照，出现目的区带150bp的为阳性。

肺炎支原体快速培养法。选购河北微拉生物科技有限公司的支原体营养和增菌组合培养基，根据说明书使用方法在有效期内使用。

1.3统计学方法 应用SPSS 18.0软件建立数据库，并进行χ2检验，P

2 结果

2.1由IFA法测得9项呼吸道病原体IgM检出情况分析 448例样本中，9种IgM抗体共检测出89例，阳性率达19.9%（见表1）。

2.2GICA法测Flu与FIA法检测结果的比较 GICA法检测Flu A与FIA法检测相比较结果如表2所示，其中阳性一致率为91.3%，阴性一致率为99.5%，总体一致率为99.1%，算Kappa=0.87>0.75，两种方法检测所得结果一致性满意，经McNemar χ2检验得出，在α=0.05时，χ2=0，P>0.05，因此认为两种检测方法间无统计学意义。由同样的方法可得知，GICA法测Flu B与FIA法比较结果。GICA法对Flu B与FIA法检测比较结果，阳性一致率、隐形一致率、总体一致率分别为90.9%、99.8%、99.6%，算Kappa=0.89>0.75，两种方法检测所得结果一致性满意，经McNemar χ2检验得出，在α=0.05时，χ2=0.5，P>0.05，因此认为两种检测方法间无统计学意义（见表2）。

3 结论

IFA法是一种高效的、灵敏度高、便于临床使用、成本低廉的检测多种呼吸道病毒和非典型病原的方法。应用IFA抗体检测、流感病毒GICA抗原检测、MP快速培养法以及PCR法均为现今检测非典型病原体常用的方法，可根据环境条件的不同选择合适的检测方法，相信一定为临床提供早期诊断和正确治疗的依据。

参考文献：

[1]张泉，付光宇，李晓霞，等.呼吸道联检试剂在儿童不典型呼吸道感染中的应用研究[J].医药论坛杂志，2010，31（20）：171-173.

[2]刘国英，樊冒.反转录多聚酶链反应联合间接免疫荧光法对儿童下呼吸道非典型病原体感染早期诊断的意义[J].实用儿科临床杂志，2010，04（25）：269-270.

[3]吴泽刚，李艳，祝成亮，等.湖北地区儿童急性呼吸道感染病原体研究[J].中华医院感染学杂志，2011，10（21）：2129-2131.编辑/刘小燕